依達(dá)拉奉對體外沖擊波碎石術(shù)所致兔腎損傷的保護(hù)作用

姜華茂，馮艷紅，張大田，張春陽

(遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院，遼寧錦州121001)

體外沖擊波碎石術(shù)(ESWL)治療泌尿系結(jié)石已20余年，是上尿路結(jié)石的主要治療方案之一。同時(shí)，ESWL也可引起一定程度的腎臟損傷［1］，與物理損傷、缺血再灌注損傷和氧自由基損傷等有關(guān)［2，3］。依達(dá)拉奉是一種新型的羥自由基清除劑，臨床上已廣泛應(yīng)用于腦梗死的治療。目前研究表明，依達(dá)拉奉能降低缺血再灌注腎組織中的丙二醛(MDA)，升高超氧化物歧化酶(SOD)，以及改善腎小管的超微結(jié)構(gòu)的損傷［4，5］。2011年3月 ～2013年6月，我們以依達(dá)拉奉預(yù)處理ESWL腎損傷的家兔模型，測定其血丙二醛 MDA、SOD及尿微量白蛋白/肌苷(ALB/Cr)、N-乙 酰-β-D 氨 基 葡 萄 糖 苷 酶/肌 苷(NAG/Cr)水平，以明確依達(dá)拉奉對ESWL所致腎損傷的保護(hù)作用。

1 材料與方法

1．1 材料 雄性日本大耳白家兔(遼寧醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)24只，月齡3～4個(gè)月，體質(zhì)量為(2．0±0．2)kg;依達(dá)拉奉注射液(南京先聲東元制藥有限公司)，WD-91型B超定位水囊式體外沖擊波碎石機(jī)(廣東威達(dá)公司)，MDA和SOD試劑盒(南京建成生物工程研究所)。

1．2 方法

1．2．1 分組與造模 將家兔隨機(jī)分為對照組和觀察組各12只。實(shí)驗(yàn)前1 d將家兔左側(cè)背部脫毛，3%戊巴比妥鈉1．0 mL/kg耳緣靜脈注射麻醉后，仰臥位固定于碎石機(jī)上，工作電壓12 kV，頻率70次/min，沖擊次數(shù)2 000次，B超介導(dǎo)第二焦點(diǎn)定位于左腎腎盂。觀察組于ESWL前15 min從兔耳緣靜脈緩慢推注依達(dá)拉奉注射液3 mg/kg，對照組靜推等量的生理鹽水。

1．2．2 血MDA、SOD測定 兩組家兔于ESWL前、后24 h取耳正中動(dòng)脈血4 mL，測血SOD和MDA，按試劑盒說明操作。

1．2．3 尿 ALB/Cr、NAG/Cr測定 ESWL 前、后24 h取尿液，2 000r/min離心2 min，取上清液，7170A型全自動(dòng)生化分析儀測ALB(免疫濁度法)、NAG(速率法)及 Cr(苦味酸法)值，計(jì)算尿 ALB/Cr、NAG/Cr。

1．2．4 腎組織學(xué)觀察 ESWL后24 h，將家兔麻醉后固定于手術(shù)臺(tái)上，剖腹，分離左腎動(dòng)脈，插管。開始灌注后剪開左腎靜脈，用生理鹽水20 mL沖洗，10%甲醛溶液20 mL灌流固定;然后沿腎門切斷腎蒂，將腎臟投入到10%甲醛溶液內(nèi)固定24 h。將左腎橫行切成薄片，上極向上定向石蠟包埋;連續(xù)切片，厚度7μm;HE染色后于光學(xué)顯微鏡下，進(jìn)行組織學(xué)觀察。

1．2．5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS11．5統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以ˉx±s表示，組間比較t檢驗(yàn)。P≤0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 兩組 ESWL前、后 12h血 MDA、SOD 及尿ALB/Cr、NAG/Cr比較 見表1。

表1 兩組ESWL前、后12h血MDA、SOD及尿ALB/Cr、NAG/Cr比較(ˉx±s)

2．2 兩組腎組織形態(tài)學(xué)改變 兩組腎臟可見被膜下點(diǎn)狀或片狀出血，腎橫切面上可見大小不一的出血區(qū)。光鏡下，損傷部位見大量紅細(xì)胞，并有中性粒細(xì)胞浸潤，可見不同程度損傷的近、遠(yuǎn)端小管和腎小球。觀察組病理損傷較對照組輕。

