均勻設(shè)計(jì)探討水溶性氮酮對(duì)復(fù)方水楊酸酊透皮吸收的作用

藍(lán)芬

均勻設(shè)計(jì)探討水溶性氮酮對(duì)復(fù)方水楊酸酊透皮吸收的作用

藍(lán)芬

本實(shí)驗(yàn)采用簡(jiǎn)單小室裝置, 以離體大白鼠皮膚為透皮屏障, 用生理鹽水為接受液, 研究了不同濃度的水溶性氮酮對(duì)復(fù)方水楊酸酊透皮吸收的影響, 并且應(yīng)用均勻設(shè)計(jì)法對(duì)可能影響水溶性氮酮對(duì)復(fù)方水楊酸酊透皮吸收促進(jìn)作用的二個(gè)因素,在6個(gè)水平上進(jìn)行試驗(yàn)探討,并對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行重復(fù),試驗(yàn)數(shù)據(jù)的二次多項(xiàng)式逐步回歸分析,求得回歸方程, 同時(shí)應(yīng)用微積分求得極值, 從而獲得水溶性氮酮對(duì)復(fù)方水楊酸酊透皮吸收促進(jìn)作用的最佳濃度為0.64%。

均勻設(shè)計(jì)；復(fù)方水楊酸酊；水楊酸；水溶性氮酮；透皮吸收

復(fù)方水楊酸酊是廣東省廣州市第一人民醫(yī)院一種常用的外用制劑, 為了提高臨床治療效果, 作者應(yīng)用均勻設(shè)計(jì)法探討水溶性氮酮對(duì)復(fù)方水楊酸酊透皮吸收的作用, 因此進(jìn)行了試驗(yàn)研究。

1 儀器

采用日本島津的UV-2201紫外分光光度計(jì)與南通科學(xué)儀器廠的858-2恒溫磁力攪拌器。

2 處方與原料

2.1 處方 薄荷腦20 g, 液化酚30 ml, 水楊酸20 g, 乙醇適量 全量1000 ml。

2.2 應(yīng)用的原料有：薄荷腦(藥用級(jí))、液化酚(藥用級(jí))、水楊酸(藥用級(jí))、乙醇(藥用級(jí))、生理鹽水(廣東省廣州市第一人民醫(yī)院自制)、水溶性氮酮(中山市漠雨精細(xì)化工有限公司產(chǎn)品)。

3 實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果

3.1 均勻試驗(yàn)設(shè)計(jì)

3.1.1 因素水平表 此試驗(yàn)中擬定2個(gè)因素:X1(時(shí)間): 2～12(h);X2(水溶性氮酮含量 ):0～8(%)。水溶性氮酮含量(%)只有5個(gè)水平,因此采用了擬水平法［1, 2］,即將其中一個(gè)水平重復(fù)使用, 見表1。

采用U6(64)表,根據(jù)使用表的規(guī)定選擇其中的1, 3列,組成U6(62)表,把X1, X2二個(gè)因素分別放入U(xiǎn)6(62)表的六列上,將各因素的各水平填入,見3.1.2。按照試驗(yàn)方案安排的條件進(jìn)行試驗(yàn),每個(gè)試驗(yàn)號(hào)的結(jié)果分別填入3.1.2的試驗(yàn)結(jié)果內(nèi),見3.1.2。

表1 因素水平表

表2 均勻?qū)嶒?yàn)方案及結(jié)果

表2 均勻?qū)嶒?yàn)方案及結(jié)果

試驗(yàn)號(hào)因素試驗(yàn)結(jié)果(透皮吸收率)(%)試驗(yàn)號(hào)因素試驗(yàn)結(jié)果(透皮吸收率)(%) X1(h)X2(%)y1y2y3X1(h)X2(%)y1y2y3 1 2 36.737.817.8648510.3811.8111.86 2 4 82.032.553.15510014.4014.9815.54 111.1211.9812.17612313.9115.7316.41 3 6

3.1.2 U6(62) 均勻試驗(yàn)方案及結(jié)果 見表2。

3.2 制備標(biāo)準(zhǔn)曲線

3.2.1 測(cè)定吸收光譜 取水楊酸準(zhǔn)確配制成20 g/ml的生理鹽水溶液后, 以生理鹽水作空白, 在200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描, 可見水楊酸吸收光譜在296.2 nm處有最大吸收；同樣對(duì)薄荷腦、液化酚、水溶性氮酮分別準(zhǔn)確配制成20 g/ml的生理鹽水溶液后, 在此波長(zhǎng)處均無吸收；對(duì)鼠皮的空白透皮試驗(yàn),在此處吸收極小, 后兩者表明均對(duì)本試驗(yàn)測(cè)定都無影響。

