規(guī)模化種豬場(chǎng)主要疫病病原學(xué)調(diào)查及其生物安全控制效果評(píng)價(jià)

文│劉英姿 王宏軍 董筱萍 程迪 周鐵忠（遼寧醫(yī)學(xué)院畜牧獸醫(yī)學(xué)院）

孟祥飛（遼寧省錦州義縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心）

于麗玲（遼寧省瓦房店市九龍動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所）

近年來(lái)，我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展迅速，已成為世界養(yǎng)豬大國(guó)。養(yǎng)豬模式也從散養(yǎng)向規(guī)?；?、標(biāo)準(zhǔn)化轉(zhuǎn)變，規(guī)?；B(yǎng)豬模式便于集中實(shí)施生物安全措施，便于疫病控制。但由于規(guī)?；i場(chǎng)在條件建設(shè)、育種和豬病防治等技術(shù)上還處于初級(jí)階段，豬場(chǎng)病原微生物污染和疫病發(fā)生還很嚴(yán)重，所以規(guī)模化養(yǎng)豬場(chǎng)應(yīng)在各方面加強(qiáng)病原微生物的監(jiān)測(cè)和控制，保證豬群健康水平，從而保證規(guī)?；i場(chǎng)的經(jīng)濟(jì)效益和穩(wěn)定發(fā)展。為此，筆者在遼寧省多家規(guī)?；N豬場(chǎng)開(kāi)展了豬主要疫病病原學(xué)調(diào)查，共調(diào)查17種主要疫?。ú≡?，包括豬瘟（CSFV）、豬藍(lán)耳病（PRRSV）、豬圓環(huán)病毒?。≒CV2）、豬偽狂犬?。≒RV）、豬血凝性腦脊髓炎（HEV）、豬細(xì)小病毒?。≒PV）、豬傳染性胃腸炎（TGEV）、豬流行性腹瀉（PEDV）、豬附紅細(xì)胞體病、豬鏈球菌病、豬副傷寒病、豬大腸桿菌病、豬巴氏桿菌病、副豬嗜血桿菌?。℉PS）、豬傳染性胸膜肺炎、豬喘氣病、豬丹毒。在病原調(diào)查的基礎(chǔ)上，制定了相應(yīng)生物安全控制措施，并對(duì)控制效果跟蹤評(píng)價(jià)。本文就遼寧省遼西某規(guī)?；N豬場(chǎng)實(shí)施案例報(bào)道如下。

一、材料與方法

1.材料。

（1）檢測(cè)樣品。采自遼寧省某規(guī)?；N豬場(chǎng)。該種豬場(chǎng)有后備種豬903頭，可繁母豬706頭，種公豬53頭，二元母豬1083頭，優(yōu)良商品豬8870頭。采集不同生長(zhǎng)階段豬血清共928份，其中仔豬血清218份、保育豬血清230份、育肥豬血清310份、后備母豬血清90份、種母豬血清70份、種公豬血清10份。仔豬為1～30日齡，保育豬為31～70日齡，育肥豬為71日齡～出欄，后備母豬為71日齡～首次配種。采集發(fā)病豬的肺臟、脾臟、淋巴結(jié)和肝臟等病料56例，采樣同時(shí)記錄所采病料的動(dòng)物臨床特征資料。上述樣品采集時(shí)間為2012年1月至2013年3月。

（2）檢測(cè)試劑。PCR檢測(cè)試劑：RNA 提取試劑、RNA 酶抑制劑；PCR試劑；引物序列由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成。細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)試劑均由本實(shí)驗(yàn)室配制。

（3）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。SPF級(jí)Balb/c小鼠，雄性，6～8周齡，體重（20±2）克，購(gòu)于吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證號(hào)：SCXK（吉2003-0002）。

