Sysmex XE－2100全自動血液分析儀復(fù)檢規(guī)則的建立及評價

馬興璇 龍 康

廣西壯族自治區(qū)柳州市中醫(yī)院檢驗科，廣西 柳州 545001

Sysmex XE－2100全自動血液分析儀是一款檢測準(zhǔn)確性、精密度和檢測效率很高的儀器。它能對分析樣本中的原始細(xì)胞、幼稚細(xì)胞、核左移、異型淋巴細(xì)胞及紅細(xì)胞、血小板形態(tài)異常進(jìn)行報警，提示檢驗人員對標(biāo)本進(jìn)行手工鏡檢，大大提高了工作效率，使檢驗工作人員從繁重的工作中解放出來，然而，它只能作為血細(xì)胞分析的一種過篩手段，當(dāng)遇到可疑情況，特別是病理條件下，必須通過手工鏡檢進(jìn)行復(fù)查，僅在儀器報警時進(jìn)行手工鏡檢將會導(dǎo)致一些病理標(biāo)本的漏檢及錯誤檢驗報告的發(fā)放。因此，如何制定血細(xì)胞分析復(fù)檢規(guī)則，避免病理標(biāo)本的漏檢，一直是世界各國血液學(xué)專家共同關(guān)注的問題。2005年國際血液學(xué)復(fù)檢專家組通過對13298份血液標(biāo)本進(jìn)行詳細(xì)分析后，制定了41條自動血液分析和分類復(fù)檢規(guī)則［1］。本研究以“國際41條規(guī)則”為基礎(chǔ)，結(jié)合本實驗室制定了適合本實驗室的Sysmex XE－2100全自動血液分析儀復(fù)檢規(guī)則，并對其臨床應(yīng)用進(jìn)行了評價。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 標(biāo)本來源 柳州市中醫(yī)院連續(xù)兩周住院患者EDTA－K2抗凝血標(biāo)本1841例，其中初診標(biāo)本1600例，復(fù)診標(biāo)本241例。

1.1.2 儀器與試劑 日本Sysmex公司生產(chǎn)的Sysmex XE－2100全自動血液分析儀及原裝配套試劑、校準(zhǔn)物及質(zhì)控物。Olympus顯微鏡購自日本奧林巴斯光學(xué)工業(yè)株式會社。

1.2 方法

1.2.1 儀器的校準(zhǔn) Sysmex公司工程師利用SCS－1000全血校準(zhǔn)物對Sysmex XE－2100全自動血液分析儀進(jìn)行校準(zhǔn)。采用配套的兩個水平e－check全血質(zhì)控物進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)量控制，保證檢測結(jié)果的精密度和準(zhǔn)確性。

1.2.2 檢測方法 按照實驗室制定的血涂片復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程，制備血涂片，用瑞氏染液進(jìn)行染色，由本實驗室從事血液形態(tài)學(xué)并有中級以上職稱的檢驗人員進(jìn)行鏡檢，每例標(biāo)本油鏡計數(shù)200個細(xì)胞進(jìn)行白細(xì)胞分類，同時觀察白細(xì)胞、紅細(xì)胞及血小板形態(tài)學(xué)有無異常。

1.2.3 初步復(fù)檢規(guī)則的制定 利用Sysmex XE－2100全自動血液分析報警系統(tǒng)，同時參考“國際41條規(guī)則”及本實驗室多年來建立的一套手工復(fù)檢規(guī)則，制定了14條自動血細(xì)胞分析和分類復(fù)檢初步規(guī)則，見表1。

表1 柳州市中醫(yī)院Sysmex XE－2100血液分析儀血細(xì)胞計數(shù)與白細(xì)胞分類涂片復(fù)檢規(guī)則

序號 項目 復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)復(fù)檢要求7 DIFF 無結(jié)果或結(jié)果不全 重測標(biāo)本;涂片鏡檢和人工分類8 Mono(%) ＞15.0%涂片鏡檢9 嗜酸性粒細(xì)胞 (%) ＞15.0% 涂片鏡檢10 RBC IP信息 ①首次血標(biāo)本;②雙相RBC報警 涂片鏡檢11 Lym(%) ＞60.0%(成人)或＞70.0%(兒童) 涂片鏡檢12 WBC IP信息 核左移;原始細(xì)胞;異形淋巴細(xì)胞 涂片鏡檢13 Baso(%) ＞5.0% 涂片鏡檢14 PLT IP信息 PLT 聚集報警 涂片鏡檢

