芍藥苷磷脂復合物的制備及表征

朱延焱，田偉強，黃繩武

（1.浙江省麗水市中心醫(yī)院臨床藥學室，浙江 麗水 323000； 2.浙江中醫(yī)藥大學藥學院，浙江 杭州 310053）

芍藥苷（paeoniflorin）是毛茛科植物芍藥 Paeonia lactiflora Pall.的主要活性成分，為單萜皂苷類成分，具有多途徑抑制自身免疫反應，以及抗炎、鎮(zhèn)痛、保肝等多種藥理作用，對類風濕性關節(jié)炎有確切的療效[1－2]。然而，芍藥苷胃腸道內(nèi)吸收差，口服生物利用度低，有研究報道，兔灌胃給藥芍藥苷口服生物利用度僅為7%左右[3]。磷脂復合物（phospholipid complex）是藥物和磷脂分子通過電荷遷移作用而形成的較為穩(wěn)定的化合物或絡合物，它可改變母體藥物的理化性質(zhì)，改善藥物的溶解性能，延長藥物作用時間，增加胃腸道內(nèi)的吸收，提高生物利用度，是近年來研究較熱門的新型給藥系統(tǒng)[4]。筆者根據(jù)芍藥苷與磷脂的特性，制備了芍藥苷磷脂復合物，并表征復合物的形成，以期改善芍藥苷的溶解性能，提高生物利用度。

1 儀器與試藥

傅里葉紅外光譜儀 Nexus670(美國 Nicolet公司)；TU－1800型紫外分光光度計（北京普析通用儀器設備有限公司）；85－2恒溫磁力加熱攪拌器（金壇市岸頭國瑞儀器廠）；THZ－C臺式空氣恒溫振蕩器（江蘇省海門市麒麟醫(yī)用儀器廠）。芍藥苷（寧波立華制藥公司，含量不低于90%）；芍藥苷標準品（中國藥品生物制品檢定所，110736－200933，含量 98.1% ）；大豆磷脂 Soybean Lccithin（pro oral，上海太偉藥液有限公司，國藥準字 XF20010206）。甲醇（上海陸都化學試劑廠，色譜純）；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 芍藥苷磷脂復合物的制備

精密稱取芍藥苷（含量90%）250 mg，加入適量的磷脂（大豆磷脂），混合投料。加入適量有機溶劑，于一定溫度下磁力攪拌，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)揮干溶劑。刮下，研細，即得芍藥苷磷脂復合物[5]。芍藥苷磷脂復合物為淡黃色的粉末，易吸濕。

制備工藝的質(zhì)量評價方法：以復合物的得率來評價復合物的制備工藝。芍藥苷水溶性較好，在水、甲醇、乙醇中溶解，而不溶于氯仿。利用芍藥苷在氯仿中不溶，而芍藥苷磷脂復合物在氯仿中溶解的特性。將一定量的芍藥苷磷脂復合物，加入適量的氯仿，充分溶解其中的磷脂及復合物，去除上清液，再用少量氯仿洗滌，收集沉淀(P)，干燥并稱重，即得未與磷脂結(jié)合的芍藥苷，芍藥苷初始投藥量(M)與沉淀量的差值即為與磷脂結(jié)合的芍藥苷，從而可通過以下式子計算出復合物的得率(Y)，Y＝[(M－P)／M]×100%。

2.2 單因素試驗

藥物與輔料投料比篩選：精密稱取不同比例的藥物與大豆磷脂，分別為 1 ∶1，1 ∶1.25，1 ∶1.5，1 ∶2，加入反應物質(zhì)量濃度為20 g／L的無水乙醇，室溫，磁力攪拌2 h，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)揮干溶劑。刮下，研細，即得。測定復合物的得率 Y。結(jié)果藥物與磷脂的比率為 1 ∶1，1 ∶1.25，1 ∶1.5，1 ∶2 時 的 得 率 分 別 為 56.66% ，74.11% ，76.75% ，77.09% 。隨著磷脂比例的增加，復合物的得率提高；當磷脂與藥物的比例大于1.5∶1，復合物的得率基本保持穩(wěn)定。但由于磷脂本身能促進藥物體內(nèi)吸收，故選擇藥物與磷脂1∶2的投料比。

