HPLC法測定依托咪酯脂肪乳注射液中依托咪酯的含量

宋 妍馬愛玲

（1 河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部，河南 鄭州 450000；2 河南省人民醫(yī)院藥學(xué)部，河南 鄭州 450000）

HPLC法測定依托咪酯脂肪乳注射液中依托咪酯的含量

宋 妍1馬愛玲2

（1 河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部，河南 鄭州 450000；2 河南省人民醫(yī)院藥學(xué)部，河南 鄭州 450000）

目的建立測定依托咪酯脂肪乳注射液中依托咪酯含量的高效液相色譜法。方法色譜柱：Agilent TC-C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，流動相∶甲醇-水(80∶20)，流速1.0mL/min，檢測波長：241nm，進(jìn)樣量：20μL。結(jié)果依托咪酯的濃度在5～50μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系(r=0.9990)，高、中、低3種濃度的平均回收率(n=3)為99.3%(RSD=0.11%)、98.1%(RSD=0.08%)、100.3%(RSD=0.14%)。結(jié)論該方法操作簡便，結(jié)果可靠，適用于依托咪酯脂肪乳注射液的含量測定。

依托咪酯；含量測定；高效液相色譜法

依托咪酯是一種靜脈注射后起效迅速、作用強、誘導(dǎo)安靜平穩(wěn)、循環(huán)抑制輕、對心功能無明顯影響的靜脈麻醉藥。由于依托咪酯的諸多優(yōu)點，常被用于臨床全身麻醉[1]。中國藥典2010年版二部[2]中分別采用滴定法和紫外-可見分光光度法測定依托咪酯和依托咪酯注射液的含量，本文參考有關(guān)文獻(xiàn)[3,4]，建立了測定依托咪酯脂肪乳注射液中依托咪酯含量的HPLC法。該方法簡便準(zhǔn)確、專屬性好、靈敏度高，適用于依托咪酯脂肪乳注射液的含量測定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

戴安P680高效液相色譜儀，AUW120D電子天平(日本島津)，WH-866旋渦混合器，TGL-16A(B)高速離心機，DS3120超聲波清洗機。

1.2 試藥

依托咪酯對照品(江蘇恩華藥業(yè)股份有限公司，批號：20121001，含量：99.9%)；依托咪酯脂肪乳注射液(江蘇恩華藥業(yè)股份有限公司，批號：20120802，規(guī)格：20mg/10mL)；甲醇為色譜純；水為重蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備

精密稱取依托咪酯對照品5mg（含量99.9%)，置于100mL量瓶，用甲醇溶解并定容，制備成濃度為50μg/mL的依托咪酯對照品貯備液。

2.2 供試品溶液的制備

精密吸取0.1mL依托咪酯脂肪乳注射液，加入0.9mL甲醇溶液，渦旋混合1min，14000r/min離心10min，精密吸取上清液0.1mL，加甲醇稀釋至1 mL作為供試品溶液。

2.3 色譜條件

色譜柱：Agilent TC-C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：甲醇-水（80∶20），流速：1.0mL/min；檢測波長：241nm；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：20μL。依托咪酯保留時間約5.5min。依托咪酯對照品溶液與供試品溶液HPLC色譜圖見圖1。

圖1 依托咪酯對照品溶液與供試品溶液HPLC色譜圖（A：對照品溶液；B：供試品溶液；1：依托咪酯）

2.4 線性關(guān)系考察

依次量取50μg/mL的依托咪酯對照品貯備液適量，用甲醇稀釋成5μg/mL、10 μg/mL、20μg/mL、30μg/mL、40μg/mL、50μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，按照“2.3”項下色譜條件進(jìn)行測定，以峰面積y對濃度x作線性回歸，線性方程為y=0.6084x+0.1687，r=0.9990，線性范圍為5～50μg/mL。

2.5 精密度試驗

取濃度為20μg/mL的依托咪酯對照品溶液，照“2.3”項下色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，計算精密度，RSD%為0.81%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗

照“2.2”項下方法，制備6份供試品溶液，照“2.3”項下色譜條件進(jìn)樣測定，考察方法的重復(fù)性，依托咪酯峰面積RSD%為0.85%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性好。

2.7 加樣回收率試驗

取適量依托咪酯脂肪乳注射液，精密加入依托咪酯低、中、高3個濃度的對照品溶液，每個濃度制備3份樣品，進(jìn)樣測定，計算依托咪酯的加樣回收率，結(jié)果依托咪酯高、中、低3種濃度的平均回收率（n=3）為99.3%(RSD=0.11%)、98.1%(RSD=0.08%)、100.3%(RSD=0.14%)。

2.8 穩(wěn)定性試驗

照“2.2”項下方法，制備1份供試品溶液，室溫(25±1)℃下放置24h，分別考察0h、1h、2h、4h、6h、24h的含量變化，結(jié)果以0h藥物含量為100%計算，24h內(nèi)藥物含量變化＜2%，表明供試品溶液24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.9 樣品含量測定

取3批不同批號的依托咪酯脂肪乳注射液，照“2.2”項下方法制備供試品溶液，每個濃度制備3份，分別進(jìn)樣測定依托咪酯的含量。結(jié)果3批樣品中依托咪酯含量分別為100.4%，100.2%，99.7%。

3 討 論

本實驗在色譜條件建立時，選擇了甲醇-水(80∶20)作為流動相，依托咪酯保留時間為5.5min，色譜峰形好，并且與雜質(zhì)得到了較好的分離，該流動相的制備簡單方便，節(jié)省分析時間，適用于依托咪酯的含量測定。

依托咪酯脂肪乳注射液為均一的白色乳劑，不適合直接進(jìn)樣，在樣品前處理時，加入甲醇可達(dá)到破乳的效果，渦旋、離心后取上清液用甲醇稀釋后可進(jìn)樣分析。樣品前處理簡單方便，樣品回收率高，適用于依托咪酯脂肪乳注射液的含量測定。

[1] 廖淳杰,唐小曼,覃怡,等.異丙酚或依托咪酯對幼齡大鼠海馬神經(jīng)元凋亡的影響[J].中華麻醉學(xué)雜志,2012,32(2):170-172.

[2] 國家藥典委員會.中國藥典(二部)[M].2010年版.北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:474-475.

[3] 胡德福,王榮梅.HPLC測定依托咪酯注射液的含量[J].山東醫(yī)藥工業(yè),2001,20(1):15-16.

[4] 王發(fā),張秉華,郭歡迎,等.HPLC法測定依托咪酯注射液的含量及有關(guān)物質(zhì)[J].西北藥學(xué)雜志,2010,25(4):253-255.

R927.2

B

1671-8194（2013）17-0084-02