三七花對自發(fā)性高血壓大鼠心臟損害保護作用的實驗研究

楊興才， 周 端， 李越華， 郭 忻

(1.上海市中醫(yī)醫(yī)院，上海 200071;2.上海中醫(yī)藥大學附屬龍華醫(yī)院，上海 200032)

三七花為傳統(tǒng)名貴中藥五加科植物三七Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen的花蕾?，F代臨床及藥理研究已表明三七花具有降壓作用，主要與其直接擴張血管，其次是抑制血管運動中樞有關。前期研究采用三七花溫浸劑灌服自發(fā)性高血壓大鼠及三七花泡服治療輕、中度高血壓病人顯示其可靠的降壓療效、并能顯著改善高血壓病人臨床癥狀。本研究在之前研究基礎上通過動物實驗進一步觀察其對高血壓所致之心臟肥大損害的逆轉作用及其可能機制。研究表明，三七花中有效成分不須煎煮即可較容易水浸獲得，高溫煎煮反可能使其有效成分喪失，本試驗采取溫浸水提所獲之溫浸劑作為干預措施，并以中藥復方制劑松齡血脈康膠囊 (具平肝潛陽降壓作用)、西藥硝苯地平 (屬降壓藥中之鈣離子拮抗劑)作為對照以觀察三七花單味藥與中藥復方制劑及西藥的差異，從而為臨床實際開發(fā)利用提供理論依據。

1 材料

1.1 實驗試劑 AngⅡ放免分析測定盒、ET-1放免分析測定盒 (解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放射免疫所)。

1.2 實驗動物 自發(fā)性高血壓大鼠，15周齡 (該周齡大鼠已有明顯心臟肥大)，50只，體質量 (230±20)g。正常血壓Wistar-koyto大鼠 (WKY)，16周齡 (大鼠年齡對實驗影響不大)，10只，體質量 (220±20)g，均由中國科學院上海實驗動物中心提供。許可證號:SCKK(滬)2011－0005。

1.3 實驗藥品 松齡血脈康膠囊 (由鮮松葉、葛根、珍珠粉組成)由成都康弘制藥廠提供，批號:960902;三七花由云南特安吶制藥有限公司提供;硝苯地平片，10 mg上海市醫(yī)藥股份有限公司天平制藥廠提供，批號:238013。

1.4 實驗儀器 SN—682放射免疫γ計數器 (中科院上海原子核研究所日環(huán)儀器廠);XHF—1高速離散器 (上海金達生化儀器廠);離心機SO—1型 (上海手術器械廠)。

2 方法

2.1 動物模型的制備方法 本實驗選用由Okamoto和Aoki選育成功的自發(fā)性高血壓大鼠作為高血壓實驗動物模型，此鼠除有高血壓自發(fā)率100%的特點外，還有高血壓性心血管病變，適合人類的高血壓病研究。正常血壓大鼠Wistarkoyto的血壓 (收縮壓)為110～120 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)，15周齡自發(fā)性高血壓大鼠收縮壓在170～180 mmHg。

2.2 動物分組 隨機分組法，具體為正常對照組10只，雌雄各半;自發(fā)性高血壓大鼠空白對照組10只，雌雄各半;自發(fā)性高血壓大鼠三七花治療Ⅰ組10只，雌雄各半;自發(fā)性高血壓大鼠三七花治療Ⅱ組10只，雌雄各半;自發(fā)性高血壓大鼠松齡血脈康治療組10只，雌雄各半;自發(fā)性高血壓大鼠硝苯地平治療組10只，雌雄各半。

2.3 藥物制備 溫浸水提。以三七花蕾置于60～70℃蒸餾水中水浴后取浸出液，藥渣如上水浴后再取浸出液，將浸出液減壓回收成流浸膏即成三七花溫浸劑。

2.4 給藥方法 正常血壓大鼠對照組10 mL/(kg·d)蒸餾水;自發(fā)性高血壓大鼠空白組 10 mL/(kg·d)蒸餾水;自發(fā)性高血壓大鼠三七花Ⅰ組，三七花溫浸劑按0.4 g/(kg·d)，配成40 mg/mL;自發(fā)性高血壓大鼠三七花Ⅱ組，三七花溫浸劑按0.8 g/(kg·d)，配成80 mg/mL;自發(fā)性高血壓大鼠松齡血脈康組，松齡血脈康膠囊按1.2 g/(kg·d)，配成120 mg/mL;硝苯地平組，硝苯地平片按1 mg/(kg·d)，配成0.1 mg/mL。以上各組用藥均每日分2次灌胃，連續(xù)8周。