反應溶劑的篩選：以無水乙醇、氯仿、二氯甲烷和丙酮來作為反應溶劑，篩選復合物制備的最佳溶劑。結(jié)果溶劑為無水乙醇、氯仿、二氯甲烷、丙酮時的得率分別為 75.73% ，67.95% ，77.28，55.47%?？梢娫诙燃淄榕c無水乙醇中復合物的得率較高，考慮到試劑的毒性，選用無水乙醇作為反應的溶劑。

反應溫度的篩選：一般來說，反應溫度越高，反應的速度越快，反應越完全，所用時間越少，但應考慮到高溫時藥物或磷脂的穩(wěn)定性，以室溫（25℃），40℃，60℃來作為反應溫度。在60℃下，用冷凝法使乙醇回流防止乙醇的揮發(fā)使反應溶劑減少。結(jié)果反應濕度為 25，40，60℃ 時的得率分別為 75.61% ，85.18% ，79.14% ?？梢?，隨著溫度的升高，復合物的得率增大，但是60℃時，復合物的得率反而下降。由于當反應處于較高溫度狀態(tài)下，長時間的反應，芍藥苷不穩(wěn)定而破壞分解所致。故本實驗選用反應溫度為40℃。

反應時間的篩選：考察反應時間為1，2，4 h時復合物的得率，結(jié)果分別為 80.57% ，79.14% ，83.38% 。可見，反應 1 h 與 2 h復合物的得率較為接近，當反應4 h以上，該反應較完全，得率為83.38%，選擇反應時間為4 h。

溶劑用量的篩選：考察了溶劑的用量對復合物得率的影響。選擇溶劑用量為反應物質(zhì)的質(zhì)量濃度為20，50，100 g／L 3個濃度，結(jié)果得率分別為 81.06% ，82.77% ，89.43% 。可見，溶劑用量越少，藥物在溶劑中的濃度越高，分子間的相互碰撞的幾率也越高，反應越完全，得率越高。當藥物在溶劑中濃度為100 g／L時，復合物的得率為89.43%，接近90%，反應較完全。故選用溶劑用量為反應物質(zhì)的量濃度為100 g／L。

單因素試驗結(jié)果表明，芍藥苷磷脂復合物最佳制備工藝為，無水乙醇作為反應溶劑，藥物與磷脂投料比為1∶2，反應時間為4 h，反應溫度為40℃，溶劑用量為反應物質(zhì)的量濃度為100 g／L。將最佳制備工藝重復，制備 3批樣品，得率分別為 88.33%，92.00%，87.94%。該芍藥苷磷脂復合物制備工藝穩(wěn)定、可靠、簡便。制備所得芍藥苷磷脂復合物為淡黃色粉末，氣微香，易吸濕。

2.3 芍藥苷磷脂復合物形成的結(jié)構(gòu)表征

紫外分光光度法(UV)：配制芍藥苷、物理混合物（芍藥苷與磷脂1∶2混合）、芍藥苷磷脂復合物的無水乙醇溶液。以無水乙醇為空白，于200～400 nm波長區(qū)進行紫外掃描。記錄紫外吸收圖譜以及最大吸收波長。結(jié)果見圖1。大豆磷脂在200～400 nm波長區(qū)無吸收峰，芍藥苷、物理混合物，磷脂復合物的紫外圖譜形狀類似，吸收峰均在230 nm處。表明磷脂復合物中芍藥苷成分的發(fā)色團的結(jié)構(gòu)未發(fā)生改變。

