半乳糖凝集素1和層粘連蛋白在新疆維吾爾族子宮頸癌中作用的相關(guān)性研究

劉迎嘉 楊波 張晨

新疆地區(qū)維吾爾族是宮頸癌的高發(fā)人群，初查患病率高達(dá)459/10萬～590/10萬，高于同一生活環(huán)境下的其他民族，且發(fā)病年齡早［1］，因此研究維吾爾族宮頸癌發(fā)病機制，以期早期阻斷宮頸癌的發(fā)生是非常必要的。Galectin-1是半乳糖凝集素家族的一員，在細(xì)胞的黏附、增殖、凋亡、免疫及腫瘤發(fā)生、發(fā)展、遷移中發(fā)揮重要作用［2］。層粘連蛋白(Laminin，LN)是細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜的主要成分，對維持細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜的完整結(jié)構(gòu)起著重要作用，大量的研究表明LN與惡性腫瘤的生長、浸潤、轉(zhuǎn)移及預(yù)后有關(guān)［3］。二者在維族宮頸癌中的相互作用機制鮮見報道。我們采用免疫組化方法檢測Galectin-1，LN在維族宮頸癌中的表達(dá)，以探討與維族宮頸癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2008年1月至2011年12月在新疆醫(yī)科大學(xué)五附院病理科存檔的石蠟標(biāo)本100例，患者均為維吾爾族，其中浸潤性宮頸鱗癌40例，CINⅡ-Ⅲ20例，CINⅠ20例，慢性宮頸炎20例。所有病例術(shù)前均未行放化療等特殊治療。

1.2 試劑與方法 濃縮型鼠抗人單克隆Galectin-1抗體購自Novocasta生物公司(克隆號:25 c1)，濃縮型兔抗人多克隆抗體LN、VEGF均購自北京中杉金橋生物公司。

標(biāo)本均經(jīng)10%的中性福爾馬林固定，石蠟包埋，4 μm厚度連續(xù)切片，其中1張做HE染色再次確診。采用免疫組化S-P法。石蠟切片脫蠟、水化，Galectin-1和VEGF經(jīng)抗原高壓修復(fù)，LN經(jīng)胃酶修復(fù)。滴加過氧化物酶阻斷溶液，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶活性。PBS沖洗后，滴加非免疫性動物血清。PBS沖洗后，滴加一抗，一抗?jié)舛?Galectin-1、VEGF、LN均 1∶100，4℃過夜。滴加生物素標(biāo)記的二抗，PBS沖洗后，加鏈霉菌抗生物素-過氧化物酶溶液，37℃孵育;DAB顯色，用已知的陽性切片作為陽性對照，用PBS代替一抗做陰性對照。

1.3 結(jié)果判斷 顯微鏡圖像采集系統(tǒng)采集免疫組化染色切片圖像，在相同條件下隨機拍攝5個100倍視野，使用圖像分析軟件Image ProPlus5.1對免疫組化進(jìn)行定量分析，以積分吸光度值作為分析指標(biāo)，取其平均值。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 16.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用方差分析，統(tǒng)計分析前進(jìn)行正態(tài)分布檢驗和方差齊性檢驗(經(jīng)檢驗本組資料呈正態(tài)分布且方差齊)，相關(guān)分析采用pearson線性相關(guān)，α=﹤0.05。

2 結(jié)果

2.1 Galectin-1在慢性宮頸炎組、CIN組表達(dá)于宮頸組織細(xì)胞外基質(zhì)的胞漿，在宮頸癌組陽性表達(dá)于癌細(xì)胞胞漿及癌細(xì)胞外基質(zhì)，陽性細(xì)胞胞漿著棕黃色顆粒。宮頸癌組和炎癥組比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。在慢性宮頸炎組、CIN組、宮頸癌組表達(dá)陽性率和陽性強度依次增強(P＜0.05)。見圖1，表1。

2.2 LN主要表達(dá)于細(xì)胞外基質(zhì)中，陽性細(xì)胞胞漿著棕黃色顆粒。宮頸癌組和炎癥組比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。在慢性宮頸炎組織、CIN組、宮頸癌表達(dá)陽性率和陽性強度依次減弱(P＜0.05)。見表1。

2.3 宮頸癌組織中Galectin-1、LN的相關(guān)性 宮頸癌組織Galectin-1表達(dá)與LN表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，r=0.482，P＜0.05。