2.5 標本采集與指標檢測 全部動物于最后一次給藥后稱質量，3%戊巴比妥鈉40 mg/kg腹腔注射麻醉，經股動脈放血處死全部大鼠后打開胸腔剝離心臟周圍組織取出心臟以冷生理鹽水 (4℃)行主動脈逆行灌洗，濾紙吸干表面水分除去心房及大血管，以電子天平稱出全部心室質量。以室間隔為界分離左右心室，室間隔屬左心室，并分別稱質量;測心肌組織促血管生成素-Ⅱ(AngⅡ)、內皮素-1(ET-1):于左室同一部位取部分心臟組織，每克組織加10 mL 0.5 mol/L醋酸，煮沸15 min，冷卻后勻漿 (14 000 r/min，10 s×3次)，離心 (3 000 r/min，20 min)，取上清液待測AngⅡ、ET-1。本測定采用均相竟爭法直接測定心肌組織中AngⅡ、ET-1量，根據樣品管中放射量直接從曲線上查找相應所制作之上清液中AngⅡ、ET-1量。

2.6 統(tǒng)計處理 根據本實驗設計統(tǒng)計分析采用單因素方差分析，所有數據以±s表示，用SPSS軟件包 (10.0版)進行統(tǒng)計學處理。

3 結果

3.1 對各組大鼠心肌組織AngⅡ、ET-1量的影響 表1中結果表明:與正常對照組比較，各組自發(fā)性高血壓大鼠心肌組織AngⅡ及ET-1量明顯升高，差異具有統(tǒng)計學意義。各治療組自發(fā)性高血壓大鼠心肌組織AngⅡ、ET-1量均有降低，與自發(fā)性高血壓大鼠空白組比較差異具有統(tǒng)計學意義。各治療組AngⅡ量方面硝苯地平組、三七花Ⅱ組優(yōu)于三七花Ⅰ組、松齡血脈康組，差異具有統(tǒng)計學意義。硝苯地平組、三七花Ⅱ組之間，三七花Ⅰ組、松齡血脈康組之間，差異則無統(tǒng)計學意義。各治療組自發(fā)性高血壓大鼠在ET-1量方面均有不同程度下降，與空白組比較均顯示有統(tǒng)計學意義，三七花Ⅱ組下降尤為明顯，效果超過硝苯地平組，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計學意義。

表1 三七花粗提物對各組大鼠心肌組織AngⅡ、ET-1量的影響

3.2 對各組大鼠心臟左右室質量比值 (LV/RV)及全心重與體質量比值 (VW/BW)的影響 表2結果表明:與正常血壓大鼠組比較，自發(fā)性高血壓大鼠空白組左右室比值明顯升高 (P＜0.05)。各治療組自發(fā)性高血壓大鼠心臟左右室質量比值均低于自發(fā)性高血壓大鼠空白組，差異具有統(tǒng)計學意義;上述4組中硝苯地平組優(yōu)于其他各組，差異具有統(tǒng)計學意義，該4組中除硝苯地平組外，其余三組差異無統(tǒng)計學意義;在全心質量與體質量比值方面各組自發(fā)性高血壓大鼠顯著高于正常血壓大鼠組，差異具有統(tǒng)計學意義，三七花Ⅱ組、松齡血脈康組、硝苯地平組均可降低自發(fā)性高血壓大鼠全心與體質量比，與自發(fā)性高血壓大鼠空白組比較差異具有統(tǒng)計學意義，其中硝苯地平組優(yōu)于其他二組差異具有統(tǒng)計學意義，三七花Ⅱ組與松齡血脈康組無統(tǒng)計學差異，三七花Ⅰ組與自發(fā)性高血壓大鼠空白組比較無統(tǒng)計學差異。

上述結果表明15周齡自發(fā)性高血壓大鼠較正常血壓大鼠正常血壓大鼠已出現明顯心臟肥大，且以左室肥大明顯，差異有統(tǒng)計學意義。三七花高低劑量、松齡血脈康及硝苯地平對自發(fā)性高血壓大鼠心肌組織AngⅡ、ET-1量及自發(fā)性高血壓大鼠心肌肥大均有抑制作用。以前對三七花的相關研究表明，三七花可以降低自發(fā)性高血壓大鼠的系統(tǒng)高血壓及循環(huán)中的相關血管活性物質，本研究則顯示其降低自發(fā)性高血壓大鼠心肌組織中的相關血管活性物質如AngⅡ、ET-1量，特別是ET-1量，從而最終抑制了主要由自發(fā)性高血壓大鼠AngⅡ、ET-1這些血管活性物質異常升高所導致的心肌重構以致肥大，本實驗結果同時也顯示出三七花改善心肌肥大的效果并不遜于中藥復方制劑松齡血脈康膠囊，但也并不優(yōu)于硝苯地平，表明單味三七花在本實驗劑量下對心肌損害的保護作用與西藥相比并無優(yōu)勢可言。

