鬼針草提取物對(duì)去勢所致的干眼癥雄兔淚液分泌影響的實(shí)驗(yàn)研究

施煒 張傳偉 王育良

干眼癥為任何原因所致淚液質(zhì)或量或動(dòng)力學(xué)的異常，從而導(dǎo)致淚膜不穩(wěn)定和(或)眼表面的異常，并伴有眼部不適癥狀的一類疾病。引起干眼癥的病因很多，近年來國內(nèi)外研究表明，性激素，尤其是雄激素水平下降后，對(duì)淚腺調(diào)節(jié)作用異常，導(dǎo)致淚膜不穩(wěn)定、局部炎癥反應(yīng)加重，最終導(dǎo)致干眼癥。鬼針草為菊科植物鬼針草的全草。全草含生物堿、鞣質(zhì)、皂甙、黃酮甙。黃酮類化合物化學(xué)結(jié)構(gòu)與雄激素類似，可能起到擬雄激素活性作用，同時(shí)鬼針草中含大量膽堿，非消炎成分，卻可引起不良反應(yīng)如唾液分泌、流淚等。我們制作去勢兔干眼模型，旨在探討鬼針草提取物對(duì)抗雄激素水平下降導(dǎo)致干眼的作用機(jī)制以及治療效果。

1 材料和方法

1.1 主要材料及試劑 0.125%熒光素溶液，Schirmer試紙(天津晶明新技術(shù)開發(fā)有限公司)，鬼針草顆粒劑(江蘇省中醫(yī)院)。

1.2 動(dòng)物選擇與分組 將2 月齡13 只新西蘭雄性大白兔，隨機(jī)分為3 組，空白組(A 組)3 只、模型組(B 組)5 只、鬼針草提取物治療組(C 組)5 只，將B、C 組實(shí)驗(yàn)雄兔行雙側(cè)睪丸切除術(shù)制作雄激素水平下降所導(dǎo)致的干眼模型，對(duì)C 組以鬼針草提取物連續(xù)灌胃6 周。

對(duì)全部實(shí)驗(yàn)兔造模前后行角膜熒光染色(FI)，淚膜破膜時(shí)間(BUT)測定、基礎(chǔ)淚液分泌量SchirmerⅠ試驗(yàn)。

1.3 用藥方法 鬼針草提取物稀釋液根據(jù)兔體質(zhì)量配比率0.1g/(ml·kg)予治療組每天上午10 點(diǎn)灌胃1次。每組分別于造模前及造模后第7、14、21、28、35、42 天行表面麻醉后Fl、BUT、基礎(chǔ)淚液分泌量檢測，檢測由同一人在同一環(huán)境中進(jìn)行。

1.4 檢查方法 檢查前結(jié)膜囊先滴倍諾喜眼液表面麻醉，10 min 后，將Schirmer 試紙圓頭端沿折線處折疊插入兔下方結(jié)膜囊后半部5 min 后，取出試紙測量其濕長。FI 及BUT 實(shí)驗(yàn)按常規(guī)進(jìn)行。

1.5 FI 評(píng)分標(biāo)準(zhǔn) 過角膜中心作水平與垂直兩條線將角膜分為四個(gè)區(qū)，每個(gè)區(qū)按0、1、2、3 評(píng)分，規(guī)定無染色為0，有染色則分輕、中、重3 級(jí)，共12 分［1］。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 18.0 軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。自身前后比較采用配對(duì)t 檢驗(yàn)，兩組間比較采用成組t 檢驗(yàn)，P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)意義。

2 結(jié)果

2.1 基礎(chǔ)淚液分泌量比較 A 組基礎(chǔ)淚液分泌量無顯著性變化。B 組造模后2 周基礎(chǔ)淚夜分泌量明顯減少(P ＜0.05)，C 組造模后1 ～3 周基礎(chǔ)淚夜分泌量明顯增加(P ＜0.05)，造模后4 ～5 周與造模前相比無顯著性差異，C 組各時(shí)段基礎(chǔ)淚液分泌量較B 組明顯增加(P ＜0.05)。見表1。

表1 3 組基礎(chǔ)淚液分泌量造模前后比較(±s，分)

