中晚期肺腺癌化療前后患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平變化

王曙光，王慶華，呂坤聚，楊銀榮

近年的流行病調(diào)查數(shù)據(jù)顯示，肺癌是我國(guó)人群中發(fā)病率和病死率上升最快的癌癥[1]。衛(wèi)生部最新公布的死因調(diào)查結(jié)果中，肺癌居我國(guó)癌癥死因首位，占全部癌癥死因的22.7%，與20世紀(jì)70年代相比，我國(guó)癌癥病死率上升4.65倍。培美曲塞（pemetrexed，PEM）是一種新型的多靶點(diǎn)抗葉酸制劑，和順鉑聯(lián)合應(yīng)用已經(jīng)成為標(biāo)準(zhǔn)的非小細(xì)胞肺癌一線化療方案[2]。研究發(fā)現(xiàn)多種癌癥患者外周血T淋巴細(xì)胞存在數(shù)量變化，并且與多數(shù)腫瘤的進(jìn)展和預(yù)后有關(guān)[3]。本研究通過(guò)流式細(xì)胞技術(shù)對(duì)2009—2011年收治46例確診中晚期肺腺癌化療前后外周血各亞類T淋巴細(xì)胞：CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比例。結(jié)合臨床特征，探討T淋巴細(xì)胞亞群及化療效果的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 46例均為 2009￣01—2011￣12筆者所在醫(yī)院住院患者。均經(jīng)病理診斷證實(shí)為肺腺癌。所有患者均符合以下標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)NCCN（第7版）分期標(biāo)準(zhǔn)判定為Ⅲb期或Ⅳ期；ECOG評(píng)分≤2分；治療前檢查血象、肝腎功能基本正常，無(wú)嚴(yán)重心臟病和其他合并癥；明確治療前未接受過(guò)全身化療、放療、手術(shù)或免疫治療；預(yù)計(jì)生存期>3個(gè)月。46例患者中男24例，女22例；年齡35～70歲，中位年齡52歲。ECOG評(píng)分0～1分42例，2分4例。吸煙者10例，不吸煙者36例。Ⅲ期患者36例，Ⅳ期患者10例。對(duì)照組：健康志愿者38人，男21人，女17人；年齡18～58歲，平均36.7歲。

1.2 化療方法 用藥前1周開(kāi)始給予口服葉酸400 μg/d，貫穿整個(gè)療程。用藥前1周給予維生素B121000 μg肌肉注射1次；以后肌肉注射1次/9周。用藥前1 d，當(dāng)天，后1 d給予地塞米松4 mg口服，2次/d。PEM 500 mg/m2，靜脈滴注，第1天；順鉑75 mg/m2，靜脈滴注，第1天；21 d為1個(gè)周期。

1.3 淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)

1.3.1 儀器和試劑 BD FACSCalibur流式細(xì)胞儀、溶血素、流式上樣管和T淋巴細(xì)胞亞群三色抗體 （CD3-PerCP/CD4-FITC/CD8-PE）均購(gòu)自BD公司。所有試劑4～8℃貯藏，有效期內(nèi)使用，用前室溫平衡30 min。

1.3.2 標(biāo)本采集 對(duì)照組每人抽血2 ml/次；治療組化療第1療程前1 d及第2療程化療的第4周末各抽血2 ml，EDTANa抗凝，標(biāo)本立即送檢。

1.3.3 流式細(xì)胞檢測(cè) 向3組已編好號(hào)的上樣管中分別加入20 μl T淋巴細(xì)胞亞群三色抗體；再分別向試管中加入混勻的 50 μl抗凝血；混勻，避光，室溫孵育 15～20 min；溶血?jiǎng)? ml加入試管，避光10 min；上機(jī)測(cè)樣。根據(jù)前向光散射和側(cè)向光散射收集的細(xì)胞分布圖，自動(dòng)圈定淋巴細(xì)胞群，并對(duì)其表型進(jìn)行檢測(cè)、分析。

