葉酸和維生素B12對高同型半胱氨酸血癥大鼠血漿可溶性細(xì)胞間黏附分子－1和可溶性P－選擇素水平的影響

范云鵬 姜雅秋 張 華 (吉林大學(xué)白求恩第一臨床醫(yī)院，吉林 長春 3002)

高同型半胱氨酸血癥(Hhcy)是動脈粥樣硬化(AS)的獨(dú)立危險因子，主要是通過血管內(nèi)皮損傷、氧化應(yīng)激、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、干擾脂質(zhì)代謝以及促炎癥因子的激活等途徑導(dǎo)致心血管疾病的發(fā)生〔1，2〕。sICAM-1 與 SP-選擇素在炎癥、栓塞中起重要作用，是反映血小板及內(nèi)皮細(xì)胞活化的特異標(biāo)志物。本實(shí)驗(yàn)通過建立Hhcy大鼠心肌梗死模型，并在葉酸、維生素(Vit)B12干預(yù)下，進(jìn)一步探討Hhcy與sICAM-1、SP-選擇素的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 動物及飼料 SD大鼠體重130～160 g，遼寧省長生生物技術(shù)有限公司，許可證號SCXK(遼)2010-0001，SPF級，遼寧省實(shí)驗(yàn)動物質(zhì)量合格證0002777(2011-9-9)。飼料為繁育鼠全價固體顆粒飼料，沈陽市于洪區(qū)前民動物飼料廠提供。

1.2 藥品及試劑 L-半胱氨酸(L-Cysteine)，Sigma公司(C7352)。sICAM-1、SP-選擇素、同型半胱氨酸(Hcy)等測定試劑盒均購于南京建成生物工程研究所。

1.3 主要儀器 RM6240多道生理信號采集系統(tǒng)，成都儀器廠。UV-265FW紫外分光光度計，日本光電工業(yè)株式會社。A5082酶標(biāo)儀，Tecan Austria GmbH。HF328-U86深凍冰箱，北京力康生物醫(yī)療科技控股有限公司。JW-I型微型人工呼吸機(jī)，第二軍醫(yī)大學(xué)。10、200、1 000 μl微量移液器，上海榮泰生化工程有限公司。FA1004V電子天秤，上海精密科學(xué)儀器廠。

1.4 方法 取SD大鼠30只，隨機(jī)分為3組，每組10只，雌雄各半。正常對照組:腹腔注射生理鹽水5 ml·kg－1·d－1，灌胃給予生理鹽水5 ml·kg－1·d－1。Hhcy模型組:腹腔注射2%L-半胱氨酸 5 ml·kg－1·d－1，灌胃給予生理鹽水 5 ml·kg－1·d－1。葉酸 +VitB12干預(yù)組:腹腔注射2%L-半胱氨酸5 ml·kg－1·d－1，灌胃給予葉酸 2.5 mg·kg－1·d－1，VitB1225 μg·kg－1·d－1。連續(xù)給藥12 w，各組于末次給藥30 min后腹腔注射戊巴比妥鈉(45 mg/kg)，麻醉后氣管插管安裝呼吸機(jī)，開胸結(jié)扎冠狀動脈左室降支90 min后松開結(jié)扎線，于再灌注90 min后取血，分離血漿，置于－80℃冰箱保存，備檢相關(guān)指標(biāo)。按試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 所得數(shù)據(jù)均進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，正態(tài)分布的統(tǒng)計指標(biāo)用±s表示，兩組間數(shù)據(jù)對比采用t檢驗(yàn)，用Minitab 15統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行分析。

2 結(jié)果

2.1 各組血漿Hcy水平比較 三組間兩兩比較，血漿Hcy水平均有顯著差異(P＜0.01)。見表1。

2.2 各組sICAM-1、SP-選擇素水平比較 Hhcy模型組和正常對照組比較、Hhcy模型組和葉酸+Vit B12干預(yù)組比較均有顯著差異(P＜0.01)。見表1。

表1 Hcy、sICAM-1、SP-選擇素在各組中的水平(±s，n=10)

表1 Hcy、sICAM-1、SP-選擇素在各組中的水平(±s，n=10)

與正常對照組比較:1)P＜0.01;與Hhcy模型組比較:2)P＜0.01;下表同

組別 Hcy(μmol/L) sICAM-1(ng/ml)SP-選擇素(ng/ml 5.26±0.61 1.28±0.10 9.66±0.87 Hhcy模型組 19.88±5.031) 1.98±0.091) 16.11±2.831)葉酸+VitB12組 8.96±5.421)2) 1.61±0.151)2) 11.22±0.671)2))正常對照組

2.3 各組乳酸脫氫酶(LDH)、肌酸激酶(CK)水平比較 Hhcy模型組和正常對照組比較、Hhcy模型組和葉酸+VitB12干預(yù)組比較，LDH、CK水平均有顯著差異(P＜0.01)。見表2。

表2 三組LDH、CK水平比較(±s，n=10)

表2 三組LDH、CK水平比較(±s，n=10)

組別 LDH(mmol/L) CK(U/ml)5.59±0.44 1.27±0.49 Hhcy模型組 10.60±1.911) 5.78±0.651)葉酸+VitB12組 6.86±0.402) 2.47±0.492)正常對照組

3 討論

Hcy是蛋氨酸代謝的中間產(chǎn)物，VitB12則是蛋氨酸合成的輔酶，而葉酸是體內(nèi)甲基的間接供體，兩者缺乏阻礙了蛋氨酸的再生成，導(dǎo)致 Hhcy〔3〕，補(bǔ)充葉酸和 VitB12能有效降低 Hcy水平。

sICAM-1是目前評價內(nèi)皮細(xì)胞功能的敏感指標(biāo)之一，當(dāng)內(nèi)皮細(xì)胞受到損傷被激活，循環(huán)白細(xì)胞在血管內(nèi)膜聚集并黏附到血管內(nèi)皮，細(xì)胞黏附分子如sICAM-1等在這一過程中起重要作用，參與了AS的發(fā)生與發(fā)展過程，是炎癥細(xì)胞向斑塊游走和浸潤的必要條件。免疫組織化學(xué)證實(shí)斑塊內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)sICAM-1，其程度與內(nèi)膜下單核細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞密度密切相關(guān)〔4〕，抑制sICAM-1水平能減弱中性粒細(xì)胞的活性，增強(qiáng)冠狀動脈血管功能的恢復(fù)，縮小缺血再灌注后壞死心肌的范圍〔5〕。當(dāng)受到內(nèi)皮損傷、炎癥反應(yīng)、缺氧、自由基、ADP等的刺激后，P-選擇素表達(dá)到細(xì)胞膜上，在多種血管活性因子sICAM-1等的共同作用下，相關(guān)黏附分子協(xié)同抵抗血流的作用，使白細(xì)胞、血小板、淋巴細(xì)胞等發(fā)生黏附、聚集，參與血小板與白細(xì)胞及血小板與內(nèi)皮細(xì)胞之間的黏附和聚集，導(dǎo)致血栓形成〔6，7〕。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)應(yīng)用葉酸、VitB12可降低Hcy水平，sICAM-1、SP-選擇素也相應(yīng)降低，LDH、CK亦隨之降低，從而起到減少梗死面積、保護(hù)心肌的作用。

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