表1 3 組基礎(chǔ)淚液分泌量造模前后比較(±s，分)

注:與造模前比較，* P ＜0.05;與模型組比較，△P ＜0.05

組別造模前第7 天第14 天第21 天第28 天第35 天第42天120.67 ±1.2121.67 ±2.4221.17 ±1.94(n=3)B 組14.75 ±1.6713.63 ±4.7210.13 ±3.34*9.50 ±3.21*8.75 ±3.33*8.63 ±3.02*7.75 ±2.49*(n=5)C 組15.00 ±1.0518.00 ±3.16＊△ 18.60 ±2.55＊△ 17.10 ±1.97＊△ 16.30 ±1.77△ 15.70 ±1.70△ 16.80 ±2.25△(n=5)A 組20.50 ±2.1720.17 ±2.3219.83 ±0.9821.33 ±1.5

2.2 角膜FI 比較 A 組角膜FI 無顯著性變化。B 組造模后3 周角膜FI 無顯著性差異，其余時(shí)段角膜FI增加(P ＜0.05)，C 組角膜FI 在各時(shí)段無顯著性差異。見表2。

表2 3 組角膜FI 造模前后比較(±s，分)

表2 3 組角膜FI 造模前后比較(±s，分)

注:與造模前比較，* P ＜0.05

組別造模前第7 天第14 天第21 天第28 天第35 天第42天0.17 ±0.410.17 ±0.410.17 ±0.410.17 ±0.4100(n=3)B 組0.1 ±0.320.1 ±0.3200.4 ±0.521.10 ±0.32*1.30 ±0.48*1.70 ±0.48*(n=5)C 組00.30 ±0.4900.1 ±0.320.2 ±0.4300(n=5)A 組0

2.3 BUT 比較 A 組BUT 無顯著性變化。B 組造模后1 ～2 周BUT 與造模前相比減少不明顯，3 ～6 周BUT與造模前相比明顯減少(P ＜0.05);C 組在造模后1 周BUT 稍延長，無顯著性差異，2 ～5 周明顯延長(P ＜0.05);B 組于2 ～6 周，BUT 明顯減少，C 組BUT 增加或維持不變，2 組相比有顯著性差異(P ＜0.05)。見表3。

表3 3 組BUT 造模前后比較(±s，分)

表3 3 組BUT 造模前后比較(±s，分)

注:與造模前比較，* P ＜0.05;與B 組比較，△P ＜0.05

組別造模前第7 天第14 天第21 天第28 天第35 天第42天.17 ±0.9820.33 ±1.2120.50 ±1.23(n=3)B 組20.10 ±0.8820.40 ±2.0719.40 ±1.7817.70 ±1.64*16.40 ±1.08*15.70 ±2.06*11.30 ±1.64*(n=5)C 組20.30 ±1.3421.70 ±2.8326.20 ±1.55＊△ 23.50 ±4.25＊△ 22.10 ±1.45＊△ 23.50 ±2.99＊△ 19.90±1.29△(n=5)A 組20.00 ±019.33 ±1.0319.83 ±0.9820.67 ±1.2120

3 討論

引起干眼的病因很多，環(huán)境因素、個(gè)人習(xí)慣等引起的輕度干眼癥患者(如長時(shí)間使用電腦、長期處于空調(diào)環(huán)境等)僅出現(xiàn)較輕的癥狀，而無明顯的眼表損害，這些影響因素的及時(shí)改善可使眼部不適感消失;但對(duì)于局部或全身有明確病因引起的干眼癥(如眼表化學(xué)及熱燒傷、Sjgren 綜合征、過敏、瞼緣炎等)，其發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜［2］。眼是性激素作用的靶器官，性激素尤其是雄激素，可調(diào)節(jié)機(jī)體及局部的免疫功能，調(diào)控淚腺和瞼板腺的形態(tài)、發(fā)育、分化及分泌功能。由絕經(jīng)、衰老、自身免疫疾病、抗雄激素藥物等引起雄激素缺乏的原因均可引起干眼癥。Sullivan 等［3］研究發(fā)現(xiàn)女性Sjgren 綜合征患者體內(nèi)雄激素水平普遍降低。單純的雄激素缺乏可能并不引起干眼癥，但加速干眼癥患者的病情惡化［4］。雄激素在干眼發(fā)病機(jī)制中具有較為肯定的作用，但是雄激素不是單獨(dú)發(fā)揮作用的，多種性激素之間通過相互作用、相互影響、相互轉(zhuǎn)化共同影響機(jī)體內(nèi)分泌環(huán)境，維持雄激素的最佳生物水平對(duì)于淚液分泌功能十分重要［5］。

