復(fù)方冰硼沖洗液體外抑菌效果的評(píng)價(jià)

史彥 楊健 陳浩

[摘要] 目的 評(píng)價(jià)純中藥制劑復(fù)方冰硼沖洗液和冰硼沖洗液對(duì)4種牙髓病原菌的體外抗菌活性。方法 采用瓊脂稀釋法，測(cè)定復(fù)方冰硼沖洗液和冰硼沖洗液對(duì)4種厭氧病原菌牙齦卟啉單胞菌、中間普氏菌、具核梭桿菌和糞腸球菌的最小抑菌濃度（MIC）和最小殺菌濃度（MBC）。結(jié)果 2種沖洗液對(duì)4種厭氧病原菌均有抗菌作用，復(fù)方冰硼沖洗液的抗菌性優(yōu)于冰硼沖洗液。糞腸球菌的抗藥能力明顯強(qiáng)于其余3種菌株。結(jié)論 純中藥制劑復(fù)方冰硼沖洗液具有良好的抗菌性，作為根管沖洗液可能是有優(yōu)勢(shì)的。

[關(guān)鍵詞] 復(fù)方冰硼沖洗液； 根管沖洗； 抗菌性

[中圖分類(lèi)號(hào)] R 739.86 [文獻(xiàn)標(biāo)志碼] A [doi] 10.7518/hxkq.2013.04.006

根管內(nèi)的細(xì)菌在牙髓和根尖周病中扮演重要的角色。根管治療的成功取決于根管內(nèi)感染的有效控制。根管沖洗是根管治療的重要步驟，能有效去除根管內(nèi)病原菌、殘髓和牙本質(zhì)碎屑，維持根管的清潔和非感染狀態(tài)。根管沖洗液的種類(lèi)很多，但都存在一定缺陷。中藥具有獨(dú)特的清熱解毒、消腫止痛作用，且毒副作用小，作為根管沖洗液有其優(yōu)勢(shì)；但目前多數(shù)研究[1-2]尚停留在成品中藥制劑上，其制劑的水溶液呈黃色，會(huì)對(duì)白色的牙體組織產(chǎn)生一定的染色作用，影響美觀。本研究將白色中藥——復(fù)方冰硼和冰硼按中醫(yī)組方的原則進(jìn)行配制，制成根管沖洗液，探索用于感染根管沖洗消毒的可行性。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)藥物的配制和分組

Ⅰ組：復(fù)方冰硼沖洗液，由冰片、硼砂、玄明粉、白芷、細(xì)辛共5味中藥配制而成；Ⅱ組：冰硼沖洗液，由冰片、硼砂、玄明粉與蒸餾水稀釋而成。2種沖洗液均由江西省中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院配制。

1.2 實(shí)驗(yàn)菌株

實(shí)驗(yàn)菌株由口腔疾病研究國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（四川

大學(xué)）提供，共4種：牙齦卟啉單胞菌ATCC 33277，中間普氏菌ATCC 25611，具核梭桿菌ATCC 25286，糞腸球菌ATCC 19433。質(zhì)控菌株為脆弱擬桿菌ATCC 25285。

1.3 儀器設(shè)備

DY-2型厭氧培養(yǎng)箱（浙江義烏冷凍機(jī)總廠），細(xì)菌多點(diǎn)接種儀（SAKUMA公司，日本），PB-10系列

pH計(jì)（北京賽多利斯天平有限公司）。

1.4 含藥瓊脂平皿的配制和藥物實(shí)驗(yàn)液的配制

選用牛心腦浸液-輔助瓊脂（beef heart infusion-

supplemented broth，BHI-S）（OXID公司，英國(guó)）培養(yǎng)

基作為實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基。分別取復(fù)方冰硼沖洗液和冰硼沖洗液，按照不同的體積比與溫度為45～55 ℃的BHI-S瓊脂混勻后傾注于無(wú)菌平皿中，配制成對(duì)倍遞減的系列實(shí)驗(yàn)藥物平板，冷卻凝固后使用。將復(fù)方冰硼沖洗液和冰硼沖洗液的原液定為1（100%），藥物

