兩種血細(xì)胞分析儀全血細(xì)胞參數(shù)比對(duì)研究

耿玉蘭 趙小潔 陳正立 劉月彩 霍小嬌 王政民*

現(xiàn)代血細(xì)胞分析儀能夠快速可靠地處理血液樣本，大部分樣本無(wú)需操作者進(jìn)行干預(yù)而能獲得可信結(jié)果，但有些樣本在處理過(guò)程中存在定量或定性的細(xì)胞異常，使得儀器分析結(jié)果可信度降低[1-2]。因此，操作者必須采取干預(yù)措施以確認(rèn)結(jié)果，或在出具報(bào)告之前重新運(yùn)行樣本和(或)做血涂片復(fù)檢分析以獲得正確的報(bào)告[3-4]。DS-500血細(xì)胞分析儀是用于檢測(cè)中等大小血細(xì)胞的儀器，該儀器應(yīng)用電阻抗原理測(cè)定全血細(xì)胞、比色法測(cè)定血紅蛋白、半導(dǎo)體激光和化學(xué)染色技術(shù)對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行分類[5]。而作為自動(dòng)化血細(xì)胞分析鼻祖的貝克曼公司生產(chǎn)的系列血細(xì)胞分析儀使用對(duì)單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞體積(V)、高頻電流傳導(dǎo)(C)、激光散射(S)分析的“VCS”技術(shù)對(duì)血液細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，其在檢測(cè)血液細(xì)胞方面具有標(biāo)桿樣的作用[6]。本研究于2012年2-5月同時(shí)使用DS-500與LH750血細(xì)胞分析儀檢測(cè)1441份EDTA-K2抗凝血液樣本，對(duì)全血細(xì)胞(complete blood cells，CBC)結(jié)果進(jìn)行比對(duì)分析，以觀察DS-500血細(xì)胞分析儀性能情況。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

(1)參比儀器為L(zhǎng)H750血細(xì)胞分析儀，由Beckman Coulter公司生產(chǎn)，該儀器目前為Beckman Coulter公司先進(jìn)的血細(xì)胞分析儀之一。參比儀器參加衛(wèi)生部血液細(xì)胞學(xué)室間質(zhì)評(píng)結(jié)果優(yōu)秀，同時(shí)參加Beckman Coulter全球?qū)嶒?yàn)室IQAT比對(duì)，具有可比性。本研究以該儀器檢測(cè)結(jié)果作為比對(duì)標(biāo)準(zhǔn)值。

(2)比對(duì)儀器為EDAN DS-500血細(xì)胞分析儀，由深圳理邦實(shí)驗(yàn)生物電子有限公司生產(chǎn)。2臺(tái)儀器均使用儀器原裝配套試劑、質(zhì)控品和校準(zhǔn)品，每日按常規(guī)進(jìn)行保養(yǎng)和進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控，要求所用試劑、質(zhì)控品和校準(zhǔn)品均在有效期內(nèi)，室內(nèi)質(zhì)控合格。

1.2 樣本采集與檢測(cè)

2012年2-5月臨床采集全血細(xì)胞分析樣本共1504例，其中63例因凝集、溶血等原因舍棄，共有1441例樣本納入本研究。使用EDTA-K2抗凝真空采血管(北京積水創(chuàng)格醫(yī)療科技有限公司)采集2 ml靜脈血室溫保存，分別于LH750和DS-500血細(xì)胞分析儀上檢測(cè)，要求檢測(cè)時(shí)差＜0.5 h且樣本采集后4 h內(nèi)檢測(cè)完畢。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用MedCalc version 12.3.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。使用Altman-Bland偏倚分析、Passing-Bablok回歸法以及Pearson相關(guān)分析對(duì)2臺(tái)儀器檢測(cè)的單個(gè)樣本全血細(xì)胞有效數(shù)據(jù)進(jìn)行一致性評(píng)估和相關(guān)性分析。儀器間顯著差異被定義為差異超過(guò)99%Bland-Altman偏倚可信限。

2 結(jié)果

2.1 紅細(xì)胞參數(shù)