關(guān)于雄性激素治療干眼的機(jī)制仍不清楚，有研究發(fā)現(xiàn)淚腺和瞼板腺都是雄激素靶器官，雄激素通過對(duì)淚腺、瞼板腺分泌功能的影響，在淚膜結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生改變的機(jī)制中起作用［6］。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，鬼針草含生物堿、鞣質(zhì)、皂甙、黃酮甙。莖葉含揮發(fā)油、鞣質(zhì)、苦味質(zhì)、膽堿等，并含多種氨基酸、胡蘿卜素和維生素等。用乙醇浸液在體外對(duì)革蘭氏陽性細(xì)菌有抑菌作用，花、莖對(duì)金黃色葡萄球菌也有抑菌作用。鬼針草提取物中含有大量黃酮類物質(zhì)，研究已證明某些黃酮類化合物具有擬雄激素作用［7］。

在本次實(shí)驗(yàn)過程中，模型組在造模后1 周基礎(chǔ)淚液分泌量無顯著性變化，其余時(shí)段淚流量明顯減少，治療組各時(shí)段淚流量明顯增加，考慮為鬼針草擬膽堿作用，促進(jìn)淚腺分泌增加所致。模型組在造模后3 周角膜FI 無顯著性變化，其余時(shí)段角膜FI 顯著增加，治療組FI 在各時(shí)段無顯著性變化。考慮為前期是第三眼瞼的保護(hù)及角膜細(xì)胞凋亡作用尚未明顯表現(xiàn)所致。模型組在造模后前2 周BUT 與造模前減少不明顯，第3周后BUT 與造模前相比明顯減少;治療組造模后2 ～6周與模型組相比，BUT 明顯延長。表明鬼針草具有擬性激素及膽堿作用，對(duì)淚腺細(xì)胞具有促進(jìn)分泌，保護(hù)淚腺細(xì)胞凋亡作用。

因此，鬼針草提取物可顯著抑制雄激素水平降低后兔干眼的發(fā)生。其作用機(jī)制可能與黃酮類物質(zhì)化學(xué)結(jié)構(gòu)與雄激素類似，可起到擬雄激素效應(yīng)，同時(shí)其擬膽堿作用在增加淚液流量、延長BUT、改善FI 等方面都有一定的作用。鬼針草提取物可能成為治療干眼的新途徑。

［1］ Koh S，Watanabe H，Hosohata J，et al. Diagnosing dry eye using a blue-free barrier filter［J］. Am J Ophthalmol，2003，136(3):513-519.

［2］ Stern ME，Gao J，Siemasko KF，et al.The role of the lacrimal functional unit in the pathophysiology of dry eye［J］. Exp Eye Res，2004，78(3):409-416.

［3］ Sullivan DA，Belanger A，Cermak JM，et al. Are women with Sjgrens syndrome androgen-deficient?［J］. J Rheumatol，2003，30(11):2413-2419.

［4］ Sullivan DA，Krenzer KL，Sullivan BD，et al. Does androgen insufficiency cause lacrimal gland inflammation and aqueous tear deficiency?［J］. Invest Ophthalmol Vis Sci，1999，40(6):1261-1265.

［5］ Oprea L，Tiberghien A，Creuzot-Garcher C，et al. Hormonal regulatory influence in tear film［J］. J Fr Ophtalmol，2004，27(8):933-941.

［6］ Sullivan DA，Wickham LA，Rocha EM，et al. Androgens and dry eye in Sjogrens syndrome ［J］. Ann N Y Acad Sci，1999，876:312-324.

［7］ 黃秀蘭，周亞偉，王偉.淫羊藿黃酮類化合物藥理研究進(jìn)展［J］.中成藥，2005，27(6):719-781.