聚苯乙烯—二乙烯苯對肝衰竭患者血漿膽紅素及腫瘤壞死因子吸附作用的觀察

姜達琳，陸 偉

(1天津醫(yī)科大學研究生院，天津市第二人民醫(yī)院，天津300192;2天津市第二人民醫(yī)院)

人工肝支持治療是治療肝衰竭的重要手段［1］。血漿灌流是目前人工肝支持系統(tǒng)的主要治療方法。膽紅素是診斷肝衰竭和評價病情程度的重要指標，對判斷血漿灌流效果有重要意義。目前血漿灌流治療肝性高膽紅素血癥已取得一定成效［2，3］，該技術的核心是吸附樹脂，良好的吸附樹脂應具備吸附能力強、吸附范圍廣，對白蛋白(ALB)、K+、Na+、Cl-等影響小的特點。本研究選用新型樹脂聚苯乙烯—二乙烯苯(PS-DVB)進行靜態(tài)吸附試驗，并與目前臨床常用的BR350樹脂型吸附柱和HA330Ⅱ型樹脂作為對照，評價其療效與安全性。

1 材料與方法

1．1 材料

1．1．1 吸附樹脂 采用懸浮聚合法制備PS-DVB微球。稱取St、DVB、BPO，攪拌混合均勻后得到油相;在4倍油相體積的純水中溶解一定量的明膠、PVA、氯化鈉、亞甲基藍后得到水相。將二乙烯基苯(交聯(lián)劑)、1%過氧化二苯甲酰(引發(fā)劑)的苯乙烯作為油相，與含10%氯化鈉和1%明膠的水相于50℃混合分散(油相與水相的體積比為1∶4)。調(diào)節(jié)攪拌速度，待液滴大小合適、粒度均勻后，以5℃/10 min的速度升溫至75℃反應2 h，再以相同速度升溫至90℃反應2 h，升溫至95℃反應4 h，得到PS微球，經(jīng)丙酮抽提2 h后減壓干燥備用。

1．1．2 血漿 選擇2009年1～12月天津市第二人民醫(yī)院收治的12例慢性肝衰竭患者，男8例、女4例，年齡22～65(42．09 ±11．08)歲。參照 2006年制定的《肝衰竭診療指南》［4］確診。患者均為乙型肝炎病毒感染，其中合并戊型肝炎病毒感染2例，合并丙型肝炎病毒感染1例，合并酒精性肝損害2例。每例患者取血漿置換所換出的血漿400 mL，分別標記為1～12號。

1．1．3 儀器 25型擺動式振蕩水浴箱(上?？朴繉嶒瀮x器有限公司)，檢測儀(東芝 TBA-120FR型全自動生化分析儀)

1．2 吸附方法 將BR350樹脂型吸附柱(Asahi，日本)、HA330Ⅱ型樹脂(廣東珠海麗珠醫(yī)用生物材料有限公司)、PS-DVB按常規(guī)方法用稀酸處理24 h，再用稀堿處理12 h，最后用蒸餾水洗滌至中性。對1～12號血漿分別進行吸附試驗，將處理好的3種吸附劑1 mL分別置于15 mL試管中，加入采樣血漿3 mL，水浴箱37℃恒溫振蕩1、2 h，靜置2 min后提取吸附后血漿。采用東芝TBA-120FR型全自動生化分析儀檢測吸附前后血漿中總膽紅素(TBIL，釩酸氧化法)、ALB(溴甲酚綠法)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α，ELISA 法)及 K+、Na+、Cl-(干化學法)的濃度。

1．3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS13．0統(tǒng)計軟件，計量資料的比較采用方差分析。P≤0．05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2．1 三種吸附樹脂對TBIL的吸附作用 見表1。

表1 三種吸附樹脂對TBIL的吸附作用

2．2 三種吸附樹脂對TNF-α的吸附作用 見表2。

表2 三種吸附樹脂對TNF-α的吸附作用(pg/mL，ˉx±s)

表 3 三種吸附樹脂對 ALB、K+、Na+、Cl－的影響(±s)

表 3 三種吸附樹脂對 ALB、K+、Na+、Cl－的影響(±s)

注:與本組吸附前比較，*P＜0．05;

吸附樹脂 n ALB(g/L)吸附前 吸附1 h 吸附2 h K+(mmol/L)吸附前 吸附1 h 吸附2 h Na+(mmol/L)吸附前 吸附1 h 吸附2 h Cl-(mmol/L)吸附前 吸附1 h 吸附2 h PS-DVB 12 31．1±5．3 30．0±4．6 30．1±4．5 4．9 ±1．3 4．9±1．2 4．6±1．4 127．3 ±9．2 130．1± 6．5 134．5±13．2 95．9±8．6 97．9 ±7．3 97．2 ±6．1 BR350 12 33．1±5．3 29．5±5．2 27．9±4．6* 4．9 ±1．3 4．8±1．2 4．1±1．0 127．3 ±9．2 131．5±11．2 135．5± 8．7 95．9±8．6 100．1 ±6．6 96．8 ±6．3 HA330 12 33．1±5．3 30．1±2．5 27．6±1．7* 4．9 ±1．3 4．3±1．3 4．5±1．6 127．3 ±9．2 131．7±10．2 126．2 ± 6．1 95．9 ±8．6 96．5 ±10．2 97．0 ±7．1