2臺(tái)儀器紅細(xì)胞(red blood cell，RBC)數(shù)量基本一致，相關(guān)系數(shù)r＝0.998，呈密切相關(guān)性。白細(xì)胞(white blood cell，WBC)數(shù)量異常增高，會(huì)影響血細(xì)胞分析儀檢測(cè)血紅蛋白(hemoglobin，Hb)和紅細(xì)胞分布寬度(red blood cell distribution width，RDW)的準(zhǔn)確性，有3例樣本由于此原因干擾LH750檢測(cè)而被排除，其中2例為慢性粒細(xì)胞白血病患者，1例為急性淋巴細(xì)胞白血病患者，其WBC數(shù)量在DS-500測(cè)定值分別為247.13、155.47和87.12×109/L。在剩余1438例樣本中Hb測(cè)定值DS-500測(cè)定結(jié)果顯著高于LH750測(cè)定結(jié)果的有6例(107∶96，100∶91，104∶91，87∶79，107∶95，108∶88)g/L，有1例樣本的Hb顯著低于LH750測(cè)定結(jié)果(124∶139)g/L，其他樣本的Hb濃度和RBC數(shù)量在2臺(tái)儀器上測(cè)定結(jié)果基本一致。2臺(tái)儀器檢測(cè)Hb相關(guān)系數(shù)r＝0.997、檢測(cè)RBC數(shù)量相關(guān)系數(shù)r＝0.998，均呈密切相關(guān)性。平均紅細(xì)胞體積(mean corpuscle volume，MCV)的平均偏倚為1.54 fl(DS-500較高)，1441例樣本中有8例貧血患者(Hb：54～100 g/L)的MCV結(jié)果在2臺(tái)儀器上有顯著差別(DS-500較高為7例，LH750較高為1例)，并且其RDW亦顯著增大到17.8%～27.6%。DS-500檢測(cè)RDW低于LH750，系統(tǒng)偏倚為1.0%，且2臺(tái)儀器各有6例樣本的RDW的偏差超過(guò)99%可信限。

2.2 白細(xì)胞計(jì)數(shù)

在LH750上儀器旗標(biāo)“白細(xì)胞碎片”的9例樣本被排除，其余樣本按WBC數(shù)量多少被分為2組：①WBC≥2.0×109/L組有1423例患者；②WBC＜2.0×109/L組有9例患者。

(1)1423例患者組2種儀器檢測(cè)結(jié)果一致，相關(guān)系數(shù)r＝0.999，其中有12例樣本的WBC數(shù)量在2臺(tái)儀器上有顯著差異，11例在DS-500較高(87.1∶79.6，26.8∶23.2，33.3∶29.8，53.4∶51.9，34.7∶30.8，17.7∶15.2，155.4∶146.1，20.4∶18.9，19.1∶16.4，22.2∶19.0，32.1∶28.1)×109/L，這些患者均表現(xiàn)為淋巴細(xì)胞數(shù)量增高。在LH750儀器上有1例樣本W(wǎng)BC數(shù)量較高(14.9∶11.9)×109/L，但沒有任何旗標(biāo)提示。

(2)9例患者組，DS-500儀器檢測(cè)結(jié)果高于LH750儀器，平均偏倚為0.06×109/L，其中有1例樣本偏差較大(2.7∶2.1)×109/L，超過(guò)了99%可信限。

2.3 血小板參數(shù)

在2臺(tái)或1臺(tái)儀器上旗標(biāo)提示“血小板聚集”的5例樣本被排除，其他1436例樣本按在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)血小板(platelet，PLT)危急值分為2組：①PLT≥50×109/L組1330例；②PLT＜50×109/L組106例。

(1)1330例組中PLT在DS-500儀器檢測(cè)結(jié)果較低，存在系統(tǒng)偏差，但與LH750儀器檢測(cè)結(jié)果相關(guān)性良好(r＝0.990)，有7例樣本結(jié)果偏差較大，DS-500儀器檢測(cè)結(jié)果較低(336∶452，446∶586，223∶329，341∶451，452∶653，338∶409，254∶342)×109/L。

(2)106例樣本中DS-500儀器檢測(cè)結(jié)果偏低，但2臺(tái)儀器相關(guān)性良好(r＝0.884)，有1例樣本在LH750儀器上明顯偏高(47∶32)×109/L，并旗標(biāo)提示RBC“形態(tài)異?！薄S-500儀器上的32例樣本和LH750儀器上的41例樣本平均血小板體積(mean platelet volume，MPV)無(wú)結(jié)果，其中29例為2臺(tái)儀器均無(wú)檢測(cè)結(jié)果，因此共有44例樣本被排除，其他1397例樣本MPV在DS-500儀器上檢測(cè)結(jié)果較低，2臺(tái)儀器呈中度相關(guān)性(r＝0.675)。兩種血細(xì)胞分析儀全血細(xì)胞參數(shù)比對(duì)結(jié)果見表1。

3 討論

血細(xì)胞分析儀的檢測(cè)系統(tǒng)是指完成一個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目所需要的儀器、試劑、校準(zhǔn)品、檢測(cè)程序、質(zhì)量控制及保養(yǎng)計(jì)劃等的組合。不同檢測(cè)系統(tǒng)由于方法學(xué)、測(cè)量程序、校準(zhǔn)、不精密度、試劑及故障等差異，會(huì)造成同一項(xiàng)目結(jié)果的差異[7]。同樣，由于人群不同、疾病不同、寄生蟲、冷凝集、采血管以及其他未知干擾因素等的存在也可造成結(jié)果偏差[8-12]。2002年美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(NCCLS)制訂了EP9-A2文件，文件規(guī)定對(duì)于不同檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)同一項(xiàng)目需用患者樣本進(jìn)行方法學(xué)比對(duì)及偏差評(píng)估[13]。有研究指出，血細(xì)胞分析儀的性能評(píng)價(jià)主要針對(duì)的是全血細(xì)胞的準(zhǔn)確性以及白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)與顯微鏡涂片檢查的一致性[14]。本研究使用患者樣本對(duì)DS-500血細(xì)胞分析儀和LH750血細(xì)胞分析儀的2個(gè)不同檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行了比對(duì)分析發(fā)現(xiàn)，前者在全血細(xì)胞計(jì)數(shù)方面與后者有密切的相關(guān)性，主要參數(shù)基本一致，一些非主要參數(shù)有輕微的偏差。本研究未對(duì)白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)進(jìn)行比對(duì)和偏倚評(píng)估。