表1 Galectin-1、LN在宮頸慢性炎癥組、CIN組和宮頸癌組的表達(dá)(±s)

表1 Galectin-1、LN在宮頸慢性炎癥組、CIN組和宮頸癌組的表達(dá)(±s)

注;r=0.482，P ＜0.05

分組 例數(shù) Galectin-1 F值 P值 LN F值 P值20 51.23±21.36 ＜0.05 13472.±9381.27 CINⅠ 20 24357.12±9538.74 5.43 ＜0.05 8523.7±5432.炎癥40 58964.46±1847.44 ＜0.05 1648.33±549.94 33 4.94 ＜0.05 CINⅡ-Ⅲ 20 37148.36±11359.41 ＜0.05 4936.4±2737.36宮頸癌

3 討論

宮頸癌的發(fā)生發(fā)展是一個多因素、多階段的復(fù)雜過程，在致癌過程中可能與維吾爾族婦女衛(wèi)生條件差、早婚、多婚、早育、多育、遺傳易感因素等有一定的關(guān)系，還可能與細(xì)胞的免疫逃逸、基底膜的破壞、血管新生和細(xì)胞粘附能力的改變等有關(guān)。

研究證明，Galectin-1在許多腫瘤中的表達(dá)水平上調(diào)，如神經(jīng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、口腔鱗狀細(xì)胞癌、胰腺導(dǎo)管腺癌、甲狀腺癌、肝癌等，并與其侵襲能力及惡性程度密切相關(guān)［4-9］。

Kloog等發(fā)現(xiàn)Galectin-1通過與癌基因H-Ras相互作用，為其提供膜錨定位點，增強Ras介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程，從而促進(jìn)細(xì)胞向腫瘤細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化［10］。Galectin-1可以增加卵巢癌細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)間的粘附能力［11］。本實驗結(jié)果為Galectin-1在癌組織和炎癥組比較表達(dá)陽性率和陽性強度顯著增強，結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)意義;CIN組間表達(dá)陽性率和陽性強度亦增強，在宮頸慢性炎癥、CIN、癌組織中表達(dá)呈陽性率和陽性強度依次增強的規(guī)律，這與上述文獻(xiàn)報道結(jié)果一致。提示Galectin-1參與了維族宮頸癌的發(fā)生發(fā)展過程，在維族宮頸癌的發(fā)展中可能起著重要作用。

LN是基膜中大分子非膠原糖蛋白，它有促進(jìn)細(xì)胞的黏著、鋪展、有絲分裂、加速神經(jīng)軸突生長及細(xì)胞移動，并誘導(dǎo)細(xì)胞分化，還與形態(tài)發(fā)生及腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)等多種生物學(xué)作用。LN促進(jìn)甲狀腺癌、前列腺癌細(xì)胞的增殖、分化，并作為侵襲抑制因素，在結(jié)腸腺瘤、卵巢癌及乳腺癌的進(jìn)展中發(fā)揮作用［12］。本實驗顯示炎癥組中LN陽性表達(dá)明顯，宮頸癌組陽性表達(dá)減弱，兩組表達(dá)相比有統(tǒng)計學(xué)意義。CINⅡ-Ⅲ組與CINⅠ組比較LN表達(dá)減弱，結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)意義。LN在慢性宮頸炎組、CIN組、宮頸癌組中的陽性強度依次減弱，說明從正常宮頸組織→CIN→宮頸癌的轉(zhuǎn)化過程中，LN發(fā)揮了重要作用。

研究發(fā)現(xiàn)由于同β-半乳糖苷的親和性，Galectin-l可首先與糖復(fù)合物結(jié)合。在自然產(chǎn)生的糖復(fù)合物中，LN是被公認(rèn)的Galectin-1的天然配體。本實驗結(jié)果顯示宮頸慢性炎癥組、CIN組、宮頸癌組中Galectin-1與LN的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=0.482，P＜0.05)。提示二者在維族宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中協(xié)同發(fā)揮作用，但具體機制有待于進(jìn)一步研究。

綜上所述，Galectin-l與LN均參與維族宮頸癌發(fā)生發(fā)展的過程，可作為判斷維族宮頸癌發(fā)生發(fā)展的良好指標(biāo)。但目前Galectin-l和LN與維族宮頸癌相互作用的研究幾乎沒有，其相關(guān)分子生物學(xué)機制尚未完全揭示，有待進(jìn)一步研究，為其臨床診治提供新的靶點。

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