2．3 三種吸附樹脂對ALB、K+、Na+、Cl-的影響見表3。

3 討論

肝衰竭是由多種因素引起肝細胞嚴重損害，導致其合成、解毒和生物轉(zhuǎn)化等功能發(fā)生嚴重障礙。肝衰竭導致嚴重的代謝紊亂和大量代謝毒素在體內(nèi)蓄積，引起各種嚴重并發(fā)癥。其中高濃度膽紅素可產(chǎn)生細胞毒性，導致肝功能進一步惡化，多器官功能衰竭;TNF-α作為重要的促炎因子發(fā)揮重要作用，可導致多臟器功能不全，且與病情程度相關［5］。肝衰竭采用單純內(nèi)科綜合治療難以取得滿意療效，病死率很高，文獻報道為60% ～80%［6］。人工肝支持治療是治療肝衰竭的重要手段。人工肝支持系統(tǒng)分為非生物型、生物型和混合型三種。非生物型人工肝支持治療是臨床廣泛使用并證明確實有效的方法，包括血漿置換、血漿灌流、連續(xù)性血液透析濾過等。血漿置換治療可清除致病因子，延緩病情進展，但因應用異體血漿，可造成過敏反應、輸血反應發(fā)生，且有感染各種新的病毒性疾病的可能。血漿灌流作為非生物性人工肝的重要治療方法，可部分代替血漿置換治療，克服了血漿用量限制、血漿過敏、輸血感染風險等不良反應，是目前國外治療急慢性肝衰竭的主要方式［7，8］。目前血漿灌流治療的主要問題是膽紅素的清除效果還有待提高。國外雖然有特異性吸附膽紅素的吸附劑［9，10］上市，并應用于臨床，但價格昂貴，在我國難以廣泛應用。國產(chǎn)吸附劑雖然也有相應的產(chǎn)品出現(xiàn)，但其安全性和有效性均有待進一步提高。近年來主要的樹脂吸附材料有HA系列、HB-H-6 樹脂及HB-H-7 樹脂［11］、殼聚糖系列、聚丙烯酸酯系列、B-環(huán)糊精系列、親和膜等系列，國外的吸附劑主要是日本Asahi公司生產(chǎn)的BR350樹脂型吸附柱，是目前市售同類產(chǎn)品中對血漿膽紅素具有較好的選擇吸附性能的產(chǎn)品，但成本較高［12］。

PS-DVB屬中性大孔樹脂，其吸附作用主要是通過物理作用，其特點是吸附容量大、吸附速度快、機械強度高，對肝衰竭患者血液中的細胞因子、膽紅素、芳香族氨基酸等均可有效吸附。本研究顯示，PS-DVB、BR350樹脂及HA330Ⅱ型樹脂均可有效吸附肝衰竭患者血漿中的 TBIL和TNF-α，其中 PSDVB的吸附效果最佳，隨時間延長，樹脂趨于飽和，三種樹脂的吸附能力均下降。對于TNF-α，PS-DVB的吸附能力下降較少，表明PS-DVB對TNF-α具有更大的吸附量，并且在觀察時間內(nèi)對TNF-α的吸附量隨時間增加而增加。而對TBIL，PS-DVB表現(xiàn)出吸附速度較快的特性，在臨床應用時有利于短時間內(nèi)完成對TBIL的吸附，減少治療時間，降低因長時間血漿灌流出現(xiàn)不良反應的發(fā)生率。這可能與TBIL分子量較小及其含有4個吡咯環(huán)，其分子中的2個丙酸基側(cè)基可以作為吸附樹脂上功能基作用的位點，通過相互間的氫鍵和靜電等作用達到吸附目的有關。

本研究顯示，PS-DVB、BR350樹脂和HA330Ⅱ型樹脂對ALB均有不同程度的吸附，PS-DVB對ALB影響小，隨時間延長，三種樹脂對白蛋白的吸附量均有增加，但組間比較無統(tǒng)計學差異。提示PS-DVB對患者血漿ALB影響較小，有利于臨床應用;同時其對蛋白結(jié)合的毒素還有一定的吸附作用。隨時間延長，ALB下降不明顯，但TBIL、TNF-α仍下降，一方面與吸附劑對TBIL、TNF-α吸附有關，另一方面可能存在部分TBIL、TNF-α與蛋白分離，未攜帶TBIL、TNF-α的蛋白可發(fā)揮應有的作用。

PS-DVB、BR350樹脂和HA330Ⅱ型樹脂對K+、Na+、Cl-的吸附作用均表現(xiàn)為迅速飽和狀態(tài)，組間比較無統(tǒng)計學差異。隨時間延長，三者對K+、Na+、Cl-的吸附無明顯變化，對電解質(zhì)的吸附作用與時間不呈線性關系。因此，在臨床進行血液灌流治療前，為使樹脂顆粒充分膨脹，提高治療效率，防止灌流器凝血堵塞，減少全身化肝素用量，可在使用前應用肝素生理鹽水充分浸泡樹脂進行預沖洗，從而可以減少吸附過程中對K+、Na+、Cl-的影響。

綜上所述，PS-DVB可吸附肝衰竭患者血漿中的多種物質(zhì)，其制備過程較為簡便、經(jīng)濟，通過進一步優(yōu)化和開發(fā)，有望在人工肝支持系統(tǒng)中得以應用，具有良好的應用前景。

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