表1 DS-500血細(xì)胞分析儀與LH750血細(xì)胞分析儀全血細(xì)胞參數(shù)結(jié)果比對(duì)

兩種血細(xì)胞分析儀檢測(cè)RBC參數(shù)Hb、RBC數(shù)量、MCV和RDW的相關(guān)系數(shù)r分別為：0.997、0.998、0.956和0.961，均＞0.950，有良好的相關(guān)性，但均有輕微的偏倚。WBC異常增高可導(dǎo)致患者Hb、MCHC、MCH假性減低和RDW假性增大，本研究有3例的血液病患者，由于其WBC異常增高，可能造成Hb和RDW出現(xiàn)輕微偏差而被排除，但對(duì)MCV的影響并未超過(guò)99%可信限而被保留。DS-500血細(xì)胞分析儀測(cè)定MCV高于LH750血細(xì)胞分析儀，存在1.54 fl系統(tǒng)偏倚，雖然兩種儀器均使用電阻抗技術(shù)測(cè)定細(xì)胞體積，但是試劑、檢測(cè)時(shí)間等均有差異，可能是該因素造成了差異的存在。由于無(wú)國(guó)際化標(biāo)準(zhǔn)以及計(jì)算方法的不同，兩種儀器間RDW也存在一定的系統(tǒng)誤差。這些問題在其他儀器間亦同樣存在，因此各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該建立不同檢測(cè)系統(tǒng)的MCV和RDW參考值[2,8]。

兩種血細(xì)胞分析儀均應(yīng)用電阻抗法原理檢測(cè)WBC數(shù)量。本研究發(fā)現(xiàn)，WBC數(shù)量在兩種儀器間相關(guān)性良好(r＞0.950)，WBC≥2.0×109/L組無(wú)任何偏倚，而WBC＜2.0×109/L組DS-500血細(xì)胞分析儀呈現(xiàn)0.06×109/L的偏倚，高于LH750檢測(cè)結(jié)果。有研究指出，LH750測(cè)定WBC數(shù)量高于MAXA、KX-21N測(cè)定結(jié)果，與本研究WBC＜2.0×109/L組DS-500測(cè)定結(jié)果相反，可見不同儀器間有一定的偏差存在[7]。鑒于WBC＜2.0×109/l患者多為血液病或者病情嚴(yán)重患者，臨床需要使用參考方法和血液形態(tài)學(xué)做進(jìn)一步檢查。

研究發(fā)現(xiàn)，兩種儀器檢測(cè)PLT數(shù)量具有良好的相關(guān)性，但是DS-500普遍低于LH750，存在明顯系統(tǒng)誤差。本研究設(shè)計(jì)對(duì)于PLT計(jì)數(shù)并沒有提供獨(dú)立的參考方法，也未發(fā)現(xiàn)任何出版資料直接使用國(guó)際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)(ICSH)參考方法比較各種血液分析儀測(cè)定PLT的情況。然而臨床發(fā)現(xiàn)，中度和重度血小板減少癥的患者在不同血細(xì)胞分析儀間PLT數(shù)量存在差異[15]。本研究尚需使用參考方法即免疫學(xué)方法對(duì)2種血細(xì)胞分析儀PLT計(jì)數(shù)情況進(jìn)行評(píng)估。兩種血細(xì)胞分析儀MPV有一定程度的相關(guān)性，也存在一定比例的偏倚。DS-500血細(xì)胞分析儀檢測(cè)MPV范圍較LH750窄(6～17∶2～20)fl。研究顯示，MPV和PLT數(shù)量呈負(fù)相關(guān)，因此在DS-500檢測(cè)表現(xiàn)為MPV數(shù)值較大(偏倚為0.3 fl)。當(dāng)樣本內(nèi)有巨或小血小板、RBC碎片或血小板減少癥患者樣本時(shí)均可造成儀器MPV檢測(cè)誤差，甚至正常血液樣本，MPV在不同的血液分析儀間也存在明顯差異[16]。因此，血細(xì)胞分析儀檢測(cè)MPV無(wú)標(biāo)準(zhǔn)值，各實(shí)驗(yàn)室可依據(jù)不同檢測(cè)系統(tǒng)而定。

綜上所述，DS-500血細(xì)胞分析儀與LH750血細(xì)胞分析儀具有廣泛的可比性，評(píng)價(jià)儀器性能時(shí)，應(yīng)考慮到不同患者群血液樣本存在的差異，制定本實(shí)驗(yàn)室切實(shí)可行的儀器評(píng)價(jià)機(jī)制，更好地為臨床服務(wù)。

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