3 討論

在ESWL過程中，高能沖擊波的空化效應(yīng)在活體組織中產(chǎn)生微氣泡，進(jìn)而生成多種自由基［6］;同時(shí)，高能沖擊波可引起腎盂平滑肌收縮，使腎盂內(nèi)壓力升高，部分腎組織處于暫時(shí)缺血狀態(tài)，沖擊波停止后發(fā)生再灌注而造成損傷［1］。ESWL后氧自由基在腎缺血再灌注損傷中起了非常重要的作用。本研究中，ESWL后血MDA升高、SOD降低，表明沖擊波引起了氧自由基損傷。氧自由基與細(xì)胞膜、線粒體膜、溶酶體膜上的不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過氧化作用，產(chǎn)生的過氧化脂質(zhì)可以損傷生物膜。過氧化脂質(zhì)最終分解為 MDA，MDA具有細(xì)胞毒性作用，能使DNA、蛋白質(zhì)發(fā)生交聯(lián)，進(jìn)而引起細(xì)胞的變性和壞死。體內(nèi)產(chǎn)生的SOD、過氧化氫酶和過氧化物酶等能迅速消除氧自由基，但ESWL后多種途徑使氧自由基的生成增加，缺血使組織清除氧自由基的酶活性受到抑制，故造成氧自由基的產(chǎn)生與清除失調(diào)，氧自由基在腎組織中大量堆積而加重?fù)p傷［2，3］。ALB是通過腎小球?yàn)V過膜的最小的一種蛋白質(zhì)，在腎小管中幾乎完全被重吸收。由于腎小球?yàn)V過膜的電荷選擇屏障作用，正常情況下尿中ALB水平極微;在腎小球受損后，尿ALB水平增加。NAG是存在于溶酶體中的一種高分子質(zhì)量(140 000)酶，在腎近端小管上皮中水平最高;當(dāng)腎近曲小管破壞、細(xì)胞損傷時(shí)，NAG釋放入尿中，使尿內(nèi)NAG活性升高，使用尿肌苷的比值可消除因尿樣濃縮及稀釋產(chǎn)生的影響［7］。本研究中，兩組尿 ALB/Cr、NAG/Cr均較致傷前升高，提示腎小球和腎小管在ESWL后出現(xiàn)損傷，這與光鏡下近、遠(yuǎn)端小管和腎小球的損傷相一致。

沖擊波的空化和應(yīng)力效應(yīng)所致機(jī)械性腎損傷可以通過體外沖擊波碎石機(jī)工藝和設(shè)備的發(fā)展而逐漸解決，沖擊波引起的缺血再灌注損傷和氧自由基損傷可通過藥物干預(yù)而減輕。目前研究較多的藥物包括鈣拮抗劑、中藥及其提取物、甘露醇、別嘌呤醇、還原型維生素、SOD、輔酶Q10等，取得了一定的保護(hù)作用［8～11］。依達(dá)拉奉是一種作用機(jī)制明確的新型自由基清除劑，能夠降低缺血再灌注的腎組織MDA水平、升高SOD水平水平，改善腎小管超微結(jié)構(gòu)的損傷［4，5］。在本研究中，觀察組與對照組比較，血MDA降低、SOD升高，表明依達(dá)拉奉可以減輕腎臟的缺血再灌注損傷和氧自由基損傷。依達(dá)拉奉通過抑制黃嘌呤氧化酶和次黃嘌呤氧化酶活性，刺激前列環(huán)素生成，減少炎性介質(zhì)白三烯產(chǎn)生，降低羥自由基水平，消除自由基、抑制脂質(zhì)過氧化作用，從而抑制細(xì)胞氧化損傷的作用［12］。本研究還觀察到，觀察組尿ALB/Cr、NAG/Cr水平和血MDA水平低于對照組。因此，可以認(rèn)為依達(dá)拉奉減輕腎臟的缺血再灌注損傷和氧自由基損傷，而保護(hù)了腎小球和腎小管，但依達(dá)拉奉其具體保護(hù)機(jī)制尚有待進(jìn)一步研究。

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