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    馬鈴薯試管薯生產(chǎn)技術(shù)研究

    2013-09-08 02:41:12柴生武王拴福姬青云穆艷娥鄧?yán)麗?ài)張東紅
    種子科技 2013年4期
    關(guān)鍵詞:費(fèi)烏瑞結(jié)薯試管

    柴生武,王拴福,姬青云,穆艷娥,鄧?yán)麗?ài),張東紅

    (山西省薯類脫毒中心,山西 太原 030006)

    馬鈴薯試管薯生產(chǎn)技術(shù)研究

    柴生武,王拴福,姬青云,穆艷娥,鄧?yán)麗?ài),張東紅

    (山西省薯類脫毒中心,山西 太原 030006)

    利用液體 MS+蔗糖 8%+5 mg/L BA+不同激素水平(500 mg/L CCC、0.05 mg/L PP333、0.01 mg/L PP333、0.5 mg/L PP333)培養(yǎng)基作為誘導(dǎo)培養(yǎng)基,對(duì)馬鈴薯早熟品種“費(fèi)烏瑞它”和中晚熟品種“同薯20號(hào)”進(jìn)行試管薯誘導(dǎo),研究其實(shí)用化的生產(chǎn)技術(shù)。結(jié)果表明,添加0.5 mg/L PP333、0.1 mg/L PP333的誘導(dǎo)培養(yǎng)基分別可作為“同薯20號(hào)”和“費(fèi)烏瑞它”的試管薯生產(chǎn)的誘導(dǎo)培養(yǎng)基。

    馬鈴薯;試管薯;誘導(dǎo)培養(yǎng)基

    馬鈴薯試管薯是指馬鈴薯脫毒試管苗在培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)通過(guò)誘導(dǎo),于葉腋間形成的微型薯塊。試管薯生產(chǎn)期間處在無(wú)菌環(huán)境中,杜絕了常規(guī)網(wǎng)室生產(chǎn)微型薯過(guò)程中外來(lái)病原體的侵染,使試管薯具有同試管苗相近的質(zhì)量,不僅具有試管苗的所有優(yōu)點(diǎn),而且由于體積小、重量輕,貯藏、運(yùn)輸、種植都很方便。馬鈴薯試管薯的誘導(dǎo)與生產(chǎn),還具有不受氣候影響,可全年生產(chǎn)的特點(diǎn),為工業(yè)化生產(chǎn)提供了切實(shí)可行的手段,同時(shí)更便于優(yōu)良種質(zhì)的保存、運(yùn)輸和推廣,有很大的發(fā)展?jié)摿Α?/p>

    近些年來(lái),許多學(xué)者對(duì)試管薯的誘導(dǎo)作了大量的研究,對(duì)各種影響誘導(dǎo)的因素和誘導(dǎo)方法都作了較多的報(bào)道,同時(shí)也報(bào)道了不同品種(具有不同的基因型)對(duì)于同一誘導(dǎo)條件的反應(yīng)有所不同。另外,試管薯生產(chǎn)操作繁雜、成本較高也是制約試管薯在生產(chǎn)中廣泛應(yīng)用的關(guān)鍵所在。所以針對(duì)特定品種研究相應(yīng)的適宜誘導(dǎo)條件,對(duì)于試管薯生產(chǎn)至關(guān)重要,同時(shí)規(guī)范操作程序、降低成本也是必須考慮的因素。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究馬鈴薯兩個(gè)不同品種對(duì)誘導(dǎo)條件的反應(yīng),并對(duì)實(shí)驗(yàn)流程進(jìn)行優(yōu)化,探索針對(duì)特定品種的可以提高誘導(dǎo)效率、降低生產(chǎn)成本的適用于規(guī)?;a(chǎn)的技術(shù)方法。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    本實(shí)驗(yàn)研究在山西省薯類脫毒中心組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。試驗(yàn)材料選用馬鈴薯早熟品種“費(fèi)烏瑞它”和中晚熟品種“同薯20號(hào)”的脫毒試管苗,由山西省薯類脫毒中心提供。脫毒試管苗擴(kuò)繁應(yīng)用MS固體培養(yǎng)基,培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度2 000~3 000 lx、光照16 h/d、溫度23±2℃,為誘導(dǎo)結(jié)薯提供來(lái)源一致的基礎(chǔ)試管苗。試驗(yàn)使用的試劑矮壯素 (CCC)和BA (6-芐基腺嘌呤,62benzylam inopu rine)、多效唑(PP333)等均為分析純制劑。培養(yǎng)瓶為220 mL的玻璃瓶。

