胱抑素C、核因子－κB與老年高血壓患者血管重構(gòu)的相關(guān)性研究

李 郁，羅彩東

近年隨著對高血壓發(fā)病機(jī)制的深入研究，證實高血壓及其并發(fā)癥與血管重構(gòu)密切相關(guān)。高血壓狀態(tài)下，各種細(xì)胞因子的表達(dá)增加引起體內(nèi)前炎癥狀態(tài)的激活，促進(jìn)高血壓的進(jìn)展，加劇高血壓心肌纖維化及高血壓血管重構(gòu)。胱抑素C（Cys－C）是半胱氨酸蛋白酶抑制劑超家族中的成員之一，表達(dá)于所有單核細(xì)胞，可通過參與炎癥過程參與血管重構(gòu)。核因子－κB（NF－κB）作為一種血管炎性反應(yīng)的核心調(diào)控因子在心血管疾病中有重要作用。本研究通過檢測老年高血壓病人外周血胱抑素C及單核細(xì)胞NF－κB的表達(dá)，分析二者的相關(guān)性，并進(jìn)一步通過血管超聲心動圖探討胱抑素C、NF－κB與老年高血壓患者頸動脈、肱動脈血管重構(gòu)的相關(guān)性，為高血壓患者血管重構(gòu)的臨床診斷和治療提供相關(guān)理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對象 2011年9月—2012年9月在綿陽市中心醫(yī)院住院確診的老年原發(fā)性高血壓患者90例，入選標(biāo)準(zhǔn)按照2004年世界衛(wèi)生組織建議的高血壓診斷標(biāo)準(zhǔn)[收縮壓（SBP）≥140 mmHg（1mmHg＝0.133kPa），舒張壓（DBP）≥90mmHg]。以內(nèi)生肌酐清除率（Ccr）為標(biāo)準(zhǔn)，將90例原發(fā)高血壓患者分為腎小球濾過功能正常組42例（Ccr≥80mL／min），年齡60歲～83歲（69.4歲±6.9歲）；腎小球濾過功能異常組48例（Ccr＜80mL／min），年齡60歲～89歲（67.8歲±9.4歲）。所有研究對象均排除繼發(fā)性高血壓和假性高血壓病，除外合并冠心病、糖尿病、腦梗死、腫瘤、嚴(yán)重心力衰竭及嚴(yán)重肺部感染的患者。對照組為同期在我院門診行體檢的年齡、性別與以上兩組相匹配的健康人46名，年齡60歲～81歲（66.4歲±6.1歲）。入選標(biāo)準(zhǔn)：血壓均＜140／90mmHg，經(jīng)常規(guī)體格檢查、有關(guān)實驗室檢查和超聲心動圖檢查未發(fā)現(xiàn)心、肺、肝、腎等疾患。3組年齡、性別、體重指數(shù)（BMI）、高血壓家族史、吸煙飲酒史、血脂水平等差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

1.2 研究方法

1.2.1 Ccr測定 所有研究對象汞柱式標(biāo)準(zhǔn)袖帶血壓計測量右上臂血壓（不同時間測量3次，取平均值）；晨起空腹抽血測量血脂、血糖、肝腎功能。研究對象排空晨尿后，飲水500mL，留取1h尿液測定肌酐（Scr），Scr采用Jaffe速率法，Ccr＝[（140－年齡）×體重（kg）]／[0.818×Scr（μmol／L）]。

1.2.2 Cys－C檢測 早晨空腹抽取靜脈血4mL，離心分離血清測Cys－C，血Cys－C水平測定采用膠體金顆粒增強(qiáng)免疫比濁法，試劑為重慶中元生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。