1.2.4 涂片鏡檢陽性判斷標(biāo)準(zhǔn) 根據(jù)“國際41條規(guī)則”和國內(nèi)血液學(xué)復(fù)檢專家小組制定的陽性規(guī)則進(jìn)行評估［1，2］:①紅細(xì)胞明顯大小不均 (指紅細(xì)胞大小相差1倍以上);中空淡染 (指＞1/2淡染區(qū)的紅細(xì)胞多于30%)，且只要發(fā)現(xiàn)瘧原蟲均認(rèn)為是陽性;②巨大血小板多于15%;③見到血小板聚集;④Dohle小體的粒細(xì)胞＞10%;⑤中毒顆粒中性粒細(xì)胞＞10%;⑥空泡變性粒細(xì)胞＞10%;⑦原始和幼稚細(xì)胞≥1%;⑧早幼粒細(xì)胞和中幼粒細(xì)胞≥1%;⑨晚幼粒細(xì)胞＞2%;⑩異形淋巴細(xì)胞＞5%;○11有核紅細(xì)胞≥1%;○12漿細(xì)胞≥1%。

1.2.5 復(fù)檢初步規(guī)則的評估 1841例標(biāo)本以涂片鏡檢為陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)，將擬定的14條初檢規(guī)則一一進(jìn)行評估，并計算出真陽性 (TP)、真陰性 (TN)、假陽性 (FP)、假陰性(FN)和血涂片復(fù)檢的比率。真陽性為至少觸發(fā)1條血細(xì)胞復(fù)檢規(guī)則且鏡檢符合涂片鏡檢陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)，鏡檢形態(tài)學(xué)異常與所觸發(fā)的規(guī)則不需要一一對應(yīng);真陰性為未觸發(fā)復(fù)檢規(guī)則且鏡檢陰性;假陽性為觸發(fā)復(fù)檢規(guī)則而鏡檢無形態(tài)學(xué)異常發(fā)現(xiàn);假陰性為未觸發(fā)復(fù)檢規(guī)則而鏡檢符合涂片鏡檢陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)，涂片復(fù)檢率=真陽性+假陽性/樣本數(shù)。

1.2.6 復(fù)檢規(guī)則的建立及驗證 本次收集的標(biāo)本全部來自住院患者，預(yù)期的涂片復(fù)檢率可能比本實驗室的實際復(fù)檢率稍高，而對于假陰性，國際血液學(xué)復(fù)檢協(xié)作組認(rèn)為5.0%是為保證患者檢測結(jié)果安全的最大可接受限度，因此，擬定的涂片復(fù)檢率為30%左右，假陰性率不超過5.0%，而且具有診斷意義的重要參數(shù)如各種白血病細(xì)胞不能出現(xiàn)漏檢。假陽性比率過高會大大增加檢驗工作人員的工作量，延遲檢驗報告發(fā)放的時間，因此，根據(jù)初步復(fù)檢規(guī)則的評估結(jié)果和臨床實際工作需要，對初步復(fù)檢規(guī)則的部分條款進(jìn)行修正，并按修正后的規(guī)則重新計算真陽性、真陰性、假陽性、假陰性和涂片復(fù)檢的比率，在保證較低的假陰性率的前提下盡可能降低假陽性率。新復(fù)檢規(guī)則建立后，選擇220例血標(biāo)本 (主要為血液病和腫瘤化療患者病例)進(jìn)行驗證，并計算出真陽性、真陰性、假陽性、假陰性和涂片復(fù)檢的比率。

