正交試驗優(yōu)選酒炙丹參炮制工藝

張 穎 周 宙 劉 宏 姚有道 趙寶林

（安徽中醫(yī)藥高等?？茖W校，安徽 蕪湖 241000）

正交試驗優(yōu)選酒炙丹參炮制工藝

張 穎 周 宙 劉 宏 姚有道 趙寶林

（安徽中醫(yī)藥高等?？茖W校，安徽 蕪湖 241000）

目的以丹參中丹酚酸B含量為指標，通過正交試驗探討酒制安徽丹參的炮制工藝。方法采用高效液相色譜法，以丹酚酸B含量為指標，通過正交設計篩選炮制工藝。結(jié)果對水溶性成分丹酚酸B含量有顯著影響，最佳工藝條件即10%的黃酒，加10%的酒量，在150℃炒炙6min。結(jié)論優(yōu)選得到的提取工藝方法簡單，藥效成分提取率高。

丹參；酒制；正交試驗；丹酚酸B；高效液相色譜法

丹參為唇形科鼠尾草屬植物丹參Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根莖，《中國藥典》2010年版收載的丹參飲片炮制規(guī)格有生丹參片和酒丹參，丹參的炮制工藝具體參數(shù)沒有明確的描述，故而炮制時操作者仍憑工作經(jīng)驗或習慣來指導炮制工作，造成各地炮制品質(zhì)量有一定差異，對于丹參炮制品的質(zhì)量控制造成困難，本試驗對各種因素加以控制研究，優(yōu)選出酒制丹參的炮制工藝，并對其炮制方法和含量變化的原因進行探討，為酒制丹參生產(chǎn)工藝和質(zhì)量控制提供一定的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器和材料

美國waters E600高效液相色譜儀；waters 2489 UV/Visble Detector；浙江大學N2000色譜工作站。上海上平儀器公司分析天平。甲醇、冰乙酸為色譜純，南京化學試劑廠生產(chǎn)，水為娃哈哈純凈水。對照品丹酚酸B （111562—200807）由中國藥品生物制品檢定所提供，供含量測定用。

輔料黃酒（酒精度分別≥5%、≥10%、產(chǎn)地浙江紹興黃酒集團）、白酒（酒精度＞46%、產(chǎn)地安徽口子酒業(yè)股份有限公司）。供試品丹參Salvia miltiorrhiza Bge.采自安徽全椒縣，經(jīng)過筆者鑒定。

1.2 方法

1.2.1 HPLC色譜條件 waters symmetry C185μm 4.6×150mm。檢測波長為281nm，柱溫25℃，流速0.8mL/min。流動相為甲醇和5%冰乙酸水溶液混合梯度洗脫，梯度洗脫條件如表1所示。

1.2.2 對照品溶液制備

精密稱取對照品，配制成丹酚酸B溶液97μg/mL待用。

1.2.3 樣品溶液制備

取丹參干燥樣品0.5g置于圓底燒瓶中，加入50mL甲醇，精密稱取質(zhì)量后于沸水浴上加熱回流1h，冷卻放至室溫，補足所失甲醇，用0.45μm微孔濾膜過濾即得。

表1 HPLC梯度洗脫條件

1.2.4 單因素試驗考察

對丹參飲片進行加酒量、悶潤時間、炒制溫度、炒制時間單因素的影響程度考察，通過測量其中丹酚酸B成分含量變化的情況表明，悶潤時間對其含量影響不大，而加酒量、炒制溫度和時間，都是影響丹酚酸B成分含量重要因素，應該作為正交試驗設計的考察因素。

1.2.5 酒制丹參飲片的制備

取丹參藥材飲片9份，每份30g，按L9（34）正交表安排的9種工藝，加入輔料，拌勻后悶潤2h，用相應溫度炒至規(guī)定的時間，晾干，置干燥容器內(nèi)備用。

稱取酒制丹參飲片10g，置于具塞三角燒瓶中，加水20mL悶潤15min，加熱并保持沸騰10min，過濾；濾渣加水20mL，加熱并保持沸騰10min，過濾；合并兩次濾液，定容至50mL，搖勻，得酒制丹參飲片溶液待用。