1.2.3 外周血單個核細(xì)胞NF－κB P65蛋白表達(dá)檢測 單個核細(xì)胞的分離：采用FicoⅡ密度梯度離心法。瑞氏染色鑒定單個核細(xì)胞并進(jìn)行細(xì)胞活力檢測。制作單個核細(xì)胞涂片，自然干燥，冷丙酮（4℃）固定。免疫組化法檢測NF－κB P65蛋白表達(dá)：按免疫細(xì)胞化學(xué)染色試劑盒說明書進(jìn)行。結(jié)果判定：顯微鏡下細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核均出現(xiàn)棕黃色顆粒為NF－κB P65亞單位表達(dá)的陽性細(xì)胞。相差顯微鏡下，同一張蓋玻片，觀察不同視野，計數(shù)500個細(xì)胞中黃染陽性細(xì)胞數(shù)，計算百分?jǐn)?shù)即活化率。

1.2.4 血管超聲檢查

1.2.4.1 頸動脈超聲檢測 采用彩色多普勒超聲診斷儀，自頸動脈起始處作縱向掃查，依次顯示頸總動脈、頸總動脈分叉處、頸內(nèi)動脈和頸外動脈。所有指標(biāo)均測量左右兩側(cè)，取平均值。測量數(shù)據(jù)包括：①頸總動脈內(nèi)膜－中層厚度（intima－media thickness，IMT）。②頸動脈粥樣斑塊的測量：采用Crouse積分法。③管徑測量：頸總動脈（CCA）內(nèi)徑于CCA分叉前2cm處測量；距分叉膨大部以遠(yuǎn)1cm處分別測量頸內(nèi)動脈（ICA）、頸外動脈（ECA）內(nèi)徑。④血流參數(shù)測量：頸總動脈阻力指數(shù)（CCARI）、頸總動脈搏動指數(shù)（CCAPI）、頸內(nèi)動脈阻力指數(shù)（ICARI）、頸內(nèi)動脈搏動指數(shù)（ICAPI）。

1.2.4.2 肱動脈超聲檢測 患者取仰臥位，右上肢外展15°，縱向掃描肘上2cm～15cm的肱動脈，在心室舒張末期及收縮末期凍結(jié)肱動脈圖像，測3個心動周期，取3次檢測值的平均IMT值（GDMIMT）及收縮期肱動脈內(nèi)徑（GDMDs）、舒張期肱動脈內(nèi)徑（GDMDd）。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間對照采用單因素方差分析。兩兩比較采用q檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組一般資料、血清Cys－C含量及NF－κB活化率比較（見表1） 高血壓組中Cys－C含量及單個核細(xì)胞NF－κB活化率明顯高于正常對照組（P＜0.05）。高血壓腎功能異常組血清Cys－C含量及單個核細(xì)胞NF－κB活化率增高尤為明顯，與高血壓腎功能正常組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

表1 各組一般資料、血清Cys－C含量及單個核細(xì)胞NF－κB活化率比較（±s）

表1 各組一般資料、血清Cys－C含量及單個核細(xì)胞NF－κB活化率比較（±s）

組別 n Cys－C mg／L NF－κB活化率%年齡歲性別（例）男女BMI kg／m2正常對照組 46 0.78±0.25 12.79±3.14 66.4±6.1 20 26 22.08±1.85高血壓腎功能正常組 42 0.98±0.111） 16.32±3.591） 69.4±6.9 20 22 23.07±2.10高血壓腎功能異常組 48 1.14±0.221）2） 19.60±6.011）2） 67.8±9.4 29 19 23.28±2.46 F值 14.503 9.868 0.704 0.566 1.145 P Ccr mL／min正常對照組 25.00 25.00 4.08±0.66 1.95±0.46 98.02±16.55＜0.01 ＜0.01 ＞0.05 ＞0.05 ＞0.05組別 吸煙史%飲酒史%TC mmol／L LDL－C mmol／L高血壓腎功能正常組 42.10 37.84 4.11±0.67 2.02±0.60 89.82±13.38高血壓腎功能異常組 44.40 35.29 4.49±1.37 2.08±0.72 80.12±13.361）2）F值 0.780 1.647 1.019 0.172 6.595 P ＞0.05 ＞0.05 ＞0.05 ＞0.05 ＜0.05與正常對照組比較，1）P＜0.05；與高血壓腎功能正常組比較，2）P＜0.05

