甘油化時(shí)滴速對(duì)冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞質(zhì)量影響

柴婷婷

甘油化時(shí)滴速對(duì)冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞質(zhì)量影響

柴婷婷

目的 對(duì)本站制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞方法進(jìn)行探索, 并對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行分析評(píng)價(jià)。方法 隨機(jī)抽取本站紅細(xì)胞懸液4℃保存9 d以?xún)?nèi)20u,隨機(jī)分成甲組10u, 加甘油速度40滴/分和乙組10U加甘油速度120滴/min, 分別進(jìn)行甘油化, -80℃冰凍及用ACP215全自動(dòng)血細(xì)胞處理儀解凍。甘油化處理, 進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)：甲組游離血紅蛋白(0.14±0.05) g/L；乙組游離血紅蛋白(1.01±0.02) g/L, 兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義, (P＜0.01),甲乙兩組其他指標(biāo)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn), 差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 本站制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞的方法高效高質(zhì), 值得推廣。

冰凍紅細(xì)胞；冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞；全自動(dòng)血細(xì)胞處理儀

成分輸血在我國(guó)已經(jīng)廣泛開(kāi)展, 其中Rh(D)陰性血的用量逐年增加, Rh(D)陰性血比例在我國(guó)漢族人群僅占(0.3~0.5%)［1］, 超低溫甘油化冰凍保存紅細(xì)胞作為血站平時(shí)貯備, 一旦臨床急需可立即進(jìn)行解凍洗滌, 即極大方便了臨床用血, 又保證搶救生命時(shí)間, 而甘油化制備冰凍解凍紅細(xì)胞是長(zhǎng)期保存Rh(D)陰性血最理想方法, 作者按加甘油時(shí)不同滴速分成甲、乙兩組, 檢測(cè)洗滌后質(zhì)控指標(biāo), 對(duì)冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞制備方法進(jìn)行探索, 并對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)。

1 材料與方法

1.1 試劑與耗材 復(fù)方甘油試劑(北京博德桑特)、三珠袋(北京博德桑特)、ACP215紅細(xì)胞洗滌耗材(美國(guó)血技)、9%氯化鈉(北京博德桑特)、0.9%氯化鈉(山東威高)、輸血器(江西洪達(dá))、賀利氏6000I離心機(jī)(德國(guó))、三洋-80℃速凍冰箱(MDF－U32V型、日本)、調(diào)速多用振蕩器(HY－4型、金壇市)、電熱恒溫水浴箱(HHW21－600型、天津)、無(wú)菌接駁機(jī)(SC-201型、日本)、鎢酸鈉(天津化學(xué)試劑四廠)、氫氧化鈉(天津博迪化工)、乙二醇(天津富宇精細(xì)化工)、無(wú)水乙醇(沈陽(yáng)華東試劑廠)、稀釋液(希森美康醫(yī)用電子有限公司)、酚酞(沈陽(yáng)華東試劑廠)、高碘酸鈉(天津福晨化學(xué)試劑廠)、血漿游離血紅蛋白試劑盒(北京瑞爾達(dá)生物科技)、溶血?jiǎng)?希森美康醫(yī)用電子有限公司)。

1.2 取樣 用本站檢測(cè)紅細(xì)胞懸液4℃保存9 d以?xún)?nèi)20 U,隨機(jī)分成甲組10 U, 乙組10 U。

1.3 冰凍紅細(xì)胞制備 取9 d內(nèi)紅細(xì)胞懸液各20 U, 經(jīng)2200轉(zhuǎn), 25 min離心后, 分出上清, 轉(zhuǎn)移至三珠袋, 通過(guò)無(wú)菌接駁機(jī)與輸血器相連接, 加入57%復(fù)方甘油溶液, 振蕩器60次/ min, (甲組滴速40滴/min, 加5min后靜止5min再繼續(xù)加入,仍是40滴/min, 至加甘油完畢；乙組滴速120滴/min, 勻速加完, 不需靜止)排盡空氣, 室溫平衡放置30min, 紙盒裝入后放在-80℃保存一個(gè)月后待用。

1.4 冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞制備 保存一個(gè)月后, 冰凍紅細(xì)胞從-80℃冰箱取出立即放入37~42℃恒溫水浴箱中溶化, 4~6 min/(袋·U), 啟動(dòng)ACP215全自動(dòng)血細(xì)胞處理儀, 應(yīng)用去甘油化程序洗滌, 用9%氯化鈉80ml、0.9%生理鹽水2000 ml, 解凍洗滌過(guò)程大約60 min。

1.5 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 紅細(xì)胞回收率≥80%, 白細(xì)胞殘留率≤1%,血小板殘留率≤1%, 甘油含量<10g/L, 血漿游離血紅蛋白含量≤1g/L, 體外溶血≤50%。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 計(jì)數(shù)資料以(x±s)表示, 兩組采用t檢驗(yàn), P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表1。

表1 兩組結(jié)果差別比較

2 結(jié)果

3 討論

冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞在制備過(guò)程中, 冰凍紅細(xì)胞制備是質(zhì)量的前提, 冰凍與解凍洗滌過(guò)程操作必須嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行, 減少紅細(xì)胞損失［2］。甘油的加入能使紅細(xì)胞膜受到很大沖擊, 滲透壓逐步達(dá)到平衡很重要, 如果在加入甘油時(shí)先40滴/分, 加5 min后靜止5 min再繼續(xù)加入40滴/min,使紅細(xì)胞膜滲透壓能得到很好的平衡, 甲組以可間歇再加入方式每次為40滴/min, 是本站經(jīng)過(guò)實(shí)踐檢驗(yàn)后確立的操作方法；乙組為設(shè)立對(duì)照組加入甘油滴速120滴/min, 其余條件相同, 甲組游離血紅蛋白(g/L)為0.14±0.05, 乙組游離血紅蛋白為(1.02±0.04) g/L, 兩組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義, (P＜0.01),實(shí)驗(yàn)證明, 過(guò)快的加入甘油, 使紅細(xì)胞膜受到強(qiáng)烈刺激, 血與甘油混合后滲透壓得不到很快平衡, 很容易產(chǎn)生溶血, 使血液制備質(zhì)量得不到保證, 所以作者認(rèn)為加甘油時(shí)滴速的保證起到關(guān)鍵作用。

［1］ 邱艷.全血成分血質(zhì)量要求與血液標(biāo)準(zhǔn)化.北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社, 2002.

［2］ 安萬(wàn)新,于衛(wèi)建.輸血技術(shù)學(xué).北京:科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社, 2010: 152.

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