酒石酸美托洛爾緩釋微丸和緩釋片在健康人體內(nèi)的藥動學(xué)比較

程 娟 ，于 櫓 ，周建平 ，杭太俊 ，謝 俊

(1.南京金陵藥業(yè)股份有限公司技術(shù)中心，江蘇 南京 210009;2.中國藥科大學(xué)，江蘇 南京 210009)

酒石酸美托洛爾(MT)屬于心臟選擇性β－受體阻斷藥，對β1－受體有選擇性阻斷作用，無部分激動活性(PAA)，無膜穩(wěn)定作用，口服吸收迅速完全，可用于治療高血壓、心絞痛、心肌梗死等疾病。其阻斷β－受體的作用與普萘洛爾(PP)相似，對β1－受體的選擇性稍遜于阿替洛爾。美托洛爾對心臟的作用如減慢心率、抑制心肌收縮力、降低自律性和延緩房室傳導(dǎo)時間等，以及降低運動試驗時升高的血壓和心率的作用均與普萘洛爾、阿替洛爾相似[1]。微丸作為多單元型給藥系統(tǒng)的典型代表，具有單一單元型制劑不可比擬的諸多優(yōu)點，尤其是在緩釋制劑中的應(yīng)用。本試驗中，以西南藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)的酒石酸美托洛爾緩釋片(托西爾康)為參比制劑，以金陵藥業(yè)股份有限公司研制的酒石酸美托洛爾緩釋微丸(灌裝膠囊)為供試制劑，通過比較兩者單劑量給藥后的藥動學(xué)參數(shù)，考察其生物等效性并計算相對生物利用度?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

LC－20A型高效液相色譜儀，包括LC－20A泵、RF－10AXL熒光檢測器(日本島津公司);Sartorius電子分析天平(德國賽多利斯公司);1612－1型高速離心機;80－2型臺式低速離心機(上海醫(yī)療器械有限公司手術(shù)器械廠);320型pH酸度計(瑞士Mettler Toledo公司)。供試制劑為酒石酸美托洛爾緩釋微丸(金陵藥業(yè)股份有限公司技術(shù)中心提供);參比制劑為酒石酸美托洛爾緩釋片(商品名托西爾康，西南藥業(yè)股份有限公司);鹽酸普萘洛爾對照品(中國藥品生物制品檢定所);甲醇為分析純，磷酸、磷酸二氫鉀、NaOH、正己烷、二氯甲烷均為化學(xué)純水為自制純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 試驗設(shè)計

受試者入選標(biāo)準(zhǔn):男性;20～30歲;標(biāo)準(zhǔn)體重;血、尿常規(guī)，肝、腎功能正常;無藥物過敏史，無胃、十二指腸潰瘍;試驗前1個月未服用任何藥物;試驗期間禁煙、禁酒、禁喝茶及飲料，禁止服用其他藥物，統(tǒng)一進食標(biāo)準(zhǔn)餐。

給藥方案:采用雙周期雙交叉設(shè)計，試驗方案經(jīng)湖南省常德市第一中醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，受試者均簽署知情同意書。將12名健康志愿者隨機分成兩組，每組6人，禁食12 h后，分別口服供試制劑(2粒，100 mg)和參比制劑(2片，100 mg)，1周后交叉。

采血時間和點數(shù):禁食12 h后，200 mL溫水送服藥物，于服藥前和服藥后 1，2，4，6，8，10，12，16，24 h，由肘靜脈采血 5 mL，3 000×g離心5 min，取血清于－20℃冷凍保存至測定。

2.2 血漿樣品處理

取血漿 200 μL，置 10 mL離心管，加入 20 μL內(nèi)標(biāo)溶液(100 μg/mL 甲醇溶液)和 50 μL NaOH 溶液(1 mol/L)，室溫渦旋1 min;加入2 mL混合提取劑正己烷－二氯甲烷(4∶1，V/V)，渦旋3 min，3 000×g離心10 min，將上層有機相轉(zhuǎn)移至5 mL離心管中，室溫下N2吹干，以100 μL流動相復(fù)溶，3000×g離心10 min，取上清液進樣。

2.3 含量測定

2.3.1 色譜條件

色譜柱:Diamonsil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm，迪馬);流動相:0.68%磷酸二氫鉀緩沖鹽溶液(以磷酸調(diào)至pH=3)－甲醇(50∶50);檢測波長:Ex=230 nm，Em=300 nm;流速:1.0 mL/min;柱溫:30 ℃;進樣體積:20 μL。

