續(xù)筋接骨膠囊抗炎、鎮(zhèn)痛作用實(shí)驗(yàn)研究

王艷麗，馬育軒，李冀，王燁燃，周海純

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040)

續(xù)筋接骨膠囊是在臨床驗(yàn)方的基礎(chǔ)上配伍而成，主要由土鱉蟲、血蝎、骨碎補(bǔ)、乳香、紅花、當(dāng)歸、續(xù)斷等組成。方中土鱉蟲首載于有破血逐瘀，續(xù)筋接骨之功;骨碎補(bǔ)能補(bǔ)腎強(qiáng)骨，續(xù)傷止痛;續(xù)斷可補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨、調(diào)血脈、續(xù)折傷;配以血竭的活血散瘀，乳香的鎮(zhèn)痛作用，以及紅花活血通經(jīng)，祛瘀止痛，當(dāng)歸補(bǔ)血活血的功效。諸藥合用，共奏接骨續(xù)折，消腫止痛，活血散瘀之功。本實(shí)驗(yàn)以續(xù)筋接骨膠囊為受試藥物，觀察其對(duì)大鼠足趾腫脹、小鼠耳廓腫脹、小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性及小鼠痛閾值的影響，探討續(xù)筋接骨膠囊的抗炎和鎮(zhèn)痛作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明種小鼠，雄性30只，雌性60只，體質(zhì)量18～22g;Wistar大鼠24只，體質(zhì)量180～200g，雌雄各半。均由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥物安全性評(píng)價(jià)中心提供，許可證號(hào):SYXK黑2011001。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物 續(xù)筋接骨膠囊是由土鱉蟲、血蝎、骨碎補(bǔ)、乳香、紅花、當(dāng)歸、續(xù)斷等組成，由佳木斯中藥廠提供，規(guī)格:0.35g/粒。阿司匹林由哈爾濱泰華藥業(yè)有限公司提供，規(guī)格:0.5g/片。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 電子天平(梅特勒－托利多儀器(上海)有限公司，型號(hào)PL602－S);722光柵分光光度計(jì)(上海第三分析儀器廠);YSD－4G型藥理生理實(shí)驗(yàn)多用儀(淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司)。

1.4 分組及給藥

Wistar大鼠24只，雌雄各半，隨機(jī)分為續(xù)筋接骨膠囊組、陽性對(duì)照(骨折挫傷膠囊)組和模型組3組，每組8只。續(xù)筋接骨膠囊組給予續(xù)筋接骨膠囊2.268g/kg，模型組給予等體積生理鹽水，陽性對(duì)照組給予阿司匹林0.1359/kg。各組動(dòng)物均灌胃給藥，連續(xù)給藥7天。

昆明種小鼠60只，雌雄各半，隨機(jī)分為3組，每組20只。續(xù)筋接骨膠囊組給予續(xù)筋接骨膠囊3.2g/kg，模型組給予等體積生理鹽水，陽性對(duì)照組給予阿司匹林0.19g/kg，均灌胃給藥，連續(xù)給藥7天。

取18～22g經(jīng)痛閾篩選合格(痛閾在10～20s)的雌性小鼠30只，隨機(jī)分為3組，續(xù)筋接骨膠囊組給予續(xù)筋接骨膠囊3.2g/kg，空白對(duì)照組給予同體積生理鹽水，陽性對(duì)照組給予阿司匹林0.19g/kg，均灌胃給藥。

1.5 指標(biāo)檢測(cè) 1)大鼠灌胃給藥7天，末次給藥后0.5h，右后足趾腱膜下注射1%角叉菜膠0.05ml。用毛細(xì)管放大測(cè)量裝置，觀察各鼠足趾體積變化，以致炎后體積減致炎前正常體積的差值，統(tǒng)計(jì)對(duì)大鼠足趾腫脹的影響。2)在連續(xù)給藥7天后的小鼠中，各組隨機(jī)取10只，末次給藥1h后于小鼠右耳廓兩面均勻涂布二甲苯0.02ml/只致炎，致炎后3h斷椎處死。剪下兩耳，用4mm直徑打孔器在左右耳同一部位打下圓耳片分別稱重，以左耳為對(duì)照。3)各組剩余的10只小鼠末次給藥1h后，均靜脈注射0.5%伊文思藍(lán)生理鹽水溶液0.1ml/10g，隨即腹腔注射 0.6% 醋酸 0.2ml/只，20min后斷椎處死，用6ml生理鹽水分3次洗滌腹腔，吸出洗滌液、合并后加入生理鹽水至10ml，3 000轉(zhuǎn)離心15min，取上清液于590nm處測(cè)定光密度，以平均光密度值做t檢驗(yàn)。4)取體質(zhì)量18～22g經(jīng)痛閾篩選合格(痛閾在10～20s)的雌性小鼠30只，隨機(jī)分為3組。測(cè)定其自然放在熱板上至出現(xiàn)舔后足所需時(shí)間作為該鼠正常痛閾值，待恢復(fù)3h后給藥。續(xù)筋接骨膠囊組3.2g/kg，空白對(duì)照組給予同體積生理鹽水，陽性對(duì)照組給予阿司匹林0.19g/kg，均灌胃給藥。給藥后30、60min分別測(cè)小鼠痛閾值。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 13.0處理，以均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差(s)表示，進(jìn)行成組設(shè)計(jì)t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 續(xù)筋接骨膠囊對(duì)大鼠足趾腫脹的影響 見表1。

