Jagged1蛋白在銀屑病、基底細胞癌及皮膚鱗狀細胞癌中的表達

熊 英，白彥萍，潘 琳，楊頂權，周 偉

Jagged1 蛋白是哺乳動物細胞膜上Notch 受體的主要配體之一[1]，人類的Jagged1 蛋白基因定位于染色體20p12，全長36 kb，與大鼠Jagged1 蛋白的胞外區(qū)有98%的同源性。Jaggedl 蛋白在人類組織器官中廣泛表達[2]，其通過與鄰近細胞表面Notch 的細胞外結構域結合而觸發(fā)Notch 信號通路，通過HES-1、Deltex、Nur77 和NF-κB 等轉錄因子調節(jié)靶基因的轉錄。Jagged1 蛋白在造血、細胞增生、神經(jīng)和血管發(fā)生等過程中起重要作用[3]，與很多良惡性增生性皮膚病有著密切關系。本文選取皮膚科較為常見的進行期尋常性銀屑病、基底細胞癌和鱗狀細胞癌皮損，通過檢測Jagged1 蛋白在相應組織中的表達，比較該蛋白表達水平在3 種疾病間的差別，并初步探討其在銀屑病和兩種皮膚腫瘤中的作用。

1 材料與方法

1.1 研究對象

收集中日友好醫(yī)院皮膚科2006 ～2010 年經(jīng)臨床與組織病理學檢查確診的進行期尋常性銀屑病、皮膚鱗狀細胞癌及基底細胞癌組織病理標本各30 份。銀屑病患者年齡（38±9）歲，兩種皮膚腫瘤患者年齡（58±8）歲。對照組標本20 份，為中日友好醫(yī)院整形科門診美容手術切除的皮膚組織，均已排除皮膚病及其他系統(tǒng)性疾病。

1.2 試劑

抗Jagged1 蛋白兔多克隆抗體（SCBT 公司）。通用型二抗及抗體稀釋液（美國DAKO 公司）。

1.3 方法

采用免疫組化Envision 二步法,具體步驟：①5 μm 石蠟切片，常規(guī)二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化；②于高壓鍋中枸椽酸緩沖液（pH6.0）修復2.5 min，第一抗體Jagged1 孵育60 min 后置4 ℃溫箱過夜，PBS緩沖液沖洗；③HRP 多聚體室溫孵育30 min，PBS洗滌；④DAB 顯色，流水洗滌；⑤蘇木精復染，乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。

采用圖像分析儀對染色結果進行定量分析（由北京大學醫(yī)學部圖像分析中心協(xié)助完成）。采用德國生產(chǎn)的多功能彩色醫(yī)學圖像分析系統(tǒng)LEICAQ550CW，應用QWIN 圖像分析軟件，對免疫組化染色結果進行灰度定量分析，主要針對實驗組與對照組的光密度值進行比較。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS13.0 統(tǒng)計軟件對各組光密度值進行數(shù)據(jù)分析，組間采用t 檢驗，P ＜0.05 為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

統(tǒng)計結果顯示，Jagged1 蛋白光密度值在尋常性銀屑病患者皮損中的表達水平較正常人皮膚增強，主要在真皮乳頭區(qū)表達（表1），與銀屑病表皮相比差異有統(tǒng)計學意義（P ＜0.05)。Jagged1 蛋白光密度值在基底細胞癌及皮膚鱗狀細胞癌中表達較正常人皮膚顯著增強，兩者差異有統(tǒng)計學意義（P ＜0.01)。Jagged1 蛋白光密度值在基底細胞癌及皮膚鱗狀細胞癌中表達較銀屑病增強，兩者差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05)（表2）。免疫組化染色結果顯示，Jagged1蛋白在銀屑病表皮及真皮中呈非特異性表達，考慮為背景染色所致；在基底細胞癌及皮膚鱗狀細胞癌的癌細胞胞質中呈陽性表達，且染色較深；在正常表皮基底層中呈弱陽性表達（不排除黑素細胞）（圖1）。

表1 Jagged1蛋白在銀屑病與正常皮膚表皮、真皮光密度值比較（例）

表2 Jagged1蛋白在銀屑病、基底細胞癌、鱗狀細胞癌與正常皮膚光密度值比較（例）

圖1 Jagged1 蛋白在正常皮膚、銀屑病皮損、基底細胞癌和鱗狀細胞癌中的表達

3 討論

近年來研究發(fā)現(xiàn)，Jagged1 蛋白通過激活Notch受體傳遞信號，調控皮膚鱗狀細胞癌、基底細胞的分化增生，Notch 信號傳導通路成為近年來的腫瘤細胞信號通路的研究熱點之一[4,5]。已有研究證實，Jagged1 蛋白介導的Notch 信號傳導通路中有很多調控因子，某些分子的基因突變與多種惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展有關[6]。 本文用來檢測Jagged1 蛋白的Envision 二步染色法，是將專一的二抗和多個激活酶通過一個多聚葡聚糖骨架連接成一個多聚體，組成即用性抗體，可將信號直接放大40 ～50 倍，此法具有染色時間短、特異性強、內源性生物素干擾少等優(yōu)點，是目前國內、外廣泛采用的免疫組化技術。

本次實驗選擇銀屑病與常見的皮膚腫瘤（基底細胞癌、皮膚鱗狀細胞癌）進行比較，顯示在進行期尋常性銀屑病患者皮損中，雖然Jagged1 蛋白光密度值較正常人皮膚組織中的表達水平升高，差異有統(tǒng)計學意義（P ＜0.05)，但由于其非特異的表達在真皮乳頭的炎性細胞、成纖維細胞、血管內皮細胞及間質內，銀屑病皮損組織免疫組化染色屬背景染色，結果應判為陰性，所以在銀屑病的表達可能無意義。正常組織的切片上陽性不能除外為黑素細胞。銀屑病是一種慢性炎癥性血管新生性疾病，近年來炎癥及細胞增生性疾病的相關信號通路研究越來越受到關注。Jagged1 蛋白可能通過Notch 通路影響血管形成，促進真皮乳頭血管增生，亦可能通過活化樹突狀細胞及T 淋巴細胞引起表皮過度增生[7,8]。但本實驗染色為陰性，提示Jagged1 蛋白與銀屑病無關，銀屑病的發(fā)病可能與Notch 通路的其他配體有關。

本研究還發(fā)現(xiàn)，Jagged1 蛋白在皮膚鱗狀細胞癌及基底細胞癌表達明顯增強，主要表達在腫瘤細胞胞質及腫瘤間質淋巴血運豐富的部位。Jagged1 蛋白介導的Notch1 信號激活可能參與了這兩種腫瘤的發(fā)生。有文獻顯示Jagged1 蛋白激活的Notch 信號對皮膚鱗狀細胞癌及基底細胞癌起到了分化、增生及調控作用[9]，此信號可抑制細胞分化，誘導細胞異常增生，起到促癌基因的作用[10]。皮膚鱗狀細胞癌及基底細胞癌是惡性增生性疾病，腫瘤細胞浸潤表皮及真皮，甚至更深的部位，破壞正常皮膚結構，在腫瘤細胞胞質的表達增強，提示此蛋白與惡性增生性疾病關系密切。研究結果可為進一步探索此蛋白在細胞分化、增生調控中的作用提供重要參考，是否可以通過干預Jagged1 蛋白及其上下游信號分子來預防和治療惡性腫瘤值得進一步研究。

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