2.3.2 溶液制備

精密稱取酒石酸美托洛爾25 mg，置50 mL容量瓶中，以蒸餾水溶解并稀釋至刻度，搖勻，配制成500 μg/mL的對照品貯備液。精密稱取鹽酸普萘洛爾10 mg，置100 mL容量瓶中，以甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，配制成100 μg/mL的內(nèi)標(biāo)溶液。

2.3.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗:由圖1可知，在擬訂的血漿處理方法和色譜條件下，酒石酸美托洛爾和鹽酸普萘洛爾峰形良好，無雜質(zhì)峰干擾。

線性關(guān)系考察:取空白血漿200 μL，加入不同質(zhì)量濃度的對照品貯備液，配制成質(zhì)量濃度為 10，20，50，100，200，500，1 000 ng/mL 的系 列 標(biāo)準(zhǔn)血樣，渦旋 3 min，依 2.2項下方法進樣。以質(zhì)量濃度(C)為橫坐標(biāo)、酒石酸美托洛爾與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值(F)為縱坐標(biāo)進行線性擬合，回歸方程為 F=0.011 5 C+0.205 6，r2=0.997 6(n=7)。結(jié)果表明，酒石酸美托洛爾質(zhì)量濃度線性范圍是10～1 000 ng/mL。

圖1 高效液相色譜圖

定量限確定:以流動相分步稀釋含藥血漿樣品，測定檢測下限和定量下限。結(jié)果表明，信噪比不低于3時最低檢測限為2 ng/mL，信噪比不低于10時最低定量限為5 ng/mL。

回收率試驗:取空白血漿200 μL，加入不同質(zhì)量濃度的對照品貯備液適量，依2.2項下方法配制成低、中、高3個質(zhì)量濃度(20，100，500 ng/mL)的樣品進樣，記錄峰面積 A1;另配制相同質(zhì)量濃度的對照品貯備液直接進樣，記錄峰面積 A2。提取回收率(%)=A1/A2×100%。取空白血漿200 μL，加入不同質(zhì)量濃度的對照品貯備液適量，依2.2項下方法配制成低、中、高3個質(zhì)量濃度(20，100，500 ng/mL)的樣品進樣，由標(biāo)準(zhǔn)曲線計算測得量。方法回收率(%)=W加入/W測定×100%。結(jié)果見表1?？梢?，低、中、高3個濃度的提取回收率和方法回收率分別在82%和102%左右，RSD均小于5%，符合體內(nèi)樣品分析方法的要求。

精密度試驗:取空白血漿200 μL，加入不同質(zhì)量濃度的對照品貯備液適量，依2.2項下方法配制成低、中、高3個質(zhì)量濃度(20，100，500 ng/mL)的樣品，分別于樣品配制后 0，2，4，6，8，10 h時測定質(zhì)量濃度并計算日內(nèi)精密度。同法測定并計算連續(xù)5 d的日間精密度。結(jié)果見表1?？梢?，低、中、高3個濃度的日內(nèi)和日間精密度 RSD均小于15%，符合體內(nèi)樣品分析方法的要求。

表1 測定方法的提取回收率及精密度試驗結(jié)果(n=6)

穩(wěn)定性試驗:依2.2項下方法配制含酒石酸美托洛爾低、中、高(20，100，500 ng/mL)3種質(zhì)量濃度的血漿樣品，置－20℃冰箱冷凍，反復(fù)凍融3次，室溫放置4 h后處理進樣。結(jié)果表明，酒石酸美托洛爾血漿樣品的凍融穩(wěn)定性良好，RSD均小于15%。

2.4 藥代動力學(xué)參數(shù)