2 結(jié)果

與對(duì)照組比較，化療前肺腺癌組 CD3+、CD4+、CD4+/CD8+明顯低下（P<0.01）；化療前肺腺癌組 CD8+明顯增高（P<0.01）。與化療前組比較，化療后肺腺癌組CD4+、CD4+/CD8+明顯增高（P<0.01）；化療后肺腺癌組CD8+略微降低，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。與對(duì)照組比較，化療后肺腺癌組CD4+、CD4+/CD8+明顯低下（P<0.01）；化療后肺腺癌組CD8+明顯增高（P<0.01）。見(jiàn)表1。

表 1 對(duì)照組與肺腺癌組患者化療前后淋巴細(xì)胞亞群（±s）

表 1 對(duì)照組與肺腺癌組患者化療前后淋巴細(xì)胞亞群（±s）

注：與對(duì)照組比較，*P<0.01；與化療前比較，#P<0.01

項(xiàng)目 對(duì)照組 肺腺癌組化療前 化療后CD4+ 42.21±2.32 28.25±3.33* 31.36±2.67#CD8+ 24.42±1.20 29.22±2.34* 28.13±1.39*CD4+/CD8+ 1.55±2.18 0.98±1.22* 1.12±1.22#

3 討論

培美曲塞是一種新的多靶點(diǎn)抗葉酸化療藥物，主要通過(guò)干擾細(xì)胞復(fù)制過(guò)程中葉酸代謝途徑而發(fā)揮抗腫瘤作用。培美曲塞通過(guò)對(duì)關(guān)鍵酶活性進(jìn)行多靶點(diǎn)抑制，減少嘌呤和胸腺嘧啶核苷的生物合成，從而影響腫瘤細(xì)胞和RNA的合成[4]。培美曲塞聯(lián)合順鉑對(duì)非磷非小細(xì)胞肺癌有很好療效。

機(jī)體免疫功能低下，或者腫瘤細(xì)胞變異產(chǎn)生的免疫逃逸，是腫瘤產(chǎn)生和發(fā)展的必要條件。而腫瘤的發(fā)展又會(huì)抑制機(jī)體的免疫功能，因此機(jī)體免疫功能狀態(tài)對(duì)腫瘤的發(fā)展和預(yù)后具有重要的作用[5]。

最近研究證明，T淋巴細(xì)胞在抗腫瘤免疫中具有極其重要的作用。CD3+T細(xì)胞數(shù)量上代表機(jī)體的總T細(xì)胞數(shù)量，CD4+T細(xì)胞為輔助T細(xì)胞，輔助機(jī)體完成腫瘤免疫。CD8+T細(xì)胞為殺傷性T細(xì)胞具有特異性殺傷活性。CD4+/CD8+比值保持動(dòng)態(tài)平衡，可維持機(jī)體細(xì)胞免疫功能穩(wěn)定，其比值降低表明細(xì)胞免疫功能降低[6]。

本組肺腺癌患者CD4+T細(xì)胞顯著減少，CD8+T細(xì)胞明顯增加，CD4+/CD8+顯著下降，且都具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。表明腫瘤患者較正常人免疫功能下降，與文獻(xiàn)報(bào)道的一致[7]。

化療后較化療前比較，CD4+/CD8+明顯提高，說(shuō)明患者化療后免疫力有所恢復(fù)，但并未恢復(fù)至正常水平，免疫力恢復(fù)主要是CD4+T細(xì)胞增加，CD8+T細(xì)胞有所減少。

[1]全國(guó)腫瘤防治研究辦公室.中國(guó)惡性腫瘤死亡調(diào)查研究（1990-1992）[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2008.82-101.

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[6]湯釗猷.現(xiàn)代腫瘤學(xué)[M].上海：上海醫(yī)科大學(xué)出版社，1993.121-139.

[7]金從國(guó)，王熙才，伍治平，等.癌癥患者外周血T細(xì)胞亞群水平及臨床意義[J].腫瘤研究與臨床，2003，15(1):33-34.