    1.2 試驗(yàn)方法

    本實(shí)驗(yàn)分兩步進(jìn)行,第一步先用液體壯苗培養(yǎng)基培養(yǎng)成苗,然后加入液體誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)結(jié)薯。

    1.2.1 壯苗培養(yǎng)

    在無(wú)菌條件下,將脫毒試管苗剪去頂芽,切取帶3~4個(gè)腋芽的莖段,轉(zhuǎn)接到裝有液體培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。培養(yǎng)基采用楊元軍等研制的PBM液體培養(yǎng)基 (2×PBM大量元素,1×PBM微量元素,蔗糖19 g/L,有機(jī)物同MS),pH5.8,利用濾紙作橋,經(jīng) 121 ℃滅菌 20 min,每瓶裝入20 mL左右的培養(yǎng)基,接入5個(gè)莖段,培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度 2 000~3 000 lx、光照 16 h/d、溫度 23±2 ℃,3周左右即可長(zhǎng)成有5~7節(jié)的壯苗。

    1.2.2 誘導(dǎo)培養(yǎng)

    成苗后,培養(yǎng)液基本吸收完畢,如有殘余將其倒出,然后加入經(jīng)高壓滅菌的液體誘導(dǎo)培養(yǎng)基。誘導(dǎo)培養(yǎng)基采用液體MS培養(yǎng)基+蔗糖8%+不同激素處理 (表1),pH均為5.8,每瓶加入20 mL,每處理3瓶,重復(fù)3次。培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度1 500~2 500 lx、光照時(shí)間8 h/d、溫度23/18℃。培養(yǎng)期間定期觀察,從第10 d開(kāi)始紀(jì)錄各處理中形成試管薯(直徑大于3 mm)的數(shù)量。誘導(dǎo)培養(yǎng)50 d后收獲,統(tǒng)計(jì)、測(cè)量各品種不同處理的結(jié)薯時(shí)間、試管薯產(chǎn)量(每瓶薯重、單瓶結(jié)薯粒數(shù))等指標(biāo),來(lái)評(píng)價(jià)各處理的效果。

    2 結(jié)果

    2.1 不同激素處理的誘導(dǎo)效果

    在8 h/d光照、溫度23/18℃條件下,各處理均能誘導(dǎo)形成試管薯(見(jiàn)圖1)。試管薯的形成主要集中在誘導(dǎo)培養(yǎng)后10~22 d,25 d后,幾乎所有處理形成的試管薯都接近最終數(shù)量。不同基因型對(duì)不同種類和濃度的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑反應(yīng)各不相同,“同薯20號(hào)”在0.05 mg/L~0.5 mg/L PP333條件下形成試管薯的速度隨濃度的增加而增快,在0.5 mg/L PP333條件下對(duì)試管薯的誘導(dǎo)速度最快,500 mg/L CCC的誘導(dǎo)速度次之,但明顯高于0.1 mg/L和0.05 mg/L PP333。 “費(fèi)烏瑞它”對(duì) PP333的反應(yīng)較“同薯20號(hào)”更為敏感,在0.1 mg/L PP333時(shí)產(chǎn)生薯塊形成速度快,次之是500 mg/L CCC,而在0.5 mg/L PP333時(shí)試管薯形成的數(shù)量反而大幅下降。

    表1 不同激素處理的誘導(dǎo)培養(yǎng)基

    表2 各品種在不同處理下試管薯的產(chǎn)量

    圖1 不同品種對(duì)不同激素處理的反應(yīng)

