丹葉膠囊對(duì)慢性乙型肝炎肝纖維化外周血T淋巴細(xì)胞亞群的影響

占伯林 張 來(lái) 鄭穎俊

（廣東省深圳市中醫(yī)院 518033）

肝纖維化是各種慢性肝病的病理學(xué)共同基礎(chǔ)，慢性乙型肝炎病變活動(dòng)及進(jìn)展，并非病毒本身所致，與人體的免疫應(yīng)答及調(diào)控紊亂有密切的關(guān)系[1]，本文將對(duì)丹葉膠囊治療慢性乙型肝炎肝纖維化的臨床療效及對(duì)外周血T淋巴細(xì)胞亞群的影響略作探討，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

選擇慢性乙型肝炎肝纖維化患者80例，全部病例均為我院2008年10月～2011年10月門診及住院患者。隨機(jī)分為兩組，治療組40例，其中男24例，女16例，年齡23～58歲，平均（34.2±9.4）歲；對(duì)照組40例，其中男25例，女15例，年齡21～59歲，平均（36.7±8.3）歲。兩組患者基本資料經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理比較，無(wú)顯著性差異（P＞0.05），具有可比性。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)

依據(jù)2000年9月中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病及寄生蟲學(xué)會(huì)《病毒性肝炎防治方案》[2]及中華肝臟病學(xué)會(huì)肝纖維化學(xué)組制定的《肝纖維化診斷及療效評(píng)估共識(shí)》

[3]。

（1）病史≥6個(gè)月，血清HBsAg陽(yáng)性，血清ALT異常并小于正常值上限的10倍；總膽紅素（TBil）≤ 54μmol/L。

（2）血清纖維化指標(biāo)：透明質(zhì)酸（HA）；層粘連蛋白（LN）；Ⅲ型前膠原肽（P-Ⅲ-P）；Ⅳ型膠原（Ⅳ-C），上述指標(biāo)異常或任意一項(xiàng)高于正常值2倍以上。

（3）B超檢查表現(xiàn)為肝實(shí)質(zhì)回聲增強(qiáng)、增粗，肝臟表面不光滑，邊緣變鈍，肝臟、脾臟可增大。

1.3 納入標(biāo)準(zhǔn)

（1）符合上述診斷標(biāo)準(zhǔn)。（2）年齡在18～65歲之間。（3）簽署知情同意書。

1.4 排除標(biāo)準(zhǔn)

（1）TBiI＞54μmol/L，診斷為重型或有重型肝炎傾向者。（2）酒精性、藥物性、免疫性等其它肝臟疾病。（3）肝硬化失代償期患者。（4）入選前6個(gè)月內(nèi)使用過(guò)干擾素等抗病毒藥物、免疫調(diào)節(jié)劑或其它治療肝纖維化藥物者。

1.5 治療方法

兩組均給予基礎(chǔ)護(hù)肝治療，前4周靜滴甘利欣（正大天晴制藥，30ml/d），谷胱甘肽（積華藥業(yè)，1.2/d）；第5周至24周，單用五酯膠囊（五味子甲素，四川禾正制藥，2粒/次，3次/天）。治療組加用丹葉膠囊，組成為丹參，葉下珠（比例為2：1，每粒含生藥0.25g），由我院制劑室提供，4粒/次，3次/天，療程均為24周。

1.6 觀測(cè)指標(biāo)

1.6.1 肝功能 血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、總膽紅素（TBil），采用Olympus2700型全自動(dòng)生化儀檢測(cè)。治療前和用藥4周、8周、12周、24周各檢查一次。

1.6.2 肝纖維化血清學(xué)指標(biāo) HA、LN、P-Ⅲ-P、IV-C用放射免疫法測(cè)定，治療前、用藥12周及24周各檢查一次。

1.6.3 T淋巴細(xì)胞亞群指標(biāo) CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+，采用美國(guó)BD公司生產(chǎn)的FAGS Cal-ibur型流式細(xì)胞儀及試劑盒。

