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    中國荷斯坦牛IL8基因SNP-233(G>A)不同基因型的表達差異研究

    2013-08-04 06:49:06陳仁金王珍珍楊章平毛永江冀德君朱孝榮
    中國牛業(yè)科學 2013年6期
    關鍵詞:基因型定量乳房

    陳仁金,王珍珍,楊章平,毛永江,冀德君,朱孝榮

    (1.徐州醫(yī)學院實驗動物中心,江蘇 徐州 212004;2.徐州醫(yī)學院神經(jīng)生物學研究中心,江蘇 徐州 212004;3.揚州大學動科學院,江蘇 揚州 22500)

    乳房炎是奶牛最常見的疾病之一,在世界范圍內造成了巨大的經(jīng)濟損失,研究者嘗試許多方法用于控制這種復雜的疾病,包括改進牧場的管理、對干奶牛進行抗生素治療、注射疫苗和監(jiān)控臨床乳房炎等。隨著分子生物技術的發(fā)展,用生物技術手段來預防和控制乳房炎成為熱點之一。

    IL-8自發(fā)現(xiàn)以來,成為在趨化性細胞因子中是一個比較活躍的研究領域,各種非特異性炎癥的病理發(fā)生過程中頻繁地有IL-8的參與,以及IL8基因易于受到外界的刺激而被激活,因此IL-8可能在炎癥、免疫反應和機體防御反應中具有廣泛的作用。對于IL-8在人類上研究較多[1-3],而與奶牛疾病方面的研究最近幾年越來越受關注。IL-8易于受到外界的刺激而被激活,已研究證明IL-8蛋白和mRNA的表達與奶牛乳房炎有密切的聯(lián)系[4]。當牛乳房受感染后,IL-8能誘導宿主防御系統(tǒng)抵抗病菌的侵入,同時IL-8會大量聚集。IL8基因的表達量也顯著增加[5-7]。研究發(fā)現(xiàn)IL8基因-233(G>A)和2789(A>G)&2862(T>C)位點對SCS顯著相關;了探索該位點不同基因型個體在血液中的表達差異,對該位點形成的不同基因型個體熒光定量PCR分析。對IL8基因的抗病機理進行初步探索,為奶??谷榉垦仔誀詈蜻x基因的研究積累基礎分子數(shù)據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 實驗動物

    選取揚大牧場健康的中國荷斯坦牛30頭。胎次在2~3胎,處于泌乳中期。保證IL8基因各個基因型10頭。尾靜脈采血,ACD抗凝劑,新鮮血樣提取RNA,提取的RNA-70℃保存。

    1.2 引物設計

    根據(jù)用于熒光定量的目的基因IL8基因的mRNA序列(GenBank:NM_173925)設計引物,內參基因β-actin引物根據(jù) mRNA序列(GenBank:AY141970)設計。引物由上海生工生物工程有限公司合成。引物見表1。

    表1 熒光定量PCR引物

    1.3 RT-PCR

    反應過程參照TaKaRa RNA AL PCRTMKit(AMV)反轉錄試劑盒使用說明,按步驟進行。將血液中總RNA作為模板在滅菌的0.2mL PCR離心管中依次加入以下組分的樣品。反轉錄體系為20 μL(反應液在冰上配制):在0.2mL的PCR管中加入1μg的總RNA,Oligo dT Primer 1μL,5×PrimeScriptTMBuffer 4μL,Random primers 1μL,PrimeScriptTMRT Enzyme Mix I 1μL,加 RNase Free dH2O至總體積為20μL。將加好試劑的PCR管瞬時離心后放在PCR儀上進行反應。反轉錄條件如下:37℃15min(反轉錄反應)85℃5sec(反轉錄酶的失活反應)所得產(chǎn)物即為cDNA,-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.4 實時熒光定量PCR

    采用SYBR GreenⅠ染料法進行熒光定量,熒光定量PCR體系為20μL:

    以上步驟均為冰上操作,每個樣本設三個重復。

    熒光定量PCR擴增程序:95℃預變性1min;95℃變性30s,60℃退火15s,72℃延伸34s(data collection),40個循環(huán);為分析擴增產(chǎn)物的特異性,PCR擴增結束后采集多個信息點進行溶解曲線分析,程序為:95℃ 15s,60 ℃ 1min;95 ℃ 15s,60℃15s。

    1.5 統(tǒng)計軟件與方法

    Primer Premier 5.0,SPSS11.0統(tǒng)計分析軟件熒光定量計算采用2-△△CT方法[8]。

    2 結果與分析

    2.1 RNA的提取

    RNA提取結果見圖1總RNA經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢出3條亮帶,從上到下分別為28s,18s和5s,說明提取的RNA完整性良好,無明顯降解,其OD260/OD280在1.8左右,純度較高,可用于后續(xù)的實驗。

