脈絡(luò)舒通顆粒對創(chuàng)傷性下肢骨折大鼠炎性介質(zhì)的影響

呂鵬飛，劉寧青，梁玉龍，梁楓林，武治紅，姚景春

(1河北醫(yī)科大學第三醫(yī)院，石家莊050051;2石家莊市井陘縣中醫(yī)院;3山東新時代藥業(yè)動物中心)

下肢深靜脈血栓形成(DVT)是創(chuàng)傷性下肢骨折患者最常見并發(fā)癥，骨折后血栓形成可延誤最佳治療時機，且一旦栓子脫落形成肺栓塞易致生命危險。研究證實，創(chuàng)傷后 DVT與炎性介質(zhì)關(guān)系密切［1］。因此，骨折后預防DVT是臨床研究的熱點。脈絡(luò)舒通顆粒為中藥制劑，藥理研究證實其有較好的抗炎、抗凝作用［2］。為探討脈絡(luò)舒通顆粒對創(chuàng)傷性下肢骨折大鼠炎性介質(zhì)的影響，2011～2012年，我們進行了相關(guān)研究。現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1．1 材料 Wistar大鼠90只，體質(zhì)量250～300 g，購自山東新時代藥業(yè)動物中心。脈絡(luò)舒通顆粒為山東新時代藥業(yè)公司產(chǎn)品，低分子肝素由天津紅日藥業(yè)公司生產(chǎn)。IL-1β、IL-6、CRP試劑盒由解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心提供，TNF-α試劑盒由湖南永和陽光科技公司提供。

1．2 方法

1．2．1 動物造模方法 90只大鼠飼養(yǎng)2周后制作動物模型。造模方法［3］:腹腔內(nèi)注射1%戊巴比妥鈉1 mL/kg，麻醉生效后，用自制打擊裝置打擊其雙側(cè)大腿近端外側(cè)，瞬間打擊能量為4．2 J，經(jīng)X線拍片證實骨折后，行髖人字石膏固定。然后將大鼠隨機分為3組，均予顆粒飼料飼養(yǎng)。實驗組30只服用脈絡(luò)舒通顆粒20 g，3次/d;對照組30只皮下注射低分子肝素200 IU/kg，1次/d;空白對照組30只給予純化水。

1．2．2 檢測方法 3組在造模與相應治療2 h及第3、7、10 天，各取10 只大鼠的眼眶血 2 mL，3 000 r/min離心后，取血清置于－80℃冰箱保存?zhèn)溆?。采?ELISA 法檢測血清 IL-1β、IL-6、CRP、TNF-α，嚴格按試劑盒說明書操作。

1．2．3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS12．0統(tǒng)計軟件，計量資料用ˉ±s表示，組間比較用t檢驗。P≤0．05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

3組各時間點各檢測指標結(jié)果見表1。表1顯示，實驗組、對照組各時間點的血清IL-1β、IL-6、CRP、TNF-α水平均低于空白對照組(P＜0．05或＜0．01)。

3 討論

創(chuàng)傷性下肢骨折常伴有軟組織損傷及骨質(zhì)結(jié)構(gòu)破壞，可引起體內(nèi)炎癥因子增高，這些炎癥介質(zhì)作用于創(chuàng)傷后的機體產(chǎn)生一系列反應，最終表現(xiàn)為肢體腫脹［4］。IL-6是炎癥反應急性期的重要介質(zhì)，又稱前炎癥因子，其能加劇創(chuàng)傷后其他炎癥介質(zhì)產(chǎn)生［5］，可能是血栓形成的啟動因子之一，其作用貫穿于血栓形成的整個過程。CRP為急性期反應蛋白，其血漿水平與炎癥發(fā)生及嚴重程度有顯著相關(guān)性［6］。TNF-α是炎癥反應的主要介質(zhì)之一，它能通過激活細胞因子網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)而誘發(fā)全身炎癥反應，導致細胞壞死、血栓形成［7］。IL-1β 能誘導與 TNF-α相似的生理和代謝變化，并與TNF-α產(chǎn)生協(xié)同作用，在全身炎癥反應中起核心作用［8］。

表1 3 組不同時間血清 IL-1β、IL-6、CRP、TNF-α水平比較(pg/mL±s)