1.6.4 安全性指標(biāo) 治療前后檢測(cè)血、尿、大便常規(guī)、心電圖、腎功能及監(jiān)測(cè)試驗(yàn)中出現(xiàn)的不良反應(yīng)。

1.7 統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS13.0軟件處理。計(jì)量資料數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布的采用t檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)用（x-±s）表示，P＜0.05時(shí)提示數(shù)據(jù)存在差異，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 治療前后兩組肝功能變化情況比較，見(jiàn)表1。

表1 兩組治療前后肝功能的變化情況比較

表1 兩組治療前后肝功能的變化情況比較

注：治療前與對(duì)照組相比△P＞0.05，治療組治療前后相比，P＜0.01，治療后與對(duì)照組相比 *P＞0.05。

組 別 時(shí)間 ALT（U/L） AST（U/L） TB（umol/L）治療組 0周 157.26±37.68△●73.24±23.72△●36.21±8.33△●24 周 67.19±16.91* 36.83±9.65* 17.38±4.67*對(duì)照組 0周 149.61±35.84 76.07±25.60 38.14±7.18 24 周 63.43±17.23 38.39±10.93 16.87±5.23

2.2 兩組治療前后肝纖維化指標(biāo)的變化情況，見(jiàn)表2。

表2 兩組患者治療前后血清肝纖維化指標(biāo)變化情況比較,ng/ml）

表2 兩組患者治療前后血清肝纖維化指標(biāo)變化情況比較,ng/ml）

注：治療前與對(duì)照組相比△P＞0.05，治療組治療前后相比●P＜0.01，治療后與對(duì)照組相比*P＜0.01。

組 別 時(shí)間 HA LN P-Ⅲ-P IV-C治療組 0周 428.17±94.67△● 167.12±45.37△● 186.20±46.91△● 193.14±43.62△●24周 289.43±61.85* 107.28±26.81* 127.18±28.87* 136.29±30.39*對(duì)照組 0周 439.10±88.13 173.08±43.26 178.25±42.13 187.37±40.03 24周 341.09±76.14 129.15±28.37 152.30±37.31 159.12±34.81

2.3 兩組治療前后T淋巴細(xì)胞亞群的變化情況，見(jiàn)表3。

表3 兩組治療前后T淋巴細(xì)胞亞群的變化情況比較

表3 兩組治療前后T淋巴細(xì)胞亞群的變化情況比較

注：治療前與對(duì)照組相比△P＞0.05，治療組治療前后相比●P＜0.05，●●P＜0.01，治療后與對(duì)照組相比 *P＜0.05，**P＜0.01。

組 別 時(shí)間 CD3+（%） CD4+（%） CD8+（%） CD4+/CD8+治療組 0周 63.19±7.38△●● 35.64±5.90△● 27.31±4.18△●● 1.37±0.41△●●24周 69.57±7.92* 38.18±5.27** 23.89±5.39** 1.68±0.59**對(duì)照組 0周 65.73±6.84 34.21±6.43 26.90±5.26 1.34±0.53 24周 64.97±8.03 34.73±5.81 27.69±5.47 1.30±0.48

2.4 安全性及不良反應(yīng)

治療期間兩組均未發(fā)現(xiàn)不良反應(yīng)。

3 討論

肝纖維化是各種慢性肝病發(fā)展過(guò)程中共同的病理基礎(chǔ)，中醫(yī)學(xué)歸屬于“脅痛”、“積聚”等范疇。目前對(duì)本病病因病機(jī)的認(rèn)識(shí)主要為濕熱瘀毒，如霍清萍等[4]認(rèn)為,瘀熱互結(jié)是肝纖維化的重要病理基礎(chǔ),清熱化瘀是治療肝纖維化的一條重要途徑。本研究丹葉膠囊所含的葉下珠微苦甘，性涼，具有清熱解毒、消積之功，實(shí)驗(yàn)證明其對(duì)乙肝病毒有抑制作用，及有保護(hù)肝細(xì)胞及提高細(xì)胞免疫力等作用。丹參苦，微寒，具有活血止痛，涼血消癰等功效，藥理研究證明其有改善肝臟微循環(huán)，促進(jìn)肝組織修復(fù)、再生等作用。兩藥相輔相成，共奏清熱解毒、活血化瘀之功。