2.方法。

（1）病毒檢測(cè)。病毒核酸PCR檢測(cè)。豬藍(lán)耳病采用自主建立的可區(qū)分經(jīng)典毒株和高致病性變異毒株的PCR診斷方法?？乖瓩z測(cè)。豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉應(yīng)用豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉抗原檢測(cè)免疫金標(biāo)試紙條進(jìn)行檢測(cè)。

（2）病原菌檢測(cè)。PCR檢測(cè)。副豬嗜血桿菌，采集被檢豬血液，或心包液、胸腹腔滲出液、心血、肝臟、脾臟和淋巴結(jié)等病料經(jīng)TSA培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌落作為被檢病料，自行設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR方法檢測(cè)。細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)。具體方法按細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)常規(guī)方法進(jìn)行，包括直接涂片染色鏡檢、分離培養(yǎng)和形態(tài)觀察、生化試驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。其中豬喘氣病運(yùn)用ELISA診斷試劑盒檢測(cè)抗體。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。用待測(cè)細(xì)菌培養(yǎng)物接種小鼠，每種待測(cè)細(xì)菌培養(yǎng)物接種小鼠10只，每只腹腔接種0.1毫升（含菌量約為2.0×1010細(xì)菌群落總數(shù)/毫升），同時(shí)取2只小鼠作對(duì)照，腹腔接種0.1毫升生理鹽水，接種后觀察小鼠24～72小時(shí)發(fā)病死亡情況，剖取死亡小鼠組織涂片鏡檢觀察菌體。

3.生物安全管理措施。針對(duì)病原學(xué)調(diào)查結(jié)果，制定了規(guī)?；N豬場(chǎng)生物安全管理措施，包括豬場(chǎng)環(huán)境控制、飼料營(yíng)養(yǎng)和飼養(yǎng)管理、衛(wèi)生消毒、藥物保健、免疫接種和疫病監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)程。

4.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法。所得數(shù)據(jù)采用SPSS13.0軟件進(jìn)行卡方檢驗(yàn)。

二、結(jié)果

1.豬血清樣品病原檢測(cè)結(jié)果。928份血清樣品進(jìn)行17種病原檢測(cè)，共檢測(cè)檢出陽(yáng)性的病原6種，其中陽(yáng)性率最高的是大腸桿菌，陽(yáng)性率達(dá)到23.7%，豬附紅細(xì)胞體次之，達(dá)到12.39%，豬瘟最低為1.3%。檢出的PRRSV為豬藍(lán)耳病美洲型經(jīng)典毒株，陽(yáng)性率達(dá)到6.5%，本場(chǎng)應(yīng)用武漢科前動(dòng)物生物制品有限公司生產(chǎn)的豬藍(lán)耳病經(jīng)典株弱毒疫苗免疫接種，接種后的豬也可能檢出病原陽(yáng)性。

2.病料樣品病原檢測(cè)結(jié)果。對(duì)病料樣品進(jìn)行17種病原檢測(cè)，共檢出陽(yáng)性的病原11種，包括5種病毒，6種細(xì)菌；其中陽(yáng)性率最高的是豬鏈球菌，陽(yáng)性率達(dá)到36.5%，其次是大腸桿菌，達(dá)35.4%，最低的是豬細(xì)小病毒，2.1%；豬瘟和豬藍(lán)耳病陽(yáng)性率分別為3.1%和7.3%（見(jiàn)表1）。

表1 豬場(chǎng)病料樣品病原檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

3.不同豬群病原分布情況。對(duì)不同豬群病原檢出情況統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，仔豬群大腸桿菌陽(yáng)性率所占比例最高，達(dá)到51.6%，未檢出豬瘟、沙門氏菌和副豬嗜血桿菌。保育豬豬流行性腹瀉、傳染性胃腸炎、豬鏈球菌、沙門氏菌、肺炎支原體、附紅細(xì)胞體和豬藍(lán)耳病均較高，所占比例超過(guò)25%。育肥豬豬瘟、豬藍(lán)耳病、豬鏈球菌和肺炎支原體所占比例較高，超過(guò)10%。后備豬豬藍(lán)耳病和沙門氏菌所占比例超過(guò)了10%。豬瘟主要在育肥豬所占比例最高，豬細(xì)小病毒均在種豬群檢出，豬藍(lán)耳病在各階段均有檢出，其中保育豬、育肥豬檢出比例最高，種豬群檢出比例也較高（見(jiàn)表2）。

