鐵線蓮屬蒙藥材薄層層析圖譜研究＊

李 驍，羅彩神，解紅霞，武旭芳

(內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010059)

鐵線蓮屬 Clematis L.隸屬于毛茛科，為多年生木質(zhì)或草質(zhì)藤本，或?yàn)橹绷⒐嗄净虿荼?，分布于世界各地，約300種，在我國(guó)各地均有分布[1]。內(nèi)蒙古地區(qū)有16種6變種[2]，經(jīng)本草考證[2－5]，其中入蒙藥的植物有芹葉鐵線蓮(Clematis aethusifolia)、黃花鐵線蓮 (C.intricata)、短尾鐵線蓮 (C.brevicaudata)、棉團(tuán)鐵線蓮(C.hexapetala)長(zhǎng)瓣鐵線蓮(C.macropetala)和辣蓼鐵線蓮(C.mandshurica又名東北鐵線蓮[6－7])。蒙醫(yī)臨床上，以芹葉鐵線蓮、黃花鐵線蓮和長(zhǎng)瓣鐵線蓮枝葉同等入蒙藥，蒙藥名為特木日·敖日秧古，味辛、微甘，性熱，破痞、助溫、燥“希日烏素”，治寒痞、積食、“希日烏素”癥等;短尾鐵線蓮莖入蒙藥，蒙藥名為奧日雅木格，味苦、性涼，清熱、止瀉、止痛，用于治療肝熱、肺熱、腸刺痛等;棉團(tuán)鐵線蓮和辣蓼鐵線蓮全草入蒙藥，蒙藥名為依日繪，味辛、微甘、性熱，破痞、助溫、燥“希日烏素”，用于治療寒痞、食積、水腫、寒瀉、瘡癰等[2，5]。以上6種鐵線蓮屬蒙藥的從藥性及功能主治方面，各有差異，不能等同。但由于來(lái)源于同科同屬不同種植物，親緣關(guān)系相近，原植物形態(tài)、藥材性狀及顯微特征方面相似，故臨床用藥混用、代用等現(xiàn)象較嚴(yán)重。目前報(bào)道的鐵線蓮屬藥材薄層研究主要以齊墩果酸或蘆丁為對(duì)照品，單獨(dú)地對(duì)棉團(tuán)鐵線蓮、芹葉鐵線蓮、威靈仙進(jìn)行定性鑒別[8－10]，而采用薄層色譜法系統(tǒng)地對(duì)上述6種鐵線蓮進(jìn)行鑒別還未見(jiàn)報(bào)道。本研究中采用硅膠薄層色譜法對(duì)上述6種鐵線蓮藥材的薄層色譜圖進(jìn)行分析，可對(duì)6種鐵線蓮藥材進(jìn)行準(zhǔn)確、快速鑒別，從而為臨床安全用藥提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

燒杯;量筒;冷凝回流裝置(數(shù)字恒溫水浴鍋，球形冷凝管，圓底燒瓶);抽慮裝置(抽濾瓶，布式漏斗，抽慮泵，濾紙);10 mL容量瓶;玻璃點(diǎn)樣毛細(xì)管(華西醫(yī)科大學(xué)儀器廠);層析缸;噴瓶;ZF－20D型暗箱式紫外分析儀(南京科爾儀器設(shè)備有限公司);薄層層析硅膠GF254(青島海洋化工廠);所用試劑均為分析純。于2009年至2011年藥材采收期采集6種鐵線蓮植物全草，置陰涼通風(fēng)干燥處儲(chǔ)存，蒙藥材原植物均經(jīng)筆者認(rèn)真鑒定，來(lái)源見(jiàn)表1。

表1 藥材來(lái)源及采集時(shí)間

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品提取

對(duì)每批次藥材分別精確稱取樣品各3份，每份5 g，適當(dāng)粉碎，分別用75 mL蒸餾水、75 mL 70%乙醇、75 mL 95%乙醇浸泡過(guò)夜，再分別將隔夜浸泡的藥材與溶劑轉(zhuǎn)移至圓底燒瓶，加熱回流1 h，趁熱抽慮，濾渣分別加入65 mL蒸餾水、65 mL 70%乙醇，65 mL 95%乙醇，回流0.5 h，趁熱抽慮，合并兩次濾液，水浴蒸干，加少量無(wú)水乙醇溶解，定容至10 mL容量瓶，備用。

2.2 提取方法選擇

取10 cm×20 cm硅膠板，分別點(diǎn)樣第1批樣品10 μL，預(yù)飽和15 min，以甲苯－乙酸乙酯－甲酸(20∶3∶1)橫向展開(kāi)，展距8 cm，25%硫酸水溶液顯色，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，圖譜見(jiàn)圖1。結(jié)果顯示，70%乙醇提取液展開(kāi)的點(diǎn)數(shù)目較多且斑點(diǎn)清晰，故優(yōu)先選用以70%乙醇溶液提取。

