試論高效液相色譜分析技術的應用

高春冬

【摘 要】HPLC在我國食品分析領域的應用始于20世紀70年代末，90年代后期國家標準中開始將HPLC法列為檢測食品中的污染物、營養(yǎng)成分、添加劑、毒素和無機成分等的國標方法。

【關鍵詞】HPLC；高效液相色譜分析；食品檢測

1.HPLC在食品添加劑領域的應用

1.1食品甜味劑的檢測

采用液相色譜—氣相色譜聯(lián)用技術， SpherigelC18色譜柱，電噴霧負離子采集模式，甲醇-甲酸-三乙胺緩沖鹽梯度洗脫，定量測定果凍等食品中安賽蜜、糖精鈉和甜蜜素含量，結果加樣回收率為93.19%～100.90%，相關標準偏差（RSD）為1.05%～2.04%。該方法選擇性好，定性定量準確，分析時間短，同時也適用于飲料等其他食品的定性定量檢測。

用高效液相色譜—熒光法（HPLC-FLD）測定食品中的糖精鈉，最低檢出限在0.005～0.200mg/ml，與高效液相色譜—紫外檢測法（HPLC-UV）相比較，HPLC-FLD法重現(xiàn)性好，準確度更高，由于FLD的選擇性響應，降低了對色譜柱的性能要求，更適合復雜樣品的快速分析，使其具有比UV法更高的可靠性，是一種較為理想的糖精鈉檢測方法。

1.2食品防腐劑的檢測

利用HPLC測定含乳飲料中苯甲酸的含量。用Zn（Ac）2和KFe（CN）3溶液作為沉淀劑進行樣品的預處理，磷酸鹽緩沖液和甲醇混合溶液為流動相，C18色譜柱，于波長225nm處紫外檢測，方法簡單快速、靈敏度高，既適用于大部分含乳飲料，也適用于純牛奶的測定。蘇愛梅采用加沉淀劑沉淀法對火腿腸樣品進行預處理，過濾后用RP-HPLC法測定火腿腸中防腐劑苯甲酸和山梨酸的含量。色譜柱為Symetry-C18，以0.02mol/L乙酸銨-甲醇（97∶3）為流動相，檢測波長為230nm。苯甲酸和山梨酸濃度在0～0.05g/L范圍內(nèi)線性很好（r=0.9996）；山梨酸最低檢出限為0.024g/L，平均回收率為100.4%，RSD為0.68%。

1.3食品色素的檢測

采用HPLC法測定保健食品黃金搭檔包衣片中食用合成色素，樣品前處理用粉碎提取法和漂洗法，聚酰胺吸附純化LichrospherC18柱，甲醇-乙酸銨流動相梯度洗脫，單波長或多波長測定檸檬黃、靛藍和誘惑紅3種色素。其線性范圍寬（0～100g/ml），回收率高（91.3%～103.1%），重現(xiàn)性好（RSD=2.11%～5.63%），最低檢出限為2～11ng。其中，尤以粉碎提取法，梯度洗脫，多波長檢測效果更佳。

1.4食品抗氧化劑的檢測

采用RP-HPLC法測定油炸薯條沒食子酸內(nèi)酯（PG）、叔丁基對苯二酚（TBHQ）、羥基茴香醚（BHA）、4-已基間苯二酚（4HR）、二丁基羥基甲苯和2246含量。其中，PG、TBHQ用50%甲醇（RP-HPLC體積分數(shù)1%的冰醋酸）作流動相，BHA、4HR、BHT和2246用80%甲醇作流動相，檢測波長為280nm，相關系數(shù)在0.9983～0.9996，最低檢出限為1.0～2.0μg/g，平均回收率均在85%以上。

采用基質(zhì)固相分散萃取植物油中抗氧化劑BHA、BHT、TBHQ和PG，經(jīng)HPLC法進行分離。結果通過基質(zhì)固相分散技術，可減少有機溶劑的用量，縮短分析時間，提高分析效率，回收率為85.8%～94.3%，最低檢出限為2ng。