4.生物安全控制前后病原檢測(cè)結(jié)果。對(duì)該種豬場(chǎng)制定和嚴(yán)格執(zhí)行生物安全管理控制措施，經(jīng)過(guò)半年后按同樣比例和方法采集血清和病料樣品，檢測(cè)上述17種病原體。結(jié)果共檢出4種病原體，比控制前病原體種類減少了7種；檢出的4種病原體包括副豬嗜血桿菌、大腸桿菌、肺炎支原體和附紅細(xì)胞體，其陽(yáng)性率大幅度降低，分別降低了83.7%、93.4%、88.1%和74.5%（見(jiàn)表3）。

三、討論

根據(jù)對(duì)該種豬場(chǎng)的病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果，檢出了11種病原體，而且陽(yáng)性率較高，說(shuō)明該種豬場(chǎng)污染較重，與該場(chǎng)沒(méi)有制定和執(zhí)行嚴(yán)格的生物安全管理控制措施有直接關(guān)系。如引入種豬缺乏病原檢測(cè)，平時(shí)也沒(méi)有病原學(xué)監(jiān)測(cè)環(huán)節(jié)；免疫程序的制定比較盲目，如該豬場(chǎng)原免疫接種的疫病只有豬瘟、豬藍(lán)耳病、豬口蹄疫、豬偽狂犬病、豬肺疫和豬副傷寒。所以，豬傳染性胃腸炎、流行性腹瀉、豬鏈球菌、副豬嗜血桿菌、豬肺炎支原體等病原體污染較重。

開(kāi)展病原學(xué)監(jiān)測(cè)后，根據(jù)檢出的病原種類，重新制定了免疫程序，增加了豬細(xì)小病毒、豬傳染性胃腸炎、流行性腹瀉、豬鏈球菌、副豬嗜血桿菌、豬肺炎支原體、豬大腸桿菌的免疫接種。同時(shí)嚴(yán)格執(zhí)行環(huán)境控制、衛(wèi)生消毒、疫病監(jiān)控等技術(shù)規(guī)程，結(jié)果使豬場(chǎng)污染的病原得到了逐步凈化，病原感染的種類和感染陽(yáng)性率均大幅度降低，疫病病原感染控制效果十分顯著。

規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)養(yǎng)豬數(shù)量多，運(yùn)行環(huán)節(jié)復(fù)雜，一旦發(fā)生病原微生物感染，經(jīng)濟(jì)損失重大，而且有些病原微生物不易清除，會(huì)給養(yǎng)豬場(chǎng)帶來(lái)長(zhǎng)久的危害。因此，必須制定完善可行的生物安全措施，嚴(yán)格執(zhí)行管理，才能保證養(yǎng)豬場(chǎng)健康穩(wěn)定發(fā)展。根據(jù)長(zhǎng)期的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)和研究結(jié)果，制定了包括環(huán)境控制、飼料營(yíng)養(yǎng)和飼養(yǎng)管理、衛(wèi)生消毒、藥物保健、免疫接種和疫病監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)程的生物安全管理措施，并針對(duì)免疫抑制性疾病應(yīng)用了自主開(kāi)發(fā)的復(fù)合免疫增強(qiáng)劑，取得了顯著的效果。該生物安全綜合配套措施經(jīng)過(guò)各地規(guī)?；i場(chǎng)推廣應(yīng)用，產(chǎn)生了顯著的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益。

表2 不同豬群病原分布情況統(tǒng)計(jì)

表3 生物安全控制前后病原檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)