肝纖維化機(jī)制為細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的合成與降解失調(diào)，病理特征為膠原纖維生成及大量ECM在Disse間隙沉積。血清纖維化標(biāo)志物HA、LN、P-Ⅲ-P和Ⅳ-C屬細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）代謝成分，已作為無(wú)創(chuàng)傷診斷肝纖維化的常用血清學(xué)指標(biāo)，本研究結(jié)果治療組肝纖維化指標(biāo)HA、LN、P-Ⅲ-P和Ⅳ-C均較治療前明顯下降（P＜0.01），且較對(duì)照組有顯著差異（P＜0.01），說(shuō)明丹葉膠囊具有較好的抗肝纖維化作用。

慢性乙型肝炎患者體內(nèi)存在著不同程度細(xì)胞免疫功能紊亂，使機(jī)體不能有效清除入侵的HBV，導(dǎo)致疾病的慢性化。有研究表明CD4+、CD8+T細(xì)胞在慢性肝炎、重癥肝炎到肝硬化呈現(xiàn)逐漸減少，提示T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)與慢性乙型肝炎病情進(jìn)展有一定關(guān)系，且HBV-DNA陽(yáng)性患者與HBV DNA陰性組比較，CD4+/CD8+值有明顯差異（P＜0.05），CD4+減少和CD8+增加，反映了T淋巴細(xì)胞亞群失衡和細(xì)胞免疫功能紊亂[5]。既往認(rèn)為肝臟內(nèi)免疫細(xì)胞主要引起肝臟炎癥，但近年來(lái)的研究表明免疫細(xì)胞可直接調(diào)節(jié)肝臟星狀細(xì)胞功能，可能在肝纖維化進(jìn)程中起著更為重要的作用，如在無(wú)T淋巴細(xì)胞小鼠的CCl4肝纖維化模型中加入CD8+T細(xì)胞會(huì)促進(jìn)肝星狀細(xì)胞激活并造成丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶升高；加入CD4+細(xì)胞對(duì)肝纖維化無(wú)影響，提示CD8+細(xì)胞在肝纖維化形成中有更加重要作用[6]。本研究治療組治療后CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均有不同程度提高（P＜0.01或0.05），CD8+下降（P＜0.01），較對(duì)照組有顯著差異（P＜0.01或0.05），說(shuō)明丹葉膠囊對(duì)調(diào)節(jié)特異性免疫細(xì)胞功能有一定的作用，亦可能通過(guò)此途徑間接起到抗肝纖維化的作用。

本研究結(jié)果表明丹葉膠囊具有較好的抗肝纖維化及調(diào)節(jié)免疫的作用，為治療慢性乙型肝炎肝纖維化有效的純中藥制劑。

[1] 陳灝珠.主編.實(shí)用內(nèi)科學(xué)[M].第11版,北京∶人民衛(wèi)生出版社 ,2001∶315.

[2] 中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病寄生蟲病學(xué)會(huì).病毒性肝炎防治方案[J].中華肝臟病學(xué)雜志，2000，8（6）∶ 324.

[3] 中華肝臟病學(xué)會(huì)肝纖維化學(xué)組.肝纖維化診斷及療效評(píng)估共識(shí)[J].藥品評(píng)價(jià)，2007，4（4）：265-66.

[4] 霍清萍,張延昭.瘀熱互結(jié)與肝纖維化關(guān)系的臨床研究[J].新中醫(yī),1999 ,37 （4）：36.

[5] 劉英，胡萍.乙型病毒性肝炎患者T淋巴細(xì)胞亞群的測(cè)定與其臨床意義分析[J].臨床消化病雜志，2010,22（6）∶50-51.

[6] Tang JT. Fang JY. Gu WQ，et al. T cell immune response is correlated with fibrosis and inflammatory activity in hepatitis B cirrhotics [J]，World J Gastroenterol.2006.12（19）∶3015-3019.