3 株方斑東風(fēng)螺病原希瓦氏菌對35 種常用抗菌藥物的敏感性試驗

賈春紅 李淑芳 張繼東

(廣東海洋大學(xué)農(nóng)學(xué)院，廣東湛江 524088)

腐敗希瓦氏菌和海藻希瓦氏菌是人類的病原菌之一，能夠感染人引起脾膿腫［1］、軟組織感染［2］以及椎間盤炎［3］等多種疾病，同時也可以引起水產(chǎn)動物發(fā)病，給養(yǎng)殖業(yè)造成經(jīng)濟損失。近幾年以來國內(nèi)相繼發(fā)現(xiàn)希瓦氏菌屬細菌感染大黃魚［4］、大菱鲆［5］、異育銀鯽［6］等水產(chǎn)動物的研究報道，但是關(guān)于這類疾病防治的報道很少。本文研究了3株方斑東風(fēng)螺病原希瓦氏菌對35 種抗菌藥物的敏感性，為抗生素防治希瓦氏菌屬細菌引起的水產(chǎn)動物細菌性疾病提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試藥敏紙片

35 種常用藥敏紙片，購自杭州天和微生物試劑有限公司。

1.1.2 供試菌株及制備

腐敗希瓦氏菌、鮑魚希瓦氏菌和海藻希瓦氏菌共3 株，從廣東某養(yǎng)殖場患病的方斑東風(fēng)螺體內(nèi)分離。經(jīng)復(fù)壯、純化后，接種到含3.5%Nacl的營養(yǎng)肉湯中，35℃培養(yǎng)18～24h，供試。

1.1.3 培養(yǎng)基

3.5%Nacl 普通營養(yǎng)肉湯，MH 瓊脂，均按常規(guī)方法制備。

1.2 方法

采用K－B 法。用滅菌的棉簽蘸取菌液少許，以下滴液為宜，均勻涂于MH 瓊脂平板上，待干后，用滅菌鑷子分別取藥敏紙片均勻貼于MH 瓊脂培養(yǎng)基表面，并用鑷子輕按紙片中心，使其附著嚴(yán)密。將貼好紙片的平板倒置培養(yǎng)，35℃培養(yǎng)18～24h 取出平板，用毫米測微尺測定抑菌圈直徑。根據(jù)藥物紙片周圍有無抑菌圈及抑菌圈直徑大小來判斷供試菌株對各種藥物的敏感程度，可分為敏感、中介和耐藥3 種。

2 結(jié)果

2.1 腐敗希瓦氏菌對35 種常用抗菌藥物的敏感

性試驗結(jié)果

腐敗希瓦氏菌對大觀霉素、氯霉素、頭孢吡肟、諾氟沙星、鏈霉素、復(fù)方新諾明敏感;對環(huán)丙沙星、紅霉素、四環(huán)素、左氟沙星、克拉霉素、米諾環(huán)素、頭孢呋辛、氨曲南、頭孢噻肟、氧氟沙星、卡那霉素、慶大霉素、多粘菌素B 中介;對其它藥耐藥，見表1。

表1 腐敗希瓦氏菌對35 種常用抗菌藥物的敏感性試驗結(jié)果

2.2 鮑魚希瓦氏菌對35 種常用抗菌藥物的敏感性試驗結(jié)果

鮑魚希瓦氏菌對頭孢吡肟、大觀霉素、頭孢噻肟、氨曲南、頭孢他啶、頭孢西丁、頭孢曲松、紅霉素、哌拉西林、頭孢哌酮、米諾環(huán)素、克拉霉素、多粘菌素B、妥布霉素、慶大霉素敏感;對頭孢呋辛、呋喃妥因、環(huán)丙沙星、卡那霉素、左氟沙星、氧氟沙星中介;對其它藥耐藥，見表2。

表2 鮑魚希瓦氏菌對35 種常用抗菌藥物的敏感性試驗結(jié)果

2.3 海藻希瓦氏菌對35 種常用抗菌藥物的敏感性試驗結(jié)果

海藻希瓦氏菌對大觀霉素、頭孢吡肟、氨曲南、環(huán)丙沙星、頭孢噻肟、頭孢曲松、紅霉素、氧氟沙星、左氟沙星、頭孢他啶、頭孢呋辛、氯霉素、哌拉西林、克拉霉素、諾氟沙星、米諾環(huán)素、復(fù)方新諾明、鏈霉素、呋喃妥因、慶大霉素、多粘菌素B 敏感;對頭孢西丁、頭孢哌酮、四環(huán)素、妥布霉素、卡那霉素、萬古霉素中介;對其它藥耐藥，見表3。