平板的稀釋倍數(shù)及相應(yīng)的稀釋后體積分?jǐn)?shù)分別為：2（50%）、4（25%）、8（12.5%）、16（6.25%）、32（3.1%）、

64（1.6%）、128（0.8%）、256（0.4%）、512（0.2%）、

1 024（0.1%）。

1.5 實(shí)驗(yàn)菌液的準(zhǔn)備

在BHI-S瓊脂表面復(fù)蘇并純化4種實(shí)驗(yàn)菌株，置于80%N2、10%CO2、10%H2條件下37 ℃培養(yǎng)48 h，取純培養(yǎng)物接種于BHI肉湯培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件同前，校正菌液密度為每毫升1.5×108個(gè)細(xì)胞，備用。

1.6 藥物抑菌效果的評(píng)估指標(biāo)和測(cè)定方法

最小抑菌濃度（minimum inhibitory concentration，MIC）：肉眼觀察無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，即振搖后實(shí)驗(yàn)管內(nèi)液體清亮無(wú)渾濁或無(wú)沉淀生長(zhǎng)，且涂片檢查無(wú)細(xì)菌存在，血平板培養(yǎng)小于7個(gè)菌落形成的最低藥物稀釋體積分?jǐn)?shù)為該藥的MIC。最小殺菌濃度（minimum bac-tericidal concentration，MBC）：肉眼觀察無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)的試管培養(yǎng)物，涂片檢查無(wú)細(xì)菌存在，血平板培養(yǎng)無(wú)菌落形成的最低藥物稀釋體積分?jǐn)?shù)為該藥的MBC。

用細(xì)菌多點(diǎn)接種儀分別取實(shí)驗(yàn)菌液（細(xì)菌密度為每毫升1.5×108個(gè)細(xì)胞）點(diǎn)種于不同稀釋體積分?jǐn)?shù)的系

列含藥瓊脂平皿表面，然后放置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)后（培養(yǎng)條件同前）讀取MIC和MBC結(jié)果。

1.7 溶液的pH值

用蒸餾水沖洗pH計(jì)電極，擦干，將電極置于2種藥物的原液溶液中測(cè)其pH值。

2 結(jié)果

復(fù)方冰硼沖洗液和冰硼沖洗液原液的pH值分別為9.44和9.12；對(duì)4種厭氧菌株的MIC和MBC測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1和圖1：2種沖洗液對(duì)4種厭氧菌均有抗菌作用，復(fù)方冰硼沖洗液的抗菌效果更好。

3 討論

感染根管中是以厭氧菌為主的混合感染。劉長(zhǎng)虹等[1]從臨床感染根管的樣本中檢出的優(yōu)勢(shì)菌有牙

齦卟啉單胞菌、中間普氏菌、具核梭桿菌、韋榮菌、消化鏈球菌、口腔擬桿菌、放線菌、乳桿菌等。糞腸球菌有致病潛力，對(duì)牙髓治療抵抗性強(qiáng)，經(jīng)常出現(xiàn)在根管治療失敗和持續(xù)性根尖周炎病例中[3]。據(jù)

