尿沉渣分析儀對尿液中細(xì)菌測定性能及對尿路感染的篩查價(jià)值

王學(xué)涵，吳麗萍

（新疆醫(yī)科大學(xué)第五附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，烏魯木齊 830011）

尿路感染是指在腎、尿管、膀胱、尿道上發(fā)生的非特異性炎癥，大部分是由大腸埃希菌感染引起的［1］。大多數(shù)情況下細(xì)菌是由外尿道口入侵，由尿道上行，引起膀胱和腎發(fā)生感染。診斷尿路感染要根據(jù)患者的臨床癥狀和尿液檢查結(jié)果等綜合判斷。輔助診斷有尿液沉渣計(jì)數(shù)白細(xì)胞、細(xì)菌計(jì)數(shù)、干化學(xué)中的白細(xì)胞酯酶和亞硝酸鹽反應(yīng)以及中段尿細(xì)菌培養(yǎng)法。每種方法都各有優(yōu)缺點(diǎn)，干化學(xué)法簡便、快速但由于受人體內(nèi)物理變化或化學(xué)條件的影響，會導(dǎo)致結(jié)果的假陰性或假陽性。UF－1000i全自動尿沉渣分析儀（簡稱UF－1000i）采用紅色半導(dǎo)體激光、核酸熒光染色技術(shù)和流式細(xì)胞技術(shù)，在鞘液、稀釋液和染色液的作用下對尿液有形成分進(jìn)行多角度散射光和不同級別熒光的檢測，可以消除大部分的干擾因素［2］。本文針對尿細(xì)菌檢查UF－1000i同亞硝酸鹽檢測等其他檢測的關(guān)聯(lián)性，以及使用UF－1000i的散點(diǎn)圖模型區(qū)別桿菌和球菌進(jìn)行了研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源 采集2011年1月5日至2012年9月5日520例泌尿科疑似尿路感染住院患者，按照無菌操作的原則留取患者清潔中段尿液于無菌杯中及時(shí)送檢。漂浮于培養(yǎng)液中的純培養(yǎng)細(xì)菌檢樣用于散點(diǎn)圖模型樣例。

1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)備 UF－1000i尿沉渣分析儀（日本Sysmex公司產(chǎn)品）及配套試劑和質(zhì)控物；尤利特干化學(xué)分析儀及配套試紙條和質(zhì)控物；VTTEK2全自動微生物分析儀（法國生物梅里埃公司產(chǎn)品）。

1.3 方法

1.3.1 尿標(biāo)本定量培養(yǎng) 將尿液標(biāo)本做定量培養(yǎng)和分離培養(yǎng)，根據(jù)臨床和檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)化研究所的要求，整個(gè)過程采取無菌操作。將清潔中段尿充分混勻，用定量接種環(huán)取尿液標(biāo)本分區(qū)畫線于血瓊脂平板上，在35℃的孵育箱中培養(yǎng)24h后，計(jì)數(shù)生長菌落，乘以稀釋倍數(shù)，計(jì)算每毫升生長菌落，使用VTTEK2全自動微生物分析儀進(jìn)行細(xì)菌鑒定。無菌生長的標(biāo)本繼續(xù)培養(yǎng)24h［3－4］。

1.3.2 UF－1000i檢測尿沉渣細(xì)菌 將培養(yǎng)接種后的尿液標(biāo)本做尿沉渣細(xì)菌計(jì)數(shù)并保存。通過UF－1000i測得細(xì)菌計(jì)數(shù)和標(biāo)本散點(diǎn)圖。嚴(yán)格按照操作規(guī)程操作，從標(biāo)本留取到檢驗(yàn)全過程控制在1h之內(nèi)。

2 結(jié) 果

2.1 UF－1000i的細(xì)菌數(shù)與定量培養(yǎng)細(xì)菌數(shù)的相關(guān)性 在住院患者尿液標(biāo)本中，經(jīng)過UF－1000i測定且通過細(xì)菌培養(yǎng)檢查進(jìn)行定量培養(yǎng)的尿液標(biāo)本共有138例。對該138例尿液樣本進(jìn)行細(xì)菌數(shù)比較，達(dá)到1.0×105/mL以上視為陽性。在對UF－1000i的靈敏度和特異度進(jìn)行確認(rèn)后，其靈敏度為95.2%，特異度為70.2%（表1）。與定量培養(yǎng)法相比，UF－1000i具有在細(xì)菌數(shù)1.0×104/mL以下低值區(qū)域內(nèi)較定量培養(yǎng)法得出的數(shù)據(jù)偏高，而在1.0×106/mL以上的高值區(qū)域內(nèi)較定量培養(yǎng)法得出的數(shù)據(jù)偏低的傾向。