表3 海藻希瓦氏菌對35 種常用抗菌藥物的敏感性試驗結(jié)果

3 討論

(1)試驗結(jié)果顯示，腐敗希瓦氏菌對大觀霉素、氯霉素、頭孢吡肟、諾氟沙星、鏈霉素、復(fù)方新諾明6 種抗菌藥物敏感，與呂俊超［5］報道的對氯霉素和復(fù)方新諾明不敏感，對氟哌酸敏感不一致，卻與林克冰［4］報道的相一致，可能與分離的菌株有關(guān)。秦蕾［6］報道對鏈霉素耐藥，也與本試驗不一致，可能與產(chǎn)生耐藥性有關(guān)。因此，在選擇用藥時要根據(jù)藥敏試驗選擇敏感性藥物，避免浪費。

(2)試驗結(jié)果顯示，鮑魚希瓦氏菌對頭孢吡肟、大觀霉素、頭孢噻肟、氨曲南、頭孢他啶、頭孢西丁、頭孢曲松、紅霉素、哌拉西林、頭孢哌酮、米諾環(huán)素、克拉霉素、多粘菌素B、妥布霉素、慶大霉素敏感。目前，關(guān)于鮑魚希瓦氏菌對抗生素的敏感性報道還很少，本研究為以后防治由鮑魚希瓦氏菌引起的疾病提供參考。

(3)試驗結(jié)果顯示，海藻希瓦氏菌對大觀霉素、頭孢吡肟、氨曲南、環(huán)丙沙星、頭孢噻肟、頭孢曲松、紅霉素、氧氟沙星、左氟沙星、頭孢他啶、頭孢呋辛、氯霉素、哌拉西林、克拉霉素、諾氟沙星、米諾環(huán)素、復(fù)方新諾明、鏈霉素、呋喃妥因、慶大霉素、多粘菌素B 21 種抗菌藥物敏感。說明海藻希瓦氏菌的抗菌譜較廣，其對抗革蘭氏陰性菌的抗菌藥物都比較敏感。Melanie Gressier［3］報道給感染海藻希瓦氏菌的椎間盤炎的病人注射阿米卡星和頭孢曲松鈉2d，再口服環(huán)丙沙星12w，可以康復(fù)，但是本試驗卻發(fā)現(xiàn)海藻希瓦氏菌對阿米卡星耐藥，可能與使用的藥敏紙片有關(guān)，也有可能與在試驗時培養(yǎng)基的厚度有關(guān)。張彩芳等［7］報道配制藥敏培養(yǎng)基要選擇合適的瓊脂及恰當(dāng)?shù)沫傊瑵舛?瓊脂平板厚應(yīng)為4.0mm，最大允許差異±1.0mm。因此，試驗時要嚴(yán)格按照K－B 法的要求進行，減少人為因素對試驗結(jié)果的影響。

［1］Norwani Basir，Alice Moi Ling Yong，Vui Heng Chong.Shewanella putrefaciens，a rare cause of splenic abscess［J］.Journal of Microbiology，Immunology and Infection，2012，45:151－153.

［2］N.Rouzic，G.Hery－Arnaud，S.Jaffuel，et al.Soft tissue infection associated with bacteremia caused by Shewanella putrefaciens［J］.Pathologie Biologie，2012，60:e27–e29.

［3］Melanie Gressier，Didier Mbayo，Herve Deramond，et al.First case of human spondylodiscitis due to Shewanella algae［J］.International Journal of Infectious Diseases，2010，14S:e261–e264.

［4］林克冰，周宸，劉家富，等.海水網(wǎng)箱養(yǎng)殖大黃魚病原菌研究［J］.海洋科學(xué)，1999，4:58－62.

［5］呂俊超.養(yǎng)殖大菱鲆病原菌的分離鑒定組織病理學(xué)及免疫組織化學(xué)［D］.山東:中國海洋大學(xué)碩士論文，2008.

［6］秦蕾，張曉君，畢可然.一種新的異育銀鯽病原－腐敗希瓦氏菌［J］.微生物學(xué)報，2012，52(5):558－565.

［7］張彩芳，張愛君.紙片擴散法藥敏試驗條件的選擇［J］.寧夏醫(yī)學(xué)雜志，2006，28(16):946－947.