12名健康受試者口服供試制劑和參比制劑后，測得的酒石酸美托洛爾平均血藥濃度－時間曲線見圖2。采用DAS 2.0軟件，分析供試制劑和參比制劑的血藥濃度經(jīng)時數(shù)據(jù)，計算主要藥動學(xué)參數(shù)，包括消除相半衰期(t1/2)、峰濃度(Cmax)、達峰時間(Tmax)、血藥濃度－時間曲線下面積(AUC)、平均駐留時間(MRT)等。計算相對生物利用度(F)。F=AUC供/AUC參×100%。結(jié)果見表2。Cmax及 AUC0－t在進行對數(shù)轉(zhuǎn)換后，采用交叉試驗設(shè)計的方差分析，分析藥物間、個體間及周期間變異的統(tǒng)計學(xué)意義。用雙向單側(cè) t檢驗，以DAS軟件進行計算，AUC以80% ～125%作為等效標(biāo)準(zhǔn)，Cmax以70% ～143%作為等效標(biāo)準(zhǔn)，顯著性水平α=0.05?？梢?，單劑量給藥，酒石酸美托洛爾緩釋微丸的平均相對生物利用度為(103.0 ±31.1)% ，logAUC0－t和 logCmax在制劑間、周期間均無顯著性差異，可認(rèn)為兩者具有生物等效性。

圖2 血藥濃度－時間曲線圖(n=12)

表2 主要藥動學(xué)參數(shù)(± s，n=12)

表2 主要藥動學(xué)參數(shù)(± s，n=12)

藥動學(xué)參數(shù)Cmax(ng/mL)Tmax(h)t1/2(h)AUC0－t[ng/(mL·h)]AUC0－∞[ng/(mL·h)]MRT(h)F(%)供試制劑70.12 ± 37.43 4±0 4.60 ± 0.77 666.35 ± 541.36 747.15 ± 575.05 9.43 ± 1.14 103.00 ± 31.1參比制劑63.93 ± 38.59 4±0 6.16 ± 2.11 630.19 ± 487.83 715.88 ± 499.18 10.31 ± 2.51

3 討論

酒石酸美托洛爾水溶性較大，因此難以制備成膜控型緩釋微丸，故多為骨架型或骨架與膜控相結(jié)合型微丸。本研究中的緩釋微丸是以乙基纖維素水分散體包衣制備的膜控型微丸，將其與緩釋片進行了健康人體內(nèi)的藥代動力學(xué)和生物等效性比較。

由于酒石酸美托洛爾存在首過效應(yīng)，體內(nèi)濃度較低，目前其體內(nèi)檢測方法包括氣相色譜法和高效液相色譜法，但前者樣品需衍生化處理、過程較煩瑣，而液相色譜法紫外檢測器的檢測限又較高(約為100 ng/mL)，不能滿足體內(nèi)分析的要求，故本研究選擇更為靈敏的熒光檢測器(檢測限5 ng/mL)。本研究中建立了酒石酸美托洛爾在人體的血藥濃度高效液相色譜－熒光檢測方法，方法簡便、靈敏，線性關(guān)系良好，提取回收率和精密度高，穩(wěn)定性好，樣品峰與雜質(zhì)峰分離較好，無干擾，適合人體內(nèi)血藥濃度檢測和藥代動力學(xué)研究。

酒石酸美托洛爾的體內(nèi)分析方法多為堿化血漿后以有機溶劑提取[2－4]，或以硫酸溶液反提有機溶劑[5]，本研究中采用堿化血樣后以正己烷－二氯甲烷提取的血樣處理方法。體內(nèi)分析中常采用加入內(nèi)標(biāo)的方法來校正樣品在提取過程的損失，洛爾類藥物有相似的母核結(jié)構(gòu)，而不同的側(cè)鏈取代使得其極性范圍廣，相同液相條件下出峰時間相差較多[6]。普萘洛爾出峰時間適宜(約12 min)，且不與空白血漿干擾，因此選其作為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)。

美托洛爾在人體內(nèi)主要由P450家族的CYP2D6酶氧化，其代謝呈異喹胍遺傳多態(tài)性分布，個體間差異較大，不同個體間的Cmax相差大[7－8]。本研究結(jié)果與文獻報道一致。因此，建議實現(xiàn)臨床個體化用藥，以提高藥效、降低不良反應(yīng)發(fā)生率。

市售酒石酸美托洛爾緩釋片為骨架型緩釋片，選其作為參比制劑。在本試驗中，緩釋微丸相較于緩釋片，Cmax提高，表明多單元型制劑在體內(nèi)可通過增加釋藥面積提高藥物吸收;AUC略有增大，表明相較于單一單元型緩釋制劑，多單元型緩釋制劑在體內(nèi)的長效緩慢釋藥更持久，血藥濃度的下降更平穩(wěn)。

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