3.2.2 制備標(biāo)準(zhǔn)曲線方程 精密稱取0.1076 g水楊酸, 配制濃度為1.076 mg/ml的水楊酸標(biāo)準(zhǔn)液(置于100 ml容量瓶中,用生理鹽水溶解并至刻度)。之后,分別精密吸取標(biāo)準(zhǔn)液配成2.15、4.34、6.456、8.608、10.76、16.14及21.520( μg/ml)的溶液(置于100 ml的容量瓶中, 用生理鹽水稀釋至刻度), 在波長(zhǎng)296.2 nm處測(cè)定吸收度(以生理鹽水為空白), 然后確定吸收度Y關(guān)于濃度X的回歸方程, 得標(biāo)準(zhǔn)回歸方程為：Y=0.0021+ 0.0279X, P＜0.001, 表明線性關(guān)系是很好的 (2.152 μg/ml≤X≤21.520 μg/ml范圍)。

3.2.3 制備供試液 不含水溶性氮酮的供試液：取復(fù)方水楊酸酊8.0 ml, 置于10 ml的容量瓶中, 加乙醇至10 ml(振搖)得；含8%水溶性氮酮的復(fù)方水楊酸酊供試液：取0.8 ml水溶性氮酮與8.0 ml復(fù)方水楊酸酊, 置于10 ml容量瓶中, 乙醇加至刻度(振搖)。其余3種濃度的供試液均照此法制得(有：1%、3%與5%)。

3.2.4 制備離體鼠皮 將大白鼠處死(必須是健康的), 去毛干凈后取腹部皮膚(同時(shí)除其脂肪), 分別用蒸餾水與生理鹽水沖洗干凈, 然后放入裝有生理鹽水容器中并放置于冰箱冷藏備用(使用時(shí)間不能超出3 d)。

3.2.5 試驗(yàn)方法及裝置 此次試驗(yàn)采用簡(jiǎn)單小室裝置, 在（37±1）℃恒溫, 試驗(yàn)應(yīng)用的釋放池內(nèi)徑為1.2 cm的玻璃管(兩端開口), 試驗(yàn)用皮固定于釋放池的下端, 用皮剛接觸接受液面;接受池裝有40 ml生理鹽水(用一個(gè)50 ml的燒杯裝著), 連續(xù)攪拌速度約為270 rpm。然后吸取0.5 ml供試液于釋放池中, 分別根據(jù)每個(gè)試驗(yàn)號(hào)的時(shí)間吸取接受液1.0 ml(精密的)(吸取多少接受液, 就補(bǔ)加多少生理鹽水；每個(gè)試驗(yàn)號(hào)做三次；具體6個(gè)試驗(yàn)號(hào)各在那個(gè)時(shí)間精密吸取接受液, 見3.1.2。)置10 ml容量瓶中, 以生理鹽水至刻度, 在296.2 nm處測(cè)定吸收度(以生理鹽水為空白), 所測(cè)得的吸收度計(jì)算水楊酸含量(通過標(biāo)準(zhǔn)曲線方程), 這里Y=Xi/Xo * 100%［Xo為水楊酸在釋放池中的含量;Xi為各試驗(yàn)號(hào)接受池中水楊酸的量, Y為透皮吸收率(%)),計(jì)算透皮吸收率(%)(各次抽取樣損失的量就正后算入Xi內(nèi), 再求Y值)。各試驗(yàn)號(hào)的透皮吸收百分率)見3.1.2。

4 數(shù)據(jù)處理

將3.1.2中的數(shù)據(jù)進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)數(shù)據(jù)的二次多項(xiàng)式逐步回歸分析。整個(gè)運(yùn)算過程, 采用了SAS統(tǒng)計(jì)軟件包在微機(jī)上進(jìn)行。所得回歸方程如下：Y=6.74086+0.81350X1+0.17354X2-0.13527X22(P＜0.01),同時(shí), 運(yùn)用微積分對(duì)以上的回歸方程求極值, 得最佳水溶性氮酮濃度為0.64%；回歸方程中X1系數(shù)為正值, 這說明隨著時(shí)間增長(zhǎng), 透皮吸收率也在增加, 即作用持久。

5 討論

5.1 含0.64%水溶性氮酮的復(fù)方水楊酸酊其透皮吸收為最好, 這說明并非水溶性氮酮的濃度越高, 對(duì)藥物的透皮作用越好, 而是在一個(gè)最佳的水溶性氮酮濃度。

5.2 從水溶性氮酮對(duì)復(fù)方水楊酸酊透皮吸收的試驗(yàn)結(jié)果來看, 促透作用顯著、緩和且持久。

5.3 本實(shí)驗(yàn)采用均勻設(shè)計(jì)法, 均勻設(shè)計(jì)法是一種很好的試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法, 它具有均勻分散, 試驗(yàn)次數(shù)少等特點(diǎn), 類似試驗(yàn)一般要做30次測(cè)定；而均勻設(shè)計(jì)只做6次測(cè)定, 如果重復(fù)三次, 減少的次數(shù)就更多了, 從而可以看出均勻設(shè)計(jì)的優(yōu)點(diǎn)。

［1］ 方開泰.均勻設(shè)計(jì)與均勻設(shè)計(jì)表.北京: 科學(xué)出版社, 1993:47-50.

［2］ 方開泰,馬長(zhǎng)興.正交與均勻設(shè)計(jì).北京: 科學(xué)出版社, 2001: 108- 109.

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