表1 續(xù)筋接骨膠囊對(duì)大鼠足趾腫脹的影響(s，n=8)

表1 續(xù)筋接骨膠囊對(duì)大鼠足趾腫脹的影響(s，n=8)

注:與模型組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01。

組別 藥量g/kg對(duì)照足體積(cm2致炎后不同時(shí)間足腫脹度(cm2)0.5h 1.0h 2.0h 3.0h 4.0h續(xù)筋接骨膠囊組 2.268 1.014 ±0.164 1.287 ±0.143 1.689 ±0.178* 1.856 ± 0.147* 1.769 ±0.257*)1.662 ± 0.246陽性對(duì)照組 0.135 0.988 ±0.967 1.276 ±0.14 1.649 ±0.126＊＊ 1.875 ±0.139* 1.816 ±0.181* 1.729 ±0.14模型組 － 0.992 ±0.260 1.482 ±0.316 1.885 ±0.166 2.015±0.132 1.98 ±0.152 1.832 ±0.102

表1結(jié)果顯示，致炎后1、2、3h，續(xù)筋接骨膠囊組與模型組比較，大鼠足趾腫脹程度均具有顯著性差異(P ＜0.05)。

2.2 續(xù)筋接骨膠囊對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響見表2。

表2 續(xù)筋接骨膠囊對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響(s)

表2 續(xù)筋接骨膠囊對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響(s)

注:與模型組比較，*P ＜0.05。

組別 給藥量(g/kg)n 腫脹程度(mg)續(xù)筋接骨膠囊組 3.20 10 2.71 ±1.054*陽性對(duì)照組 0.19 10 2.80 ±0.918*模型組10 3.60 ±0.751－

表2結(jié)果表明，續(xù)筋接骨膠囊組與模型組比較，小鼠耳廓腫脹程度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

2.3 續(xù)筋接骨膠囊對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高的影響 見表3。

表3 對(duì)腹腔注射醋酸所致小鼠毛細(xì)血管通透性增高的影響(s)

表3 對(duì)腹腔注射醋酸所致小鼠毛細(xì)血管通透性增高的影響(s)

注:與模型組比較，*P ＜0.05。

組別 給藥量(g/kg)n 光密度續(xù)筋接骨膠囊組 3.20 10 0.427 ±0.111*陽性對(duì)照組 0.19 10 0.451 ±0.071*模型組10 0.541 ±0.110－

表3結(jié)果顯示，續(xù)筋接骨膠囊組與模型組比較，小鼠毛細(xì)血管通透性明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

2.4 續(xù)筋接骨膠囊對(duì)小鼠熱板痛閾值的影響 見表4。

表4結(jié)果表明，續(xù)筋接骨膠囊組與模型組比較，給藥后30、60min小鼠痛閾值明顯升高，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05)。

表4 續(xù)筋接骨膠囊對(duì)小鼠熱板痛閾值的影響(s，n=10)

表4 續(xù)筋接骨膠囊對(duì)小鼠熱板痛閾值的影響(s，n=10)

注:與模型組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01。

組別 給藥量(g/kg)給藥后不同時(shí)間痛閾值(s)30min 60min續(xù)筋接骨膠囊組 3.20 22.4 ±4.25 31.7 ±4.29* 31.3 ±4.58給藥前痛閾(s)*陽性對(duì)照組 0.19 22.6 ±5.37 31.1 ±3.11* 32.4 ±7.75＊＊模型組 － 22.8 ±2.93 26.8 ±3.57 27.1 ±3.7

3 討論

炎癥是骨折的一種常見并發(fā)癥，骨折愈合過程如果伴隨感染可導(dǎo)致愈合明顯延遲甚至骨不連的發(fā)生。尤其在創(chuàng)傷骨折中，持續(xù)性的炎癥和感染的存在影響骨再生。骨折后使用抗炎藥物，不僅有助于緩解紅腫痛等癥狀，而且阻止炎癥因子抑制骨再生可能是潛在的治療方法。向大鼠足趾注射角叉菜膠建立炎癥模型方法實(shí)用，藥物抗炎效果可作定量測(cè)定，是目前最常用的篩選抗炎藥物的方法［1］。二甲苯的致炎作用又快又強(qiáng)，小鼠耳廓腫脹法不需特殊的設(shè)備，簡(jiǎn)便易行，實(shí)驗(yàn)時(shí)間短，模型復(fù)制成功率高，適用于抗炎藥常規(guī)篩選［1］。熱刺激法是比較通用的鎮(zhèn)痛試驗(yàn)研究方法。上述方法觀察到的結(jié)果客觀可靠，可作為續(xù)筋接骨膠囊抗炎、鎮(zhèn)痛作用的參考。本研究通過觀察續(xù)筋接骨膠囊對(duì)大鼠足趾腫脹、小鼠耳廓腫脹、小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性及小鼠痛閾值的影響，說明續(xù)筋接骨膠囊具有較好的抗炎和鎮(zhèn)痛作用。

［1］李儀奎.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)［M］.上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2006.