表1 定量培養(yǎng)和UF－1000i的細(xì)菌計(jì)數(shù)比較（n＝138）

2.2 UF－1000i細(xì)菌計(jì)數(shù)與亞硝酸鹽檢測 UF－1000i中細(xì)菌計(jì)數(shù)在1.0×105/mL以上且為了不含污染物質(zhì)，WBC數(shù)量在10個(gè)/微升以上的尿液樣本視為細(xì)菌尿。細(xì)菌尿的亞硝酸鹽陽性率15.2%，非細(xì)菌尿的陰性率100.0%，與細(xì)菌計(jì)數(shù)呈正比，細(xì)菌計(jì)數(shù)越大，陽性率越高（表2）。

表2 UF－1000i的BACT細(xì)菌數(shù)同亞硝酸鹽檢測

2.3 檢出菌種和亞硝酸鹽檢測的相關(guān)性 對表2中研究的部分標(biāo)本進(jìn)行細(xì)菌鑒定檢查并將檢查出的菌種與亞硝酸鹽檢測的陽性率進(jìn)行比較。結(jié)果證明，由桿菌引起的亞硝酸鹽陽性率較高，而其中引起亞硝酸鹽陽性率最高的菌種是大腸桿菌，陽性率約為70.0%，在球菌中只有葡萄球菌會引起亞硝酸鹽反應(yīng)陽性。

2.4 根據(jù)UF－1000i的散點(diǎn)圖模型辨別桿菌與球菌可能性的研究 細(xì)菌的散點(diǎn)圖模型是根據(jù)細(xì)菌的形狀建立，由于桿菌趨向與在X軸以上約10°～20°的小角落出現(xiàn)，而球菌則趨向于在30°～45°的大角度出現(xiàn)，所以在細(xì)菌數(shù)達(dá)到1.0×105/mL以上105例患者尿液標(biāo)本中，將30°以下的認(rèn)定為桿菌，30°以上的認(rèn)定為球菌，并將此作為與散點(diǎn)圖模型分離的桿菌和球菌的一致率。因UF－1000i細(xì)菌散點(diǎn)圖縱軸通過前向散射光強(qiáng)度來表示粒子的大小，橫軸則以周圍熒光強(qiáng)度來表示粒子的染色強(qiáng)度。散點(diǎn)圖X軸在30°以下且該散點(diǎn)圖模型已獲認(rèn)可的65例樣本中，檢測出桿菌樣本所占比例達(dá)到93.8%（61/65），檢測出球菌的樣本6.2%（4/65），見表3。其中屬于腸球菌的有2例，屬于鏈球菌的有1例。當(dāng)X軸在30°以上且散點(diǎn)圖已獲認(rèn)可的40例樣本中，檢測出球菌的樣本所占的比例為82.5%（33/40），檢測出桿菌的樣本為4例。由于細(xì)菌數(shù)在1.0×105/mL左右，細(xì)菌量太少無法進(jìn)行鑒別的樣本有3例。其中有2例是混合菌樣本，有1例是球菌樣本。因此基本能夠?qū)崿F(xiàn)桿菌和球菌的鑒別。

