開胃飲泡騰片的質(zhì)量標準研究

王慶文，徐振文，溫中明

(1.廣東省深圳市龍華新區(qū)龍華人民醫(yī)院，廣東 深圳 518109;2.廣東省深圳市光明新區(qū)人民醫(yī)院，廣東 深圳 518106)

山楂為薔薇科植物山里紅 Crataegus pinnatifida Bge.Var.major N.E.Br.或山楂 Crataegus pinnatifida Bge.的干燥成熟的果實，具有消食健胃、行氣散瘀、化濁降脂的作用，可用于肉食積滯、胃脘脹滿、瀉痢腹痛、瘀血閉經(jīng)、產(chǎn)后瘀阻、心腹刺痛、胸痹心痛、疝氣疼痛、高血脂癥[1]。自古以來，山楂就是健脾開胃、消食化滯、活血化痰的良藥。中醫(yī)成藥焦三仙、保和丸、山楂丸等均以山楂為主要成分[2]。山楂味酸甜，蘊含有大量人體必需的維生素、有機酸等，因此也經(jīng)常應用于制備各種飲料[3]。開胃飲是根據(jù)中醫(yī)藥理論開發(fā)的一種以山楂為主要原料的消食健胃的功能性飲料，其配方均為一些藥食兩用的中藥材。與一般的飲料形態(tài)不一樣，筆者把含山楂的配方經(jīng)適當?shù)奶崛饪s后制成泡騰片，從而解決了液體飲料攜帶不便、保質(zhì)期短的缺點。為控制其質(zhì)量，生產(chǎn)出穩(wěn)定的開胃飲泡騰片，筆者對其質(zhì)量標準進行了系列研究。報道如下。

1 儀器與試藥

Waters2695型高效液相色譜儀(美國，Waters公司)，包括四元泵，PAD二極管陣列檢測器，自動進樣器，Empower3.02 工 作站;SartoriusBP211D型十萬分之一電子天平(北京賽多利斯天平有限公司);KQ－500TDV型超聲清洗器(江蘇昆山市超聲儀器有限公司);Milli－Q型純水機(美國，Millipore公司)。乙腈、甲醇為色譜純(德國，Merck公司)，水為超純水，其余試劑均為分析純;山楂對照藥材(批號為121138－20101103)、熊果酸對照品(批號為110742－20120115，純度＞98%)均購自中國藥品生物制品檢定所。開胃飲泡騰片(實驗室自制)。

2 方法與結果

2.1 山楂薄層色譜鑒別

取開胃飲泡騰片6片，研成細粉，加入甲醇30 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液濃縮至2 mL，作為供試品溶液。另取山楂對照藥材粉末1 g，按上法處理，作為對照藥材溶液。取熊果酸對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法[1]試驗，分別吸取上述3種溶液各5 μL，分別點于同一以 0.2%羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯－乙酸乙酯－甲酸(20∶4∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以硫酸乙醇溶液(3→10)，105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液、對照品溶液色譜相應的位置上，顯相同紫紅色斑點;置紫外燈(365 nm)下檢視，顯相同的橙黃色熒光斑點。見圖1。

圖1 薄層色譜圖

2.2 有機酸含量測定

取開胃飲泡騰片2片，研成細粉，準確稱取粉末3.0 g，置小燒杯中，加入適量水溶解，過濾，濾液移至100 mL容量瓶中，加水定容。精密量取25.00 mL溶液，加酚酞指示劑1～2滴，用NaOH標準溶液(0.1 mol/mL)滴定至溶液呈微紅色，30 s不褪色，即得。記下NaOH用量，平行測定3份，計算每批有機酸的含量(每1 mL NaOH滴定液相當于6.404 mg枸櫞酸)[1]。10批次樣品測量結果見表2。依據(jù)測定結果暫訂本品每片(每片2.5 g)含有機酸以枸櫞酸計(C6H8O7)不得少于500 mg。

2.3 熊果酸含量測定

2.3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱:Waters Symmetry C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相乙腈 －甲醇 －水 －乙酸銨(75∶15∶10∶0.5);流速:1.0 mL/min;柱溫:25 ℃;檢測波長:220 nm;進樣量:20 μL。進樣前過 0.45 μm微孔濾膜。按熊果酸峰計算理論板數(shù)應該不低于6 000。色譜圖見圖2。