2 結(jié)果

2.1 初步復(fù)檢規(guī)則評估結(jié)果分析 應(yīng)用涂片鏡檢陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)對1841例標(biāo)本按初步復(fù)檢規(guī)則進(jìn)行秤估，真陽性率為28.9%(533/1841)、假陽性率為11.9%(220/1841)、真陰性率為57.0%(1051/1841)、假陰性率為2.0%(37/1841);涂片復(fù)檢率為40.9%(753/1841)。由于本實驗室每天有300例左右住院患者的血常規(guī)標(biāo)本，如血涂片復(fù)檢率40.9%，將有近120例標(biāo)本需要手工顯微鏡復(fù)檢，而從事血涂片復(fù)檢工作人員較少，無法完成如此大的工作量，而且，40.9%的復(fù)檢率大大超出了本研究擬訂的復(fù)檢率，因此，對初步復(fù)檢規(guī)則進(jìn)行了一些調(diào)整:棄用規(guī)則9、規(guī)則10、規(guī)則12及規(guī)則14，調(diào)整后復(fù)檢規(guī)則見表2。

表2 柳州市中醫(yī)院Sysmex XE－2100血液分析儀血細(xì)胞計數(shù)與白細(xì)胞分類涂片復(fù)檢規(guī)則

2.2 調(diào)整后復(fù)檢規(guī)則評估結(jié)果分析 對調(diào)整后的復(fù)檢規(guī)則重新進(jìn)行評估，真陽性率為14.8%(272/1841)、假陽性率為9.4%(173/1841)、真陰性率為72.6%(1337/1841)、假陰性率為3.2% (59/1841);涂片復(fù)檢率為24.1%(445/1841)。

2.3 復(fù)檢規(guī)則的驗證 選擇220例標(biāo)本進(jìn)行復(fù)檢規(guī)則驗證，結(jié)果:真陽性36例，占16.3%;假陽性24例，占10.7%;真陰性 152例，占 69.0%;假陰性 8例，占3.3%，主要為出現(xiàn)巨大血小板、變異淋巴和晚幼粒細(xì)胞漏檢;白血病細(xì)胞無漏檢。

3 討論

國際血液學(xué)復(fù)檢專家組推薦的白細(xì)胞分類復(fù)檢規(guī)則是以絕對值計算，且下限很高，鏡檢陽性規(guī)則中也沒有白細(xì)胞分類計數(shù)陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)，其主要原則是不漏檢白血病細(xì)胞，而包括本實驗室在內(nèi)的國內(nèi)絕大多數(shù)實驗室對白細(xì)胞分類復(fù)檢都是以分類比率計算，如以國際41條白細(xì)胞分類復(fù)檢規(guī)則評估，1841例標(biāo)本均未觸發(fā)單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞復(fù)檢規(guī)則。因此，本實驗室對白細(xì)胞分類復(fù)檢規(guī)則是選擇部分分類比率計算，即嗜堿性粒細(xì)胞＞5.0%，淋巴細(xì)胞＞60.0%(成人)或＞70.0%(兒童)，單核細(xì)胞比率＞15.0%。對于是否把桿狀核粒細(xì)胞比率＞5.0%，單核細(xì)胞比率 ＞12.0%，嗜酸性粒細(xì)胞比率 ＞10.0%和嗜堿性粒細(xì)胞比率＞2.0%納入鏡檢陽性判斷規(guī)則，國內(nèi)血液學(xué)復(fù)檢專家組也有不同意見，王厚芳等［3］在鏡檢陽性判斷規(guī)則中納入上述4條規(guī)則，認(rèn)為假陰性率僅略微增加，仍在國際血液學(xué)專家組確定的5.0%的可接受范圍內(nèi);而叢玉隆等［4］認(rèn)為納入上述4條規(guī)則將使假陰性率明顯升高，高達(dá)20.0%(其中桿狀核粒細(xì)胞和單核細(xì)胞所致的假陰性占90.0%)，大大超出國際血液學(xué)專家組確定的5.0%的可接受范圍，因此，認(rèn)為應(yīng)棄用這4條鏡檢陽性判斷規(guī)則，統(tǒng)計結(jié)果顯示，假陰性率降為4.0%以下，假陽性率增加不到3.0%，且無白血病細(xì)胞漏檢。上述兩個協(xié)作組在納入這4條判斷規(guī)則后在假陰性的統(tǒng)計方面差異明顯，究其原因我們認(rèn)為是對白細(xì)胞分類復(fù)檢陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)未形成一個共性的認(rèn)識，而國際41條沒有白細(xì)胞分類計數(shù)陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)，其主要原則是不漏檢白血病細(xì)胞，嚴(yán)格按照41條的陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)評估，如果增加上述4條陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)將使假陰性率大大增加。本實驗室規(guī)則的評估中納入了上述4條陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)中的兩條，并把兩條中的判斷標(biāo)準(zhǔn)提高，取得了很好的效果。