表2 三七花粗提物對各組大鼠心臟左右室質量比值及全心質量與體質量比值的影響

4 討論

三七花為傳統(tǒng)名貴中藥，現代研究［1］表明三七花蕾中含有與三七相同的有效成分，區(qū)別在于三七花蕾中的皂苷成分均屬人參二醇型皂苷?，F代對三七花的降壓作用機藥理研究［2-3］表明三七花的降壓作用，主要是直接擴張血管，其次是抑制血管運動中樞所致。前期研究采用三七花溫浸劑灌服自發(fā)性高血壓大鼠及三七花泡服治療輕、中度高血壓病人顯示其可靠的降壓療效、改善高血壓臨床癥狀及其可能的降壓機理。本研究在之前研究基礎上通過動物實驗進一步觀察其對高血壓所致之心臟肥大損害的逆轉作用及其可能機制。

現代醫(yī)學研究表明，內皮素 (ET)是一種強效的21氨基酸縮血管肽，由3個基因組編碼，在各組織尤其是血管內皮細胞和平滑肌細胞中產生。內皮素-1(ET-1)是ET家族的主要成員，主要由血管內皮細胞產生，近年來，隨著對ET-1研究的深入，發(fā)現ET-1在高血壓病的發(fā)生發(fā)展和靶器官損害中有重要作用。越來越多的研究也表明，ET-1基因可以作為高血壓病的候選基因，而ET-1基因多態(tài)性與高血壓的許多危險因素直接相關，并同高血壓的左室肥大纖維化、腎功能不全、卒中發(fā)生率相關。因此有人把血漿ET-1評價為高血壓病病情發(fā)展嚴重性和靶器官損害的一個靈敏指標。

研究表明［4-6］，在培養(yǎng)的心肌細胞中加入內皮素可使心肌細胞肥大，說明內皮素可直接促進心肌細胞肥大，內皮素參與心肌肥厚的發(fā)生發(fā)展過程。體外試驗已證明心肌細胞、心內膜細胞均可產生、分泌ET-1。文獻報道［7］大鼠壓力負荷增加，心肌局部ET、心肌細胞ET結合點及ET mRNA表達均增高，表明壓力負荷心肌肥厚時，心肌細胞產生ET增加。國內已有報道［8］自發(fā)性高血壓大鼠心肌局部組織存在ET代謝異常。因此高血壓心臟肥大不僅與血壓升高有關，也與ET的直接參與有密切關系。

研究還表明［9-11］，AngⅡ作為腎素血管緊張素系統(tǒng)(RAS)的主要成分之一，是ET-1外另一種強烈的血管收縮劑。其不僅在高血壓形成及維持中起重要作用，與高血壓所致之靶器官損害亦有密切關系。AngⅡ的長期效應即是刺激血管平滑肌和心肌細胞的增殖肥大，RAS不僅存在于循環(huán)中，其所有成分也都已經被發(fā)現存在于心臟組織中，心臟局部AngⅡ的增殖作用是引起左室肥大的重要原因之一，而且有證據表明局部組織RAS起著比循環(huán)中RAS更為重要的作用。Unger等(12)的研究發(fā)現，在自發(fā)性高血壓大鼠大鼠，血漿RAS的活性并不高，而其某些局部組織中如心肌及血管中RAS活性明顯升高，表明局部RAS是導致高血壓心臟損害的獨立因素。因此高血壓心臟肥大不僅與血壓升高有關，更主要與心肌局部AngⅡ的作用直接相關。

本研究在前期研究［13］基礎上進一步探索三七花溫浸劑對自發(fā)性高血壓大鼠的高血壓心臟損害的保護作用研究，以自發(fā)性高血壓大鼠為實驗對象，以三七花溫浸劑灌服進行干預，以正常大鼠及中藥松齡血脈康、西藥硝苯地平作為對照。結果表明自發(fā)性高血壓大鼠心肌組織中ET-1與AngⅡ水平顯著高于正常對照組正常血壓大鼠大鼠，其心臟左右室比值、全心質量與體質量比也顯著高于正常對照組，差異均具有統(tǒng)計學意義。三七花溫浸劑灌服8周自發(fā)性高血壓大鼠心肌組織ET-1與AngⅡ水平明顯降低，而且隨著心肌組織ET-1與AngⅡ水平的下降，其心臟左右室比值、全心質量與體質量比值亦隨之得到改善。組間比較，三七花高劑量組效果優(yōu)于低劑量組及松齡血脈康組而遜于硝苯地平組。該實驗表明，傳統(tǒng)中藥三七花能夠逆轉自發(fā)性高血壓大鼠高血壓所致之心臟肥大，在一定程度保護高血壓所致之心臟損害，結合文獻研究結果推測其作用機制除與其降低系統(tǒng)高血壓有關，亦與其降低心肌組織局部ET-1與AngⅡ量有更密切關系。其詳細機制尚有待進一步探索。

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