2.3.2 溶液制備

精密稱取熊果酸對照品適量，加甲醇配成1.0 g/L溶液，作為對照品溶液。取開胃飲泡騰片2片，研成粉末，混合均勻，精密稱取適量(約0.5 g)，置50 mL具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定重量，超聲處理40 min，取出，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。取不含山楂的陰性樣品，同法制備陰性對照品溶液。

圖2 高效液相色譜圖

2.3.3 方法學考察

線性關系考察:分別精密量取對照品溶液 1，2，4，6，8，12 mL，置20 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得0.05～0.6 g/L系列的對照品溶液。按上述色譜條件進樣分析，記錄色譜圖，測定峰面積，以對照品溶液質(zhì)量濃度(X)為橫坐標、峰面積積分值(Y)為縱坐標進行線性回歸，其回歸方程為 Y=2 241 X+236.5，r=0.9999(n=5)，結果表明在對照品溶液質(zhì)量濃度0.05～0.6 g/L范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關系。

精密度試驗:精密吸取高、中、低3個質(zhì)量濃度的對照品溶液20 μL，1 d內(nèi)重復進樣 6次，所得日內(nèi)精密度 RSD值分別為1.2% ，1.5% ，1.8% 。精密吸取高、中、低 3 個質(zhì)量濃度的對照品溶液20 μL，連續(xù)3 d內(nèi)重復進樣1次，所得日間精密度 RSD值分別為 1.0%，1.1% ，1.3%。

穩(wěn)定性試驗:精密吸取同一供試品溶液20 μL，分別于0，1，2，4，8，12 h 時進樣分析。結果熊果酸峰面積的 RSD 為 1.8%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復性試驗:按樣品測定項下方法，取同一批號開胃飲樣品分成6份，精密稱定，按供試品溶液項下方法制備，依法進樣分析。結果樣品平均含量為15.885 4 mg/g，RSD為1.8%，表明方法重復性良好。

加樣回收試驗:取同一批號(批號為20110701)已知含量的樣品共6份，精密稱定，加入一定量熊果酸對照品溶液，照上述供試品制備方法制備，測定熊果酸含量。結果見表1。

表1 回收率及精密度試驗結果

2.4 樣品含量測定

取10批樣品，依法制備供試品溶液，分別進樣分析，結果見表2。依據(jù)測定結果，暫訂每片含山楂以熊果酸(C30H40O3)計不得少于 12.0 mg。

表2 10批樣品含量測定結果

3 討論

山楂主要含黃酮類有機酸和三萜類等有效成分，其中金絲桃苷、熊果酸是山楂中黃酮和三萜類物質(zhì)的主要成分[4]。有機酸為山楂健胃消食作用的主要有效成分，主要包括枸櫞酸、蘋果酸、亞麻酸、棕櫚酸、丁烯二酸和亞油酸等[5]。因此，2005年版《中國藥典(一部)》有機酸的含量測定作為主要指標。特別是山楂在作為食品方面的應用時，有機酸含量的多少可直接影響產(chǎn)品的品質(zhì)。開胃飲泡騰片配方中除山楂含有大量的有機酸外，烏梅等也含有一定量的有機酸，因此通過控制總有機酸的含量，可以間接地控制配方中其他含有機酸成分的質(zhì)量。

山楂中有機酸類除含有枸櫞酸、蘋果酸、亞麻酸、棕櫚酸、丁烯二酸和亞油酸等外，還含有熊果酸，具有較好的藥理活性，是山楂類產(chǎn)品的主要藥效指標。因此，本試驗制劑的薄層色譜鑒別中選用熊果酸對照品和山楂對照藥材為對照，所獲譜圖斑點清晰，陰性無干擾，與一般的理化鑒別相比，專屬性大大增加，提高了制劑質(zhì)量的可控性。同時，建立了制劑中熊果酸的高效液相色譜(HPLC)含量測定方法，通過10批次產(chǎn)品熊果酸含量的分析，確定了熊果酸的含量限度。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:29.

[2]張英杰，苑述剛，洪振豐，等.山楂的中藥學及臨床文獻研究概述[J].現(xiàn)代中醫(yī)藥，2011，31(1):68 －70.

[3]柴軍紅，任 榮，柴小軍，等.山楂的應用研究進展[J].中國林副特產(chǎn)，2010(2):98－101.

[4]時巖鵬，丁杏苞.山楂化學成分的研究[J].中草藥，2000，31(3):173－174.

[5]麻銘川，顧正兵.野山楂水溶性部分化學成分研究[J].中國藥業(yè)，2003，12(12):35.