白蓮參膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

曲 墨,柳 藝,隋殿軍

(長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué),長(zhǎng)春130117)

肺癌發(fā)生于支氣管黏膜上皮,亦稱支氣管癌。目前,治療肺癌的主要方法有手術(shù)治療、放射治療、化學(xué)治療、介入治療、生物治療、冷凍治療、電化學(xué)治療、熱療及中醫(yī)藥治療等[1]。中醫(yī)藥治療肺癌有病灶穩(wěn)定率高、生存期長(zhǎng)、抗復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移等優(yōu)勢(shì)。白蓮參膠囊由白花蛇舌草、半枝蓮、參靈菌質(zhì)3味藥組成的,具有清熱解毒,固本益氣的功效[2-3]。本品組方獨(dú)特,配伍新穎,治則明確[4]。處方以清熱解毒藥為君,以理氣化瘀藥為臣,從根本上達(dá)到治療非小細(xì)胞肺癌的目的[5]。筆者以高效液相色譜法建立白蓮參膠囊的質(zhì)量控制方法,控制產(chǎn)品質(zhì)量,保證臨床療效。

1 設(shè)備與材料

1.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)備 安捷倫1200液相色譜儀,安捷倫ZORBAX SB 色譜柱(4.6 mm×250 mm,5 μ m),TP-150超聲波清洗機(jī),BP211D電子分析天平。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料 野黃芩苷由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供,甲醇為色譜純(美國(guó)Fisher公司),水為超純水,其他試劑均為分析純。

2 處方與制備

白蓮參膠囊由白花蛇舌草、半枝蓮和參靈菌質(zhì)組成。處方中只有半枝蓮被《中國(guó)藥典》2010年版一部收載,所以選擇半枝蓮中野黃芩苷的含量為質(zhì)量控制的指標(biāo)。白花蛇舌草加10倍量水煎煮2次,1 h/次,合并煎液,濾過(guò),濾液濃縮至相對(duì)質(zhì)量濃度1.08～1.10(40～45℃)的清膏,以8 000 r/min離心20 min后,上清液濃縮,干燥,粉碎成細(xì)粉;半枝蓮加10倍量水煎煮3次,1.5 h/次,合并煎液,濾過(guò),濾液用陶瓷膜(50 nm)過(guò)濾,滲透液濃縮,干燥,粉碎成細(xì)粉;參靈菌質(zhì)粉成細(xì)粉與上述粉末混勻,制粒,裝入膠囊,制成1 000粒 ,即得 。

2.1 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;甲醇-0.2%磷酸溶液(33∶67)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為335 nm;柱溫為30℃;流速為 1.0 mL/min;進(jìn)樣量為10 μ L;理論板數(shù)按野黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1 500。

2.2 藥液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 取野黃芩苷對(duì)照品適量,精密稱定,加甲醇制成每1 mL 含40 μ g的溶液,即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品內(nèi)容物3 g,研細(xì),精密稱定,加甲醇90 mL,置于100 mL量瓶中,超聲處理(功率 250 W,頻率25 kHz)30 min,放冷,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,精密量取25 mL,蒸干,殘?jiān)?0%甲醇溶解,并轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中,稀釋至刻度,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液,即得。

2.2.3 陰性對(duì)照品溶液的制備 將缺少半枝蓮的陰性樣品制成陰性對(duì)照品溶液。結(jié)果顯示,在野黃芩苷相同保留時(shí)間處無(wú)任何色譜峰,表明陰性對(duì)照無(wú)干擾。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 以野黃芩苷為對(duì)照品,以野黃芩苷進(jìn)樣量為橫坐標(biāo),峰面積值為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,Y=224.84X+21.61,r=0.999 9,結(jié)果表明,野黃芩苷進(jìn)樣量在 0.0808～ 0.404 μ g范圍內(nèi),進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.3.2 精密度考察 取野黃芩苷對(duì)照品溶液,重復(fù)進(jìn)樣6次,并計(jì)算峰面積RSD值,RSD=0.153 9%(n=6),符合要求。

2.3.3 穩(wěn)定性的考察 取野黃芩苷對(duì)照品溶液和白蓮參膠囊供試品溶液,依法測(cè)定,結(jié)果表明,2者在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.4 重現(xiàn)性的考察 取樣品6份,精密稱定,制成供試品溶液,依法測(cè)定,計(jì)算野黃芩苷含量,RSD=0.38%(n=6),符合要求。

2.3.5 加樣回收率試驗(yàn) 取樣品6份,精密稱定,分別精密加入等量的野黃芩苷對(duì)照品,依法測(cè)定,計(jì)算回收率,結(jié)果表明,平均回收率為97.64%,RSD=0.79%(n=6),符合要求。

2.4 樣品含量測(cè)定 測(cè)定3批樣品中野黃芩苷的含量,平均含量為0.194 3 mg/g,將平均含量下浮20%作為制劑的含量測(cè)定限度,即每粒含半枝蓮以野黃芩苷(C21H18O12)計(jì) ,不得少于 78 μ g 。

3 結(jié)語(yǔ)

白蓮參膠囊為中藥六類新藥,現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明,處方中白花蛇舌草和參靈菌質(zhì)具有抗腫瘤和增強(qiáng)機(jī)體免疫力的作用,半枝蓮的水提取物有明顯的抗肺癌活性,本產(chǎn)品用于肺癌的輔助治療,本試驗(yàn)對(duì)其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了研究。實(shí)驗(yàn)用高效液相色譜法對(duì)君藥半枝蓮中的主要成分野黃芩苷含量進(jìn)行了測(cè)定。測(cè)定結(jié)果表明,該方法操作較為簡(jiǎn)單,色譜峰分離度好,精密度與回收率符合要求,重現(xiàn)性好,便于對(duì)白蓮參膠囊的質(zhì)量進(jìn)行控制。試驗(yàn)測(cè)定的三批樣品系不同批次藥材制成,測(cè)量結(jié)果比較穩(wěn)定,建立的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為本制劑提供含量測(cè)定的依據(jù)。規(guī)定本品含半枝蓮以野黃芩苷(C21H18O12)計(jì),每粒不得少于78 μ g。

[1]尤杰.劉嘉湘教授辨治肺癌經(jīng)驗(yàn)[J].長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2011,27(2):185-186.

[2]張秀娟,楊?yuàn)檴?半枝蓮化學(xué)成分及提取物抗腫瘤作用的研究現(xiàn)狀[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥,2008,4(8):75-77.

[3]席榮英,李聰輝,王翠紅.半枝蓮微量元素含量測(cè)定[J].微量元素與健康研究,2002(2):37-38.

[4]YinX,ZhouJ;JieC.Anticancer activity and mechanism of Scutellaria barbata extract on human lung cancer cell line A549[J].Life Sci,2004,75(18):2233-2244.

[5]肖海濤,李銑.半枝蓮化學(xué)成分和藥理活性研究進(jìn)展[J].中藥研究與信息,2005,7(4):21-25.