2.2 正常對照組與病例組血管重構(gòu)超聲測量指標(biāo)比較（見表2） 病例組的頸總動脈、頸內(nèi)動脈、肱動脈內(nèi)徑較正常對照組增寬，頸動脈血流收縮期、舒張期峰值流速均減慢，血管阻力指數(shù)、搏動指數(shù)增大。病例組肱動脈內(nèi)膜中層厚度較正常對照組明顯增厚。高血壓腎功能異常組頸動脈斑塊積分、頸動脈內(nèi)膜－中層厚度均明顯高于正常對照組，但高血壓腎功能正常組與正常對照組間無明顯差異。病例組中，腎功能異常組頸動脈斑塊積分 較腎功能正常組顯著增高，頸內(nèi)動脈收縮期、舒張期流速減慢。

表2 病例組與對照組超聲測量血管結(jié)構(gòu)與功能指標(biāo)比較（±s）

表2 病例組與對照組超聲測量血管結(jié)構(gòu)與功能指標(biāo)比較（±s）

組別 n CCADd（cm） CCAIMT（cm） CCASPV（m／s） CCAEDV（m／s）正常對照組 46 0.73±0.02 0.07±0.02 91.43±12.77 27.16±3.53高血壓腎功能正常組 42 0.77±0.531） 0.08±0.02 69.48±17.301） 17.37±4.931）高血壓腎功能異常組 48 0.75±0.84 0.09±0.021） 65.49±11.331） 16.96±2.741）F值 2.783 3.330 16.714 38.100＜0.05 ＜0.05 ＜0.01 ＜0.01組別 CCARI CCAPI ECADd（mm） CPS ICADd（mm） ICASPV正常對照組 0.70±0.01 1.33±0.05 0.44±0.02 0.02±0.06 0.58±0.03 70.05±9.89 P高血壓腎功能正常組 0.74±0.041） 1.60±0.201） 0.45±0.05 0.04±0.09 0.65±0.061） 62.53±20.391）2）高血壓腎功能異常組 0.75±0.481） 1.63±0.321） 0.45±0.05 0.22±0.241）2） 0.64±0.081） 51.88±9.211）F值 9.038 8.579 0.387 9.372 5.813 7.291＜0.01 ＜0.01 ＞0.05 ＜0.01 ＜0.05 ＜0.05組別 ICAEDV ICARI ICAPI GDMDs（cm） GDMDd（cm） GDMIMT（mm）正常對照組 26.97±2.25 0.61±0.03 1.23±0.06 0.37±0.02 0.39±0.02 0.37±0.04 P高血壓腎功能正常組 18.41±4.331）2） 0.68±0.051） 1.39±0.23 0.41±0.041） 0.42±0.031） 0.45±0.091）高血壓腎功能異常組 16.12±3.011） 0.70±0.061） 1.56±0.721） 0.42±0.041） 0.44±0.041） 0.43±0.061）F值 49.530 13.854 2.492 7.505 12.901 5.211＜0.05 ＜0.01 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05與正常對照組比較，1）P＜0.05；與高血壓腎功能正常組比較，2）P＜0.05 P

2.3 相關(guān)性分析（見表3） 血清Cys－C水平與外周血單個核細(xì)胞 NF－κB活化率呈顯著正相關(guān)（r＝0.657，P＜0.01），與內(nèi)生肌酐清除率呈顯著負(fù)相關(guān)（r＝－0.577，P＜0.01）。血清Cys－C水平、單個核細(xì)胞NF－κB活化率與患者頸動脈、肱動脈血管重構(gòu)的結(jié)構(gòu)與功能指標(biāo)，如頸總動脈內(nèi)徑，頸動脈、肱動脈內(nèi)膜－中層厚度，頸動脈斑塊積分，血管搏動指數(shù)、阻力指數(shù)等呈正相關(guān)。