1.2.6 精密度試驗

精密吸取丹參藥材供試品溶液10μL，注入液相色譜儀，測定，重復進樣6次，RSD=1.7%。結(jié)果表明儀器具有良好的精密度。

1.2.7 穩(wěn)定性試驗

精密吸取丹參藥材供試品溶液10μL，注人液相色譜儀，測定，每隔20min進樣一次，連續(xù)進樣5次，RSD=1.4%。結(jié)果表明供試品溶液穩(wěn)定性良好。

2 正交試驗與結(jié)果分析

2.1 正交試驗設計

根據(jù)1.2.4中所得結(jié)論，選取酒種類、加酒量、炒制溫度和時間為考察因素，以丹酚酸B的含量為指標，采用正交試驗法進行工藝優(yōu)選。分別設3個水平，不考慮交互作用，選用L9（34）正交表安排試驗，因素水平見表2。

表2 正交試驗因素水平表

2.2 正交試驗結(jié)果及分析

正交試驗測定數(shù)據(jù)和統(tǒng)計結(jié)果見表3。分析可知，各因素的主次順序是B＞D＞C＞A，即酒的用量（%）＞炒炙時間（min）＞炒炙溫度＞酒種類，最佳的工藝條件定為A2B1C3D2，即10%的黃酒，加10%的酒量，在150℃炒炙6min。

表3 丹酚酸B的正交試驗結(jié)果

2.3 驗證試驗

為保證結(jié)果真實可信，按上述工藝再進行2次試驗，驗證結(jié)果分別為16.91、17.23mg/g，丹酚酸B成分含量較高且穩(wěn)定，說明所選工藝條件最佳A2B1C3D2是最佳工藝。

3 討 論

3.1 指標的選擇與最佳工藝

我們采用的提取方法為傳統(tǒng)用藥方法即飲片水煎煮，脂溶性成分在水當中的煎出率非常低，不可能是用藥時起作用的主要成分，且對其含量測量也造成困難，實際意義不大，丹酚酸B是丹參水溶性成分的代表成分，故選擇丹酚酸B的含量作為指標。水溶性成分提取最佳工藝，即10%的黃酒，加10%的酒量，在150℃炒炙6min。

3.2 影響因素探討

方差分析表明，酒的用量影響最顯著，10%的黃酒確實增加了有效成分的溶解，有利于有效成分的溶出，這與大多數(shù)文獻報道相類似；其次是炒炙時間，而炒炙溫度、酒種類影響較小，悶潤時間在前期的選擇試驗中即表現(xiàn)出對有效成分的溶出不具有重要意義，通常悶潤時間只要能保證將藥材全部悶透即可，綜合文獻，一般2h以上的悶潤即可保證，特別要強調(diào)的是，室內(nèi)溫度對于悶潤時間有一定影響，當氣溫較高時，酒精揮發(fā)較快，悶潤時間要適當加長，以保證悶透藥材的需要。本研究采用80、110、150℃進行炒炙，最佳工藝的炒炙溫度為150℃，與文獻報道文火的溫度掌握在120～130℃略高，并且150℃酒炙品焦斑明顯，甚至呈焦褐色，成品外觀較差。

3.3 炮制對化學成分的影響

丹酚酸B的結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，光照及溫度對其都會影響其結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性，暴曬、加熱可使丹酚酸B部分損失，含量降低。丹參酒炙品水煎出物中脂溶性成分的含量非常低，在此不作特別分析，但其中的丹酚酸B的含量明顯高于生品（11.76mg/g），可能是因為酒炙過程改變了藥材細胞物理性狀，浸透了細胞壁，使有效成分易于從植物中溶出，提高了其溶出率。此外，含有酒精的介質(zhì)對成分的溶解以及傳運都較有效，有利于丹酚酸B的浸潤、溶解、擴散等，提高溶出含量。

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R282.710.2

B

1671-8194（2013）15-0095-02

安徽高校省級自然科學研究項目（編號：KJ2008B078）