此，本實(shí)驗(yàn)選擇了感染根管的3種優(yōu)勢(shì)菌（牙齦卟啉單胞菌、中間普氏菌、具核梭桿菌）和1種頑固菌（糞

腸球菌），來(lái)評(píng)價(jià)沖洗液的消毒效果。

目前最常用的根管沖洗液是次氯酸鈉（NaClO）溶液和乙二胺四乙酸（ethylenediamine tetraacetic acid，EDTA）溶液，另外還有過(guò)氧化氫、氯己定、MTAD、氯亞明、抗生素、碘伏、生理鹽水等。NaClO具有良好的抗菌性和組織溶解性，價(jià)格便宜，使用期限長(zhǎng)，缺點(diǎn)是毒性大，氣味難聞，能漂白衣服，有潛在腐蝕性，有過(guò)敏現(xiàn)象。EDTA能去除根管壁玷污層，具有良好的清潔性，還能抗真菌和糞腸球菌，但使用過(guò)多會(huì)降低牙本質(zhì)硬度。過(guò)氧化氫能有效殺滅厭氧菌，同時(shí)有發(fā)泡作用，利于根管內(nèi)碎屑的排出，但對(duì)牙髓組織無(wú)溶解性，沖出根尖孔能引起氣腫。氯己定具有廣譜抗菌性，毒性低且無(wú)耐藥性，但不具有組織溶解能力。MTAD是由四環(huán)素同分異構(gòu)體、乙酸和Tween80去污劑組成的混合液，具有抗糞腸球菌能力，細(xì)胞毒性低，能有效去除玷污層，但不能有效殺滅真菌。氯亞明具有抑菌殺菌性能，但對(duì)組織的刺激和毒性大?？股鼐哂袧撛谶^(guò)敏性和細(xì)菌耐藥性，不推薦在根管治療中常規(guī)使用。碘伏具有廣譜殺菌作用，其性質(zhì)穩(wěn)定、刺激性小、毒性小、無(wú)抗原性，但其原液呈黃色，易使牙體組織染色，也有可能過(guò)敏。各種沖洗液存在一定的優(yōu)缺點(diǎn)，目前尚無(wú)一種非常理想的沖洗液。

本研究將成熟的中藥——冰硼散（剔除朱砂成

分）引入口腔醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，并根據(jù)中藥的藥性特點(diǎn)，加入白芷和細(xì)辛，按照中醫(yī)組方的原則配制出白色的復(fù)方冰硼沖洗液和冰硼沖洗液。冰硼散是用冰片配伍硼砂、朱砂、玄明粉研磨而成，具有良好的解毒、消腫、止痛作用。質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5%的冰片對(duì)葡萄球菌、鏈球菌、肺炎雙球菌、大腸桿菌及部分致病性皮膚真菌等有抑制作用。硼砂主要含四硼酸鈉，能清熱解毒、消腫防腐。玄明粉主要含無(wú)水硫酸鈉，具有消腫散結(jié)等功效。白芷主要含揮發(fā)油，能解表散寒、消腫排膿。細(xì)辛含揮發(fā)油，其主要成分為甲基丁香油酚，具有解熱、抗炎、鎮(zhèn)靜、抗驚厥及局部麻醉作用[4]。5味天然中草藥物合成的復(fù)方制劑，具有清熱、解毒、消腫止痛等功能，其消毒、殺菌作用強(qiáng)，毒副作用小。

本實(shí)驗(yàn)中，復(fù)方冰硼沖洗液和冰硼沖洗液對(duì)牙齦卟啉單胞菌、中間普氏菌、具核梭桿菌和糞腸球菌均有抗菌作用，而復(fù)方冰硼沖洗液較冰硼沖洗液的抗菌效果更明顯。筆者分析，這是由于白芷和細(xì)辛的加入增加了復(fù)合制劑的藥效之故。此外，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，糞腸球菌的耐藥性強(qiáng)于其余3種菌株，這是因?yàn)榧S腸球菌擁有一些毒力因子，如溶解酶、胞嘧啶、凝聚物、外激素等[5]，能抵抗氫氧

化鈣的高pH值和其他根管內(nèi)藥物，并能在少量營(yíng)養(yǎng)物的環(huán)境中存活，具有忍受長(zhǎng)期饑餓的能力[6]。

根管沖洗液的抗菌作用與其濃度、pH值、溫度等有關(guān)，藥物濃度、pH值、溫度越高，殺菌效果越明顯[7]。根管沖洗液在根管內(nèi)可提高局部pH值，使

主根管和側(cè)支根管牙本質(zhì)小管內(nèi)的細(xì)菌在堿性環(huán)境中失去活力。復(fù)方冰硼沖洗液的pH值為9.44，冰硼沖洗液為9.12，均具有強(qiáng)堿性，殺菌效果明顯。

筆者[8]在前期研究中探討了復(fù)方冰硼沖洗液的清潔性能，本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)了其抗菌性。中藥來(lái)源廣泛，性質(zhì)溫和，具有獨(dú)特的清熱消毒止痛作用，費(fèi)用低，有效期長(zhǎng)，且毒副作用小，無(wú)細(xì)菌耐藥性[9]。復(fù)方冰硼沖洗液作為根管沖洗液有積極的應(yīng)用前景。

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（本文編輯 吳愛(ài)華）