表3 Cys－C水平、NF－κB活化率與外周血管結(jié)構(gòu)與功能相關(guān)性分析

3 討 論

近年隨著對高血壓發(fā)病機(jī)制的深入研究，證實高血壓及其并發(fā)癥與血管重構(gòu)密切相關(guān)。本研究中，高血壓患者隨著大血管外周阻力增加，血管壁剪切應(yīng)力增加，外周大動脈內(nèi)徑增寬，血管管壁IMT增厚，血管壁／腔比值增大，隨之產(chǎn)生血管功能異常，即血管重構(gòu)。高血壓并發(fā)癥的患病率和病死率主要與動脈壁的損害有關(guān)，而動脈壁的結(jié)構(gòu)和功能的改變甚至在高血壓的早期就已經(jīng)發(fā)生[1]。

本研究中，高血壓組Cys－C水平較正常對照組升高，且Cys－C水平同頸總動脈內(nèi)徑，頸動脈、肱動脈IMT，頸動脈斑塊積分，血管搏動指數(shù)、阻力指數(shù)等呈明顯正相關(guān)，說明Cys－C是影響血管重構(gòu)的因素之一，這與國外的研究報道[2]相吻合。高血壓組中，腎功能異常組Cys－C水平較腎功能正常組顯著增高，這與Ozer等[3]的研究吻合。監(jiān)測高血壓患者的Cys－C水平不但可以反映患者早期腎功能受損情況，也可從另一側(cè)面反映患者血管重構(gòu)發(fā)生的情況。

本研究發(fā)現(xiàn)，高血壓組患者外周血單核細(xì)胞NF－κB活化率較正常對照組明顯增高。NF－κB活化率與受試者的頸動脈與肱動脈內(nèi)徑、IMT等呈正相關(guān)，說明NF－κB活化同樣可能參與血管重構(gòu)的過程。NF－κB活化率與頸動脈的斑塊積分（CPS）有顯著的正相關(guān)關(guān)系，說明作為血管炎癥的關(guān)鍵性調(diào)控因子，NF－κB在動脈粥樣硬化斑塊形成方面有著其不可忽略的作用[4]。

本研究發(fā)現(xiàn)Cys－C與高血壓血管重構(gòu)有著密切的聯(lián)系，而NF－κB同樣是參與炎癥反應(yīng)的核心控制點。目前為止Cys－C參與血管重構(gòu)的信號傳導(dǎo)通路尚在研究中。本研究發(fā)現(xiàn)Cys－C與NF－κB水平呈正相關(guān)，他們有可能處于同一信號傳導(dǎo)通路上。高血壓一方面通過血管硬化的發(fā)生、炎癥刺激等因素使Cys－C產(chǎn)生相應(yīng)增加；另一方面因為腎缺血、缺氧等因素導(dǎo)致腎小球濾過率下降，Cys－C排出減少[3]。高血壓病患者常伴血清 Cys－C升高及頸動脈粥樣斑塊形成，血清Cys－C可能與升高的血壓協(xié)同，加重血管損傷，促進(jìn)動脈粥樣硬化進(jìn)展[5]。因此，在有效管理血壓的同時兼顧改善患者已存在的代謝異常，可能會延緩動脈硬化進(jìn)程。

胱抑素－C與核因子κB在高血壓的血管重構(gòu)中起著重要作用，由于本研究樣本含量的限制以及血液中Cys－C與NF－κB受到諸多因素的影響，二者在高血壓病理生理方面的作用有待于更大樣本以及組織、細(xì)胞水平的研究，進(jìn)一步探討二者之間信號傳導(dǎo)通路的具體機(jī)制，從而為臨床判斷高血壓血管重構(gòu)及預(yù)后提供簡便可行的診斷方法，并為早期抑制或延緩高血壓血管并發(fā)癥提供有效證據(jù)。

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[3]Ozer BA，Dursun B，Baykal A，etal.Can cystatin C be a better marker for the early detection of renal damage in primary hypertensive patients？[J].Ren Fail，2005，27（3）：247－253.

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