圖1 芍藥苷、復合物以及芍藥苷磷脂物理混合物的紫外吸收光譜圖

紅外光譜分析(IR)：將芍藥苷、磷脂、復合物以及物理混合物（芍藥苷和磷脂以 1∶2的比例混合）分別進行溴化鉀壓片。將藥物與溴化鉀以1∶20的比例于石英研缽中充分研勻，粒徑在2μm以下，制成溴化鉀窗片，測定其紅外吸收光譜。結(jié)果見圖2：形成復合物后，芍藥苷1 713 cm－1峰，為芍藥苷C＝O的伸縮振動峰，向高瀕區(qū)移動，移至 1 725 cm－1，而且峰形發(fā)生里變化，出現(xiàn)雙峰；而磷脂的1 736 cm－1，為磷脂的C＝O的伸縮振動峰，向低瀕區(qū)移動，移至 1 725 cm－1，而且出現(xiàn)雙峰。大豆磷脂中 1 466 cm－1處的吸收峰的峰形也發(fā)生改變，出現(xiàn)雙峰。將物理混合物的吸收峰與復合物的吸收峰做對比，復合物在1 315 cm－1，以及1 276 cm－1，1 177 cm－1，出現(xiàn)新的峰。芍藥苷結(jié)構(gòu)中的官能團與大豆磷脂中的某些部分發(fā)生了相互作用，生成新的復合物，復合物并不是磷脂與芍藥苷簡單的物理混合。

圖2 芍藥苷、磷脂、復合物以及物理混合物的紅外光譜圖

3 討論

筆者成功制備了芍藥苷磷脂復合物，并以單因素法優(yōu)化制備工藝，制備工藝穩(wěn)定、可靠、簡便。制備所得芍藥苷磷脂復合物為淡黃色粉末，氣微香，易吸濕，反應時尤其要注意環(huán)境濕度。一般來說，磷脂復合物的制備選用介電常數(shù)小的有機溶劑芳烴、鹵素衍生物以及環(huán)醚等非質(zhì)子傳遞溶劑，無水乙醇、丙酮、四氫呋喃、甲醇、二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、二氧六環(huán)等，通過加熱、攪拌、回流、超聲等方法制得復合物[6]。由于二氧六環(huán)ICH分類中屬于二類溶劑，毒性大，此外二氧六環(huán)沸點高，不易完全去除導致殘留在復合物中；四氫呋喃刺激性大，閃點低，易燃，考慮實驗室與實驗工作人員的安全性問題，故不予選擇。

本試驗以紫外紅外光譜、紅外光譜對新合成的復合物進行結(jié)構(gòu)表征。芍藥苷結(jié)構(gòu)中的官能團與大豆磷脂中的某些部分發(fā)生了相互作用，形成了新的復合物；而雙鍵結(jié)構(gòu)以及電子共軛系統(tǒng)并沒有發(fā)生很大的遷移以及變化，發(fā)色團的結(jié)構(gòu)未發(fā)生改變。此外，本研究曾嘗試采用差示掃描量熱法（DSC）與X－射線衍射實驗來表征復合物，由于芍藥苷是無定形粉末，在升溫過程中，發(fā)生的物理或者化學因素并未引起明顯的熱熵值的變化，芍藥苷DSC實驗沒有吸熱與放熱峰；X－射線衍射實驗。研究物質(zhì)的晶形以及不同晶形的轉(zhuǎn)化，芍藥苷與其磷脂復合物亦顯示無定形特征峰，故采用紫外與紅外光譜分析表征新的復合物形成。

復合物改善了芍藥苷的溶解性能，提高其脂溶性。水溶性好，生物膜滲透性能差是芍藥苷口服生物利用度低的重要原因之一，據(jù)報道，磷脂復合物能增加藥物在動物體內(nèi)的生物利用度[7－10]。本試驗制備的磷脂復合物有望成為改善其生物利用度的新制劑，結(jié)合芍藥苷的臨床應用現(xiàn)狀，需進一步研究其在動物體內(nèi)的藥代動力學，以及藥效與毒理學。

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