通過對復(fù)檢初步規(guī)則陽性標(biāo)本的分析，發(fā)現(xiàn)出現(xiàn)假陽性率較高的規(guī)則依次是:嗜酸性粒細(xì)胞百分比，WBC IP信息，RBC IP信息，PLT IP信息，初步復(fù)檢規(guī)則中僅此4項規(guī)則的假陽性比率26.3%。血小板報警主要是出現(xiàn)血小板分布異常，F(xiàn)ujimoto等［5］研究了28例可能影響血小板分布的標(biāo)本，這些影響因素包括大血小板、有核紅細(xì)胞、裂片紅細(xì)胞以及DIC患者的標(biāo)本，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Sysmex XE－2100血液分析儀阻抗法和光學(xué)法計數(shù)血小板與參考方法有很好的相關(guān)，儀器所提供的WBC IP信息，RBC IP信息，PLT IP信息，嗜酸性粒細(xì)胞百分比比較準(zhǔn)確，因此，本實驗室制定的Sysmex XE－2100全自動血液分析儀復(fù)檢規(guī)則中棄用WBC IP信息，RBC IP信息，PLT IP信息，嗜酸性粒細(xì)胞百分比這4條規(guī)則。對假陰性標(biāo)本的分析發(fā)現(xiàn)，假陰性主要由巨大血小板、血小板聚集、紅細(xì)胞形態(tài)異常、異型淋巴細(xì)胞、有核紅細(xì)胞以及少量的中晚幼粒細(xì)胞所致，有診斷意義的白血病細(xì)胞無漏檢;6例出現(xiàn)幼稚粒細(xì)胞漏檢的標(biāo)本中3例為血液病患者標(biāo)本，由于觸發(fā)了規(guī)則3和規(guī)則7而未造成漏檢，且幼稚粒的比率均處在鏡檢陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)臨界值附近;另3例標(biāo)本中2例為晚幼粒細(xì)胞2%，處于鏡檢陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)臨界值附近，1例為中毒顆粒中性粒細(xì)胞＞10%。

驗證實驗和臨床應(yīng)用評介表明，本實驗室制定的Sysmex XE－2100全自動血液分析儀復(fù)檢規(guī)則，假陰性率低于國際血液學(xué)專家組確定的5.0%的最大可接受限度，有診斷意義的血液病細(xì)胞無漏檢，復(fù)檢率為24.1%，臨床應(yīng)用幾年來未發(fā)現(xiàn)有漏檢、誤檢情況的發(fā)生，保證了血液分析的檢驗質(zhì)量，大大減少了檢驗技術(shù)人員手工鏡檢的勞動強(qiáng)度，明顯提高了工作效率，值得推廣應(yīng)用。

［1］ Barnes pw，Mcfadden SL，Machin SJ，et al．The international consensus group for hematology review:suggested criteria for action following automated CBC and WBC differential analysis［J］．Lab Hematol，2005，11(2):83－90．

［2］中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志編輯委員會．全國血液學(xué)復(fù)檢專家小組工作會議紀(jì)要暨血細(xì)胞自動計數(shù)復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)釋義［J］．中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2007，30(4):380－382．

［3］王厚芳，孫帝，于貴杰，等．國際血細(xì)胞復(fù)檢規(guī)則在貝克曼－庫爾特系列血細(xì)胞分析儀上的應(yīng)用及改進(jìn)方案［J］．中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2008，31(7):758－762．

［4］叢玉隆，樂家新．Sysmex XE－2100自動血細(xì)胞分析和白細(xì)胞分類的復(fù)檢規(guī)則探討［J］．中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2008，31(7):752－757．

［5］ Fujimoto K，Tanaka C．Reference method for platelet enumeration［J］．Sysmex J International，2001，11(1):33 －39．