圖1 第1批藥材不同溶劑提取樣品圖譜

2.3 提取方法重復(fù)性與穩(wěn)定性研究

以70%乙醇提取芹葉鐵線蓮作重復(fù)性和穩(wěn)定性研究，分別稱取第1批芹葉鐵線蓮3份，每份5g，以70%乙醇浸泡，按2.1項(xiàng)下方法提取，存放時(shí)間分別為0，24，48 h，取10 cm×20 cm硅膠板，點(diǎn)樣 10 μL，展開(kāi)劑石油醚 －乙酸乙酯 － 丙酮(9∶3∶1)，預(yù)飽和15 min，展開(kāi)，展距13.8 cm，25%硫酸水溶液顯色，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，圖譜見(jiàn)圖2。結(jié)果顯示，斑點(diǎn)數(shù)目及清晰度一致，說(shuō)明該提取方法重復(fù)性和樣品穩(wěn)定性良好，故按2.1方法以70%乙醇提取第2批藥材。

圖2 芹葉鐵線蓮不同保存時(shí)間薄層圖譜

2.4 展開(kāi)系統(tǒng)選擇

以70%乙醇提取物為標(biāo)準(zhǔn)，分別對(duì)多種展開(kāi)系統(tǒng)進(jìn)行了試驗(yàn)，包括石油醚－乙酸乙酯－丙酮(9∶3∶1)，環(huán)己烷－乙酸乙酯－冰乙酸(12∶3∶1)，苯 －丙酮(3∶1)，三氯甲烷 －甲醇 －水(15∶3 ∶0.5)，乙酸乙酯 －甲醇 －甲酸 －水(8∶1∶1∶1)。經(jīng)檢視后發(fā)現(xiàn)，石油醚－乙酸乙酯－丙酮(9∶3∶1)和三氯甲烷－甲醇－水(15∶3∶0.5)系統(tǒng)可明顯區(qū)別出6種藥材，故以這兩種展開(kāi)系統(tǒng)作為優(yōu)選展開(kāi)系統(tǒng)。

2.5 藥材薄層圖譜鑒別

將兩批樣品點(diǎn)于同一張薄層板上(10 cm×20 cm)，展開(kāi)劑石油醚－乙酸乙酯－丙酮(9∶3∶1)展開(kāi)，展距8.0 cm，噴25%硫酸水溶液后加熱至100℃，至出現(xiàn)清晰斑點(diǎn)，日光下檢視，如圖3所示。再以氯仿－甲醇－水(15∶3∶0.5)為展開(kāi)劑，將兩批藥材點(diǎn)于同一張薄層板上(20 cm×20 cm)，展距17.0 cm，25%濃硫酸水溶液顯色后于365 nm紫外燈下檢視，如圖3所示。

圖3 兩批樣品薄層鑒別圖譜

以石油醚－乙酸乙酯－丙酮(9∶3∶1)為展開(kāi)劑，由圖譜可見(jiàn)，Q點(diǎn)(Rf=0.85)為辣蓼鐵線蓮所特有斑點(diǎn)，從而可以鑒別出辣蓼鐵線蓮。再以三氯甲烷－甲醇－水(15∶3∶0.5)為展開(kāi)劑，由圖譜可見(jiàn)，芹葉鐵線蓮獨(dú)有斑點(diǎn)A，長(zhǎng)瓣鐵線蓮比芹葉鐵線蓮只少了斑點(diǎn)A，棉團(tuán)鐵線蓮獨(dú)有B，F(xiàn)，G斑點(diǎn)，短尾鐵線蓮缺斑點(diǎn)C，黃花鐵線蓮C，D點(diǎn)都有，辣蓼鐵線蓮D，E，F(xiàn)，G點(diǎn)不明顯，經(jīng)過(guò)分析對(duì)比，從而辨別出了芹葉鐵線蓮、黃花鐵線蓮、短尾鐵線蓮、棉團(tuán)鐵線蓮、長(zhǎng)瓣鐵線蓮和辣蓼鐵線蓮，各斑點(diǎn)比移值，A點(diǎn)Rf=0.71，B 點(diǎn) Rf=0.57，C 點(diǎn) Rf=0.53，D 點(diǎn) Rf=0.46，E 點(diǎn)Rf=0.34，F(xiàn) 點(diǎn) Rf=0.26，G 點(diǎn) Rf=0.17。

3 討論

通過(guò)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，采用薄層色譜法，以石油醚－乙酸乙酯－丙酮(9∶3∶1)和三氯甲烷－甲醇－水(15∶3∶0.5)組合可以將6種鐵線蓮進(jìn)行很好的區(qū)分。通過(guò)溫度、濕度考察發(fā)現(xiàn)，在25℃、相對(duì)濕度50%下薄層層析效果最好，斑點(diǎn)清晰，Rf值穩(wěn)定。因此，本試驗(yàn)的層析圖譜均為這一條件下獲得的。在鐵線蓮屬蒙藥材中，6種鐵線蓮化學(xué)成分多有相同，但也有區(qū)別，臨床用藥存在混用、代用現(xiàn)象，因此通過(guò)簡(jiǎn)便、快捷的方式將其進(jìn)行鑒別具有重要的意義。本研究中主要通過(guò)薄層層析圖譜對(duì)6種鐵線蓮藥材進(jìn)行鑒別區(qū)分，而非進(jìn)行化學(xué)成分分析，因此未對(duì)其各個(gè)鑒別色點(diǎn)進(jìn)行定性分析。通過(guò)研究摸索出了適合于鐵線蓮屬6種蒙藥材鑒別的薄層色譜方法，并采用該方法鑒別出了6種蒙藥材，該方法快速、簡(jiǎn)便、實(shí)用、重復(fù)性好。

致謝:感謝內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)董玉教授的悉心指導(dǎo)和審閱。

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