    2 結果與分析

    2.2 IL8基因突變位點3種基因的相對定量表達分析

    IL8基因-233(G>A)位點的突變產(chǎn)生3種基因型。AA、AG和GG 3種基因型在血液中的熒光定量的△CT見表2,GG基因型的△CT極顯著低于AA和AG基因型(P<0.01)。GG基因型的相對表達量極顯著高于AA和AG基因型(P<0.05)(圖2)。

    圖2 IL8基因-233(G>A)位點不同基因型的表達量

    表2 IL8基因-233(G>A)位點不同基因型個體的△CT和RQ值

    3 討論

    IL8是一種重要的趨化因子,具有刺激中性粒細胞、淋巴細胞發(fā)生趨化游走,介導細胞在炎癥部位聚集、活化以及修復損傷的組織等功能[9]。然而,這些作用必須通過其與相應受體(interleukin-8receptor,IL8R,即CXCR)結合并借助信號轉導來實現(xiàn)[10]。在大腸桿菌感染引起的乳房炎的奶中,IL-8含量顯著增加[11,12]。在金黃色葡萄球菌感染的奶牛乳房炎泌乳物中,能檢測到IL-8趨化活性,但在非乳房炎泌乳物中沒有此活性[13]。所以在乳房炎發(fā)生時,IL-8誘導激發(fā)中性粒細胞時起著重要的作用。

    對于IL8基因的-233(G>A)位點,GG基因型的表達量顯著高于其它兩種基因型(P<0.05),所以GG基因型有較強的乳房炎抗性。233(G>A)位點位于IL8基因的5′側翼區(qū),該突變可能影響該基因表達調控,結果顯示,突變使該基因的表達量下降。對于其機理,需要進一步進行分析研究。

    [1] Pourfarzam S,Ghazanfari T,Yaraee R,et al.Serum levels of IL-8and IL-6in the long term pulmonary complications induced by sulfur mustard:Sardasht-Iran Cohort Study[J].Int Immunopharmacol,2009,9:1482-1488.

    [2] Liyan Wang,Gencheng Han,Renxi Wang,et al.Regulation of IL-8production by complement-activated product,C5a,in vitro and in vivo during sepsis[J].Clin Immunol,2010,137:157-165.

    [3] Weiss N,Deboux C,Chaverot N,et al.IL8and CXCL13are potent chemokines for the recruitment of human neural precursor cells across brain endothelial cells[J].J Neuroimmunol,2010,223:131-134.

    [4] Lee J W,Bannerman D D,Paape M J,et al.Characterization of cytokine expression in milk somatic cells during intramammary infections with Escherichia coli or Staphylococcus aureus by real-time PCR[J].Vet Res,2006,37(2):219-229.

    [5] Watanabe A,Yagi Y,Shiono H,et al.Effects of intramammary infusions of interleukin-8on milk protein composition and induction of acute-phase protein in cows during mammary involution[J].Can J Vet Res,2008,72(3):291-296.

    [6] Bannerman D D,Kauf A C W,Paape M J,et al.Comparison of Holstein and Jersey Innate Immune Responses to Escherichia coli Intramammary Infection[J].J.Dairy Sci,2008,91(6):2225-2235.

    [7] Günther J,Liu S,Esch K,et al.Stimulated expression of TNF-a and IL-8,but not of lingual antimicrobial peptide reflects the concentration of pathogens contacting bovine mammary epithelial cells[J].Vet Immunol Immunopathol,2010,135(1~2):152-157.

    [8] Livak K J,Schmittgen T D.Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T))Method[J].Methods,2001,25(4):402-408.

    [9] Laudanna C,Campbell J J,Butcher E C.Role of Rho in chemoattractant-activated leukocyte adhesion through integrins[J].Science,1996,271:981.

    [10] Taub D D,Oppenheim J J.Review of the chemokine meeting the third international symposium of chemotactic cytokines[J].Cytokine,1993,5(3):175-179.

    [11] Bannerman D D,Paape M J,Lee J-W,et al.Escherichia coli and StapH ylococcus aureus elicit differential innate immune responses following intramammary infection[J].Clin Diagn Lab Immunol,2004,11(3):463-472.

    [12] Riollet C,Rainard P,Poutrel B.Differential induction of complement fragment C5aand inflammatory cytokines during intramammary infections with Escherichia coli and Staphylococcus aureus[J].Clin Diagn Lab Immunol,2000,7(2):161-167.

    [13] Barber M R,Yang T J.Chemotactic activities in nonmastitic and mastitic mammary secretions:Presence of interleukin-8in mastitic but not nonmastitic secretions[J].Clin Diagn Lab Immunol,1998,5(1):82-86.

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