2.HPLC在食品營養(yǎng)成分領域的應用

2.1碳水化合物的檢測

對于碳水化合物的測定，HPLC法操作簡便，靈敏度高，可同時測定各種糖，國際上已將HPLC法作為酒類糖分含量測定的仲裁法。

2.2氨基酸的檢測

氨基酸是生物體中重要的生命物質(zhì)，是組成酶和蛋白質(zhì)的基本單元，準確靈敏地測定食物中氨基酸的含量具有十分重要的意義。目前，柱前衍生化高效液相色譜法以其靈活和易于推廣的特點。

采用鄰苯二甲醛（OPA）-9-芴甲基氯甲酸酯（FMOC）進行氨基酸柱前衍生，RP-HPLC法測定氨基酸含量。3個不同濃度梯度的氨基酸標準溶液線性關系良好，樣品保留時間絕對誤差小于0.1min，重現(xiàn)性RSD值低于4%，加標回收率均在90%～110%。

2.3脂肪酸的檢測

脂肪酸是指一端含有一個羧基的長的脂肪族碳氫鏈，是有機物。飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸和三脂酰苷油磷脂卵磷脂等，對人體的健康起到了重要的作用。用HPLC法與基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間技術聯(lián)用，分析蛋黃中磷脂粗提物。將從蛋黃中提取的多種磷脂通過HPLC預先分離，收集各組分后分別進行MALDI-TOF-MS分析得到比較清晰的質(zhì)譜圖。選用RP-HPLC與電容耦合非接觸電導檢測（C4D）結合的方法分離測定肉蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、油酸與亞油酸5種未衍生化長鏈脂肪酸，采用HypersilODSC18色譜柱，以甲醇-1mmol/L醋酸鈉（78∶22，V/V）為流動相，結果表明，硬脂酸在5～200μg/ml范圍內(nèi)與峰面積線性關系良好，其他4種酸線性范圍為2～200μg/ml。將此種方法用于檢測南瓜、大豆、米糠及棕櫚油中脂肪酸，與標準氣相色譜檢測方法相比，簡單、快速、靈敏度高。

3.HPLC在食品污染物領域的應用

3.1食品農(nóng)藥、獸藥殘留的檢測

農(nóng)藥殘留是由于使用農(nóng)藥而導致的在食品、農(nóng)產(chǎn)品或動物飼料中殘留的一定物質(zhì)，國家相關標準都有明確的藥物最大殘留量，超過其值有可能對人體造成危害。運用HPLC柱后衍生熒光檢測法，測定蘋果、梨、桃、葡萄、香蕉和芒果等水果樣品中涕滅威亞砜、涕滅威砜、滅多威、三羥基克百威、涕滅威、克百威和甲萘威7種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的殘留量，結果7種農(nóng)藥3種不同濃度平均添加回收率在72.5%～116.2%，最低檢出限為0.0037～0.0074mg/kg。

3.2食品中其他來源化學污染物的檢測

環(huán)境污染物以及在工業(yè)生產(chǎn)中所產(chǎn)生的有毒有害化學物，如包裝材料等均可通過植物或動物進入食物鏈，并引起人類的疾病或健康問題。

3.3食品中霉菌毒素的檢測

食品中存在多種霉菌毒素，主要的霉菌毒素有黃曲霉毒素、鐮刀菌毒素和玉米赤霉烯酮等。糧食及食品由于霉變不僅會造成經(jīng)濟損失，有些還會造成誤食人畜急性或慢性中毒，甚至導致癌癥。

4.小結

目前在食品安全檢測高標準的情況下，HPLC分析技術以其分辨率、靈敏度及定量精度高等特點，已被廣泛應用于食品檢測領域?，F(xiàn)今科學技術日益更新，高效液相色譜儀器也在不斷地更新發(fā)展，并且與各種檢測技術的聯(lián)用越來越普遍，包括液相色譜（LC）和質(zhì)譜儀（MS）及核磁共振譜儀的集成（LC-MS-NMR）、氣相色譜-液相色譜聯(lián)用（GC-HPLC）、固相微萃取-液相色譜聯(lián)用（SPME-HPLC）、聚焦微波輔助萃取-液相色譜聯(lián)用（FAME-HPLC），大大拓寬了HPLC的應用范圍，提高了檢測水平，在今后HPLC也會有更廣闊的發(fā)展空間。

【參考文獻】

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