厚樸葉總黃酮的超聲提取工藝研究

吳錦玉，吳巖斌，吳建國，沈炳炎，吳錦忠

（1.福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建 福州350122；2.福建中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合研究院，福建 福州350122；3.光澤縣藥材辦，福建 光澤354100）

厚樸為木蘭科植物厚樸（Magnolia officinalis Rehd.et Wils.）或凹葉厚樸（Magnolia officinalis Rehd.et Wils.var.biloba Rehd.et Wils.）的干燥干皮、根皮和枝皮，性溫，味苦、辛。其功效燥濕消痰、下氣除滿，主治濕滯傷中、脫痞吐瀉等［1］，主產(chǎn)于湖北、湖南、四川、浙江、安徽、福建等地［2］?，F(xiàn)今厚樸的使用主要是通過砍樹剝皮，但其是多年生落葉喬木且生產(chǎn)周期長，一般要求達(dá)到15a以上才能供藥用。目前國內(nèi)厚樸葉的資源量大且每年可以再生，目前僅少量出口日本用于日式料理的壽司飯及燒烤襯墊物，還未充分加以利用，一般是任其凋落腐爛，造成資源的浪費(fèi)［3］。如能將厚樸葉開發(fā)利用，將有利于厚樸資源的綜合開發(fā)利用和可持續(xù)發(fā)展，且具有一定的經(jīng)濟(jì)效益和社會效益。

現(xiàn)代化學(xué)和藥理學(xué)研究表明：厚樸葉主要含有木脂素類、黃酮類、生物堿類和揮發(fā)油等成分［4-7］，具有抗菌、鎮(zhèn)咳、抗氧化和血管舒張等作用［8-11］。目前，對于厚樸葉黃酮類成分的提取工藝相關(guān)研究較少。厚樸葉中的蘆丁和槲皮苷具有多種生物活性，都是很好的天然抗氧化劑，對心血管系統(tǒng)疾病有較好的療效［12］。本實(shí)驗(yàn)采用正交設(shè)計(jì)法，以總黃酮含量為指標(biāo)，通過考察不同因素水平對總黃酮提取率的影響，優(yōu)選最佳超聲提取工藝，為厚樸葉的綜合開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 藥材 厚樸葉采自福建省南平市光澤縣，經(jīng)福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院楊成梓副教授鑒定為凹葉厚樸葉。

1.2 試劑 蘆丁對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：100080-200707）；亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、乙醇、甲醇等皆為分析純。

1.3 儀器AR233CN電子天平［奧豪斯儀器（上海）有限公司］；KQ-300DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；RE-2000A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；SH2-D（Ш）循環(huán)水式真空泵（鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司）；DLSB-5/25℃低溫冷卻液循環(huán)泵（滎陽市科瑞儀器廠）；UV-1800紫外可見分光光度計(jì)（日本島津公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備 精密稱取干燥至恒重蘆丁對照品10mg，用80%甲醇溶解并移到50mL量瓶中，定容至刻度，即得0.2mg/mL對照品溶液。

2.2 供試品溶液的制備 稱取干燥的厚樸葉1g，精密稱定，按一定的料液比加入不同濃度的乙醇，超聲提取一定的時(shí)間，提取一定的次數(shù)，過濾，合并濾液，真空減壓濃縮到5mL；然后移到25mL的容量瓶中，蒸餾水定容；再精密吸取1mL定容至5mL的容量瓶中，作為供試品溶液。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備［8］精密量取蘆丁對照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，分別置于25mL容量瓶中，各加入蒸餾水至6mL；加5%亞硝酸鈉溶液1.0mL，搖勻并放置6 min；再加10%硝酸鋁溶液1.0mL，搖勻并放置6 min；再加4%氫氧化鈉溶液10.0mL，并用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻放置15 min。以6mL蒸餾水代替對照品溶液液作為空白，采用分光光度法在500 nm波長處測定吸光度。以吸光度（A）為縱坐標(biāo)，相應(yīng)濃度（C）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：A＝12.8750C－0.0273，R2＝0.9992，線性范圍為：0.008～0.048mg/mL。

2.4 厚樸葉總黃酮的含量測定 取供試品溶液1mL，按“2.3”項(xiàng)下方法測定吸光度。根據(jù)吸光度值計(jì)算黃酮類化合物含量。

2.5 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 采用L9（34）正交試驗(yàn)表設(shè)計(jì)，以總黃酮得率為指標(biāo)，正交因素與水平設(shè)計(jì)見表1，正交試驗(yàn)結(jié)果見表2，方差分析結(jié)果見表3。

表1 正交試驗(yàn)因素水平表

表2 L9（34）正交設(shè)計(jì)及結(jié)果

表3 方差分析結(jié)果

由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見：乙醇濃度、提取時(shí)間和提取次數(shù)對厚樸葉總黃酮提取率的影響顯著（P＜0.05），料液比無顯著影響。最佳提取工藝為A3B3C3D2，即以35倍70%乙醇超聲提取厚樸葉2次，40 min/次。此工藝下所得厚樸葉總黃酮提取率為5.01%。

2.6 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 按照最佳提取工藝為A3B3C3D2，制備3份供試品溶液，按“2.3”項(xiàng)下方法測定吸光度，計(jì)算總黃酮得率。其結(jié)果分別為5.00%、4.93%和5.09%，平均提取率為5.01%，RSD為1.57%。結(jié)果表明該提取工藝條件穩(wěn)定可行。

3 討 論

厚樸葉資源豐富，價(jià)格低廉，多數(shù)產(chǎn)區(qū)作為廢棄物未能得到有效開發(fā)利用。我國厚樸資源豐富，僅福建省就有約10萬畝的種植面積，大量的厚樸葉為其深入開發(fā)利用提供資源保障。鑒于厚樸葉含有較高的黃酮類成分，開發(fā)利用厚樸葉將給厚樸產(chǎn)區(qū)帶來較大的經(jīng)濟(jì)和社會效益。

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