    2.2 不同激素處理的試管薯產(chǎn)量

    不同激素種類和濃度對(duì)試管薯的產(chǎn)量有明顯的影響,并且不同基因型表現(xiàn)也是不同的?!巴?0號(hào)”在0.5 mg/L PP333(T4)處理下平均每瓶結(jié)薯數(shù)和結(jié)薯重均最高,同其他處理差異顯著,500 mg/L CCC(T2)處理相比較T0、T1、T3產(chǎn)量要高且達(dá)到顯著水平;而“費(fèi)烏瑞它”在0.1 mg/L PP333(T3)處理下平均每瓶結(jié)薯數(shù)和結(jié)薯重均最高,同其他處理差異顯著,500 mg/L CCC(T2)處理相比較T0、T1、T3產(chǎn)量高且達(dá)到顯著水平。而試管薯平均粒重與結(jié)薯數(shù)并無(wú)相對(duì)應(yīng)的關(guān)系。

    上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,液體MS+蔗糖8%+5mg/L BA+0.5 mg/L PP333可作為“同薯20號(hào)”試管薯生產(chǎn)的誘導(dǎo)培養(yǎng)基,而液體MS+蔗糖8%+5 mg/L BA+0.1 mg/L PP333可作為“費(fèi)烏瑞它”試管薯生產(chǎn)的誘導(dǎo)培養(yǎng)基。

    3 討論

    在試管薯的誘導(dǎo)中,粗壯的基礎(chǔ)苗更易形成試管薯,在本實(shí)驗(yàn)中也觀察到同樣的效果,因此培養(yǎng)健壯的基礎(chǔ)苗是提高試管薯效率的前提。一般研究者多以MS作為培養(yǎng)基進(jìn)行脫毒苗的擴(kuò)繁,而一些研究則認(rèn)為MS培養(yǎng)基中N濃度對(duì)馬鈴薯來(lái)說(shuō)偏高,楊元軍設(shè)計(jì)了PBM培養(yǎng)基,在本研究中也得到了成功的應(yīng)用。試驗(yàn)表明,利用PBM大量元素加倍液體培養(yǎng)基得到的脫毒苗,較MS培養(yǎng)基莖稈粗壯、葉片肥大,可能與降低N濃度和提高K、Ca、Mg濃度有關(guān)。在僅有5 mg/L BA的參與下最終能形成試管薯,不過(guò)形成的效率較低。在本研究中,“費(fèi)烏瑞它”在0.1 mg·L-1的PP333處理下誘導(dǎo)試管薯能早結(jié)薯,每瓶結(jié)薯數(shù)和結(jié)薯重都顯著增加,有利于試管薯產(chǎn)量和質(zhì)量的提高,與張志軍以夏波蒂為材料的研究結(jié)果相同;而“同薯20號(hào)”則在0.5 mg/L PP333處理下結(jié)薯效率和產(chǎn)量最高,可能與基因型有關(guān),與多數(shù)研究者的研究相同。500 mg·L-1 CCC在本研究中對(duì)兩個(gè)差別較大基因型都具有較好的誘導(dǎo)效果,可作為要求較粗放的通用培養(yǎng)基。8 h/d光照條件在有激素條件下通過(guò)變溫處理可以形成試管薯,與一些研究者認(rèn)為全黑暗是誘導(dǎo)試管薯和增加結(jié)薯數(shù)的必要條件有所不同。變溫處理可能是促進(jìn)試管薯形成的有利條件,本實(shí)驗(yàn)仍采用兩步法進(jìn)行生產(chǎn),增加了操作的復(fù)雜性。研究利用固體培養(yǎng)基給予適當(dāng)?shù)募に靥幚砗瓦m當(dāng)?shù)牡鸵箿靥幚碇苯诱T導(dǎo),可能是簡(jiǎn)化試管薯生產(chǎn)的途徑,有待進(jìn)一步研究。

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    1005-2690(2013)04-0050-03

    S532.035.2

    A

    2013-04-03

    柴生武(1973-),男,山西廣靈人,碩士,農(nóng)藝師,主要從事蔬菜育種和馬鈴薯脫毒種薯繁育技術(shù)研究。

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