表3 根據(jù)散點(diǎn)圖模型進(jìn)行桿菌和球菌的鑒別［n（%）］

3 討 論

使用UF－1000i可以簡便且快速地進(jìn)行細(xì)菌計(jì)數(shù)的測定，同時(shí)可以通過細(xì)菌散點(diǎn)圖推斷所含的桿菌或球菌。就定量細(xì)菌培養(yǎng)和UF－1000i的細(xì)菌數(shù)的相關(guān)性而言，在低值范圍內(nèi)UF－1000i檢測出的樣本常含有假陽性的樣本；但這些假陽性標(biāo)本通過鏡檢就基本可以認(rèn)定［5－7］。在本次試驗(yàn)中沒有對是否使用抗生素進(jìn)行研究，因?yàn)榭紤]到在定量培養(yǎng)中由于細(xì)菌自身的特點(diǎn)，也可能細(xì)菌本身因發(fā)育不良或患者預(yù)先使用過抗生素的原因在培養(yǎng)過程中死亡。在高值范圍內(nèi)UF－1000i測定數(shù)據(jù)偏低，推測其原因可能與細(xì)菌聚集在一起同時(shí)通過計(jì)數(shù)池而造成數(shù)據(jù)偏低有關(guān)，其中球菌尤為明顯［8－10］。細(xì)菌尿亞硝酸鹽反應(yīng)中，細(xì)菌越多，反應(yīng)陽性率越高，但由于菌種的不同對亞硝酸鹽的還原能力也有所差別，且亞硝酸鹽陽性反應(yīng)必須符合的條件如尿液必須在膀胱中儲存4h以上，體內(nèi)有適量的硝酸鹽存在等因素的影響，導(dǎo)致最終陽性率只有15.2%的低值［11］。但是在UF－1000i中亞硝酸鹽呈陽性的樣本均被認(rèn)定為是細(xì)菌尿，不存在假陽性計(jì)數(shù)。在通過散點(diǎn)圖模型進(jìn)行的桿菌和球菌的鑒別中，大部分能夠進(jìn)行很好的鑒別；而只有在少量細(xì)菌的情況下鑒別較困難，這種情況可以配合尿液培養(yǎng)檢查。在散點(diǎn)圖模型中在30°左右區(qū)域內(nèi)，由于同時(shí)混雜著桿菌和球菌，所以很難進(jìn)行鑒別。根據(jù)本次對亞硝酸鹽反應(yīng)和相關(guān)菌種的研究，以及表3根據(jù)UF－1000i的散點(diǎn)圖模型辨別桿菌和球菌的研究結(jié)果顯示，亞硝酸鹽反應(yīng)呈陽性時(shí)，可推斷存在桿菌，而反應(yīng)呈陰性時(shí)則不存在桿菌。由于目前只能用目測的方式來觀察散點(diǎn)圖的分布情況用以判斷桿菌還是球菌，所以檢驗(yàn)人員期望對散點(diǎn)圖模型的認(rèn)識能直接通過儀器來進(jìn)行鑒別。

本文研究結(jié)果顯示，UF－1000i能夠?qū)?xì)菌數(shù)及桿菌和球菌進(jìn)行迅速鑒別且對尿亞硝酸鹽反應(yīng)、尿沉渣檢查、尿培養(yǎng)檢查等相關(guān)尿路感染的診斷有所幫助。

［1］ 吳新忠，龐鑫，姚妍嬌.UF－100尿液分析儀細(xì)菌計(jì)數(shù)對尿道感染的診斷性能評價(jià)［J］.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2009，25（16）：2764－2766.

［2］ 湯玲，嚴(yán)子禾，胡仁靜.UF－1000i尿沉渣分析儀在診斷尿路感染中的應(yīng)用［J］.職業(yè)與健康，2010，26（23）：2768－2769.

［3］ 劉金彪.尿亞硝酸鹽試驗(yàn)診斷尿路感染的價(jià)值分析［J］.中華醫(yī)學(xué)叢刊，2004，4（1）：44.

［4］ 葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜，等.全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程［M］.3版.南京：東南大學(xué)出版社，2006：58.

［5］ 張玉成，焦建國，王瑋.尿路感染診斷進(jìn)展概況［J］.臨床薈萃，1993，8（20）：923－925.

［6］ 賴?yán)A，鄧濟(jì)甦，彭楷，等.Sysmex UF－1000i尿液有形成分分析儀的性能評價(jià)［J］.重慶醫(yī)學(xué)，2009，38（19）：2404－2405.

［7］ 顧可梁.尿液有形成分檢查巔峰難點(diǎn)與疑點(diǎn)［J］.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2009，32（6）：605.

［8］ 馬紀(jì)志，寧永忠.UF－100全自動尿液分析儀在尿路感染診斷和治療方面的價(jià)值［J］.中國誤診學(xué)雜志，2008，8（34）：8331－8333.

［9］ 叢玉隆.血液學(xué)體液學(xué)檢驗(yàn)與臨床解釋［M］.北京：人民軍醫(yī)出版社，2004：294.

［10］ 馬文明，郭旭霞，韓素麗，等.UF－100參數(shù)在尿路感染診斷及療效監(jiān)測中的應(yīng)用研究［J/CD］.中華臨床醫(yī)師雜志：電子版，2011，5（2）：571－573.

［12］ Nanos NJ.Evaluation of sysmex UF－1000ifor use in cerebeospinal fluid analysis［J］.Clin Chim Acta，2008，392（1/2）：30－33.