表1 3 組不同時間血清 IL-1β、IL-6、CRP、TNF-α水平比較(pg/mL±s)

注:與空白對照組同期比較，*P ＜0．05，#P ＜0．01;與對照組同期比較，★P ＜0．05

組別 n治療后2 h 3 d 7 d 10 d實驗組30 IL-1β 64．45±15．95＊★ 22．52± 8．57＊★ 18．68± 8．49＊★ 18．14± 8．52＊★IL-6 21．23± 8．98＊★ 38．23± 6．01＊★ 30．75± 8．47＊★ 21．01± 4．01＊★CRP 0．31 ± 0．08* 0．30 ± 0．08* 0．33 ± 0．99* 0．31 ± 0．05*TNF-α 9．02 ± 2．45 9．02 ± 3．45 8．82 ± 2．52 8．45 ± 3．43對照組 30 IL-1β 26．74 ±11．65# 35．12 ±17．11# 38．78 ± 7．01# 30．71 ±10．79#IL-6 57．12 ±14．87# 141．26 ±25．51# 96．44 ±18．43# 81．51 ±15．98#CRP 0．39 ± 0．06# 1．18 ± 0．31# 0．96 ± 0．25# 0．87 ± 0．21#TNF-α 9．56 ± 3．54# 11．98 ± 4．41# 11．41 ± 3．34# 11．02 ± 4．48#空白對照組 30 IL-1β 28．14 ±12．01 49．57 ±18．51 41．23 ±20．14 35．42 ± 8．01 IL-6 65．45 ±15．95 196．45 ±30．95 157．44 ±27．71 135．56 ±28．25 CRP 0．38 ± 0．06 1．38 ± 0．37 1．42 ± 0．27 1．21 ± 0．24 TNF-α 10．52 ± 2．54 13．52 ± 5．54 12．42 ± 8．43 11．14 ± 3．41

創(chuàng)傷后骨折屬于中醫(yī)“氣虛血瘀”范疇，按照“損者益之”的原則，治以益氣活血化瘀。現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，脈絡(luò)舒通顆粒有益氣利濕、活血化瘀功效，具有很好的抗凝作用［1］。劉建龍等［9］報道，DVT多發(fā)生在下肢嚴重創(chuàng)傷后3 h～5 d、平均2．6 d。Jezovnik等［10］研究發(fā)現(xiàn)，DVT 血清CRP、IL-6 等炎性因子和血管內(nèi)皮功能標志物vwF、P-選擇素均明顯高于正常。Fox等［11］分析了下肢DVT與炎癥的關(guān)系，認為CRP可引起人體血管內(nèi)皮細胞合成炎癥介質(zhì)及凝血因子，促進血栓形成。本研究發(fā)現(xiàn)，實驗組創(chuàng)傷后2 h各炎性因子開始升高，3 d時達高峰，1周后逐漸下降。各炎性因子升高的時間與創(chuàng)傷后DVT發(fā)生時間大致一致，在一定程度上說明炎性因子水平升高是DVT的危險因素，二者關(guān)系密切。本研究還發(fā)現(xiàn)，動物造模后IL-6、CRP上升較快，3 d時為2 h的3～4倍，然后開始下降。IL-6作為肝細胞刺激因子，其水平升高能刺激肝細胞合成和分泌多種蛋白質(zhì)(包括CRP)，故創(chuàng)傷后IL-6升高常伴隨CRP升高。本研究中的IL-6、CRP水平為實驗組＜對照組＜空白對照組，表明脈絡(luò)舒通顆粒能降低創(chuàng)傷后的IL-6、CRP水平。另外，本研究顯示實驗組TNF-α、IL-1β在創(chuàng)傷3 d達到高峰后迅速下降，且下降幅度大于CRP、IL-6，說明其在體內(nèi)的半衰期較短，且TNF-α變化趨勢與IL-1β基本一致。本研究中的TNF-α、IL-1β水平為實驗組＜對照組＜空白對照組，表明脈絡(luò)舒通顆粒能明顯降低創(chuàng)傷后的TNF-α、IL-1β 水平。

綜上所述，本研究顯示大鼠創(chuàng)傷后早期應用脈絡(luò)舒通顆?？蓽p輕炎性介質(zhì)釋放，對創(chuàng)傷后DVT有積極的預防作用。

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