氣－質(zhì)聯(lián)用分析雷公藤中萜和生物堿

郭志峰，武曉陽，張曉璇，高志力

（河北大學(xué)化學(xué)與環(huán)境科學(xué)學(xué)院藥物化學(xué)與分子診斷實(shí)驗(yàn)室，河北保定 071002）

氣－質(zhì)聯(lián)用分析雷公藤中萜和生物堿

郭志峰，武曉陽，張曉璇，高志力

（河北大學(xué)化學(xué)與環(huán)境科學(xué)學(xué)院藥物化學(xué)與分子診斷實(shí)驗(yàn)室，河北保定 071002）

采用GC－MS法對(duì)雷公藤中的帖和生物堿進(jìn)行了定性分析.雷公藤提取液先經(jīng)去脂，再萃取萜和生物堿.去除的脂類經(jīng)氣相色譜分析共分離了130個(gè)峰，由它們所對(duì)應(yīng)的質(zhì)譜，通過譜圖檢索和譜圖解析，鑒定推斷出58種化合物.這些物質(zhì)主要為醇、醛、酸、酯、醚、酮等.雷公藤生物堿提取液色譜分離出111個(gè)峰，鑒定出40種物質(zhì).其中萜類和生物堿相質(zhì)量分?jǐn)?shù)30%，其余化合物絕大多數(shù)是酸脂類化合物.

雷公藤；生物堿；乙醚；GC－MS

雷公藤（Tripterygium wilfordii）又名黃藤、菜蟲藥、斷腸草等，屬衛(wèi)矛科植物，產(chǎn)于浙江、湖南、福建等省，主要分布在長江中下游地區(qū).雷公藤屬有毒中藥［1］，藥理成分主要為萜類和生物堿［2－4］，毒性大小依次為二萜、生物堿、三萜，臨床上用來治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、腎小球炎及各種皮膚病疾患［5－6］.其總生物堿對(duì)菜青蟲、粘蟲、小菜蛾有很強(qiáng)的毒殺和生長抑制作用［7－11］.迄今，從雷公藤屬植物中分離出結(jié)構(gòu)明確的化合物約200種［3］，但仍有一些低含量化合物不清楚.目前國內(nèi)外雷公藤分析方法主要有：HPLC法、高效毛細(xì)管電泳法、離子對(duì)色譜法、2D－NMR技術(shù)、薄層掃描法、光譜解析法等.這些方法受儀器檢測限限制，有些微含量成分難以確定.氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用（GC－MS），極限檢測限可達(dá)10－15g，且同時(shí)具有分離和定性2種功能.本文采用GC－MS分析技術(shù)，對(duì)雷公藤根皮粉末的乙醇水提取液進(jìn)行了分析.由分離出的色譜峰對(duì)應(yīng)的質(zhì)譜，鑒定出雷公藤所含化合物.

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器和材料

1.1.1 儀器

7890A－5975CGC－MS（Agilent）；色譜柱：BPX－5交聯(lián)彈性石英毛細(xì)管柱（30m×0.22mm，0.25μm）；ZFQ 85A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海醫(yī)械專機(jī)廠）；超聲波清洗器，搖擺式高速中藥粉碎機(jī)，索氏提取器.

1.1.2 藥材和試劑

雷公藤塊莖（由安國藥材公司提供）；體積分?jǐn)?shù)為95% 乙醇，二氯甲烷，三氯甲烷，乙醚，濃鹽酸；氫氧化鈉，干燥的無水硫酸鈉（以上試劑均為分析純）；實(shí)驗(yàn)中所用水均為二次蒸餾水.

1.2 樣品制備

雷公藤帶皮塊莖，機(jī)械碎成小塊，經(jīng)高速粉碎機(jī)粉碎成末.稱取粉末10g，加入乙醇水溶液（V（乙醇）∶V（水）＝80∶20）60mL浸泡過夜，再經(jīng)索氏提取器，提取至無色（大約8h）.蒸去乙醇，余液加12mol／L HCl（1＋1）15mL回流酸化（pH＝1）1h，室溫過濾，濾出液用純化過的乙醚10mL萃取3次，合并3次乙醚萃取液.氮?dú)鉂饪s至1mL，－20℃低溫保存，作為樣品S1，備GC－MS分析.

乙醚萃取后剩余水相溶液，水浴（50℃）除去殘留乙醚，20mol／L NaOH溶液，調(diào)節(jié)pH到13，二氯甲烷10mL萃取3次，合并3次二氯甲烷萃取液.氮?dú)鉂饪s至1mL，－20℃低溫保存，作為樣品S2，備生物堿樣品分析.

1.3 GC－MS分析條件

色譜條件：色譜柱為DB－1交聯(lián)彈性石英毛細(xì)管柱（30m×320μm，0.25μm）.進(jìn)樣口溫度280℃，接口管道溫度220℃，柱流量1.6mL／min，柱前壓86.9kPa，分流進(jìn)樣，分流比1／10，載氣為氦氣；程序升溫：S1樣品，初始溫度40℃，停1min后以10℃／min的升溫速率升至200℃，不停留，以4℃／min的升溫速率升至280℃，保持10min.S2樣品，初始溫度40℃，停1min后以40℃／min的升溫速率升至200℃，不停留，以4℃／min的升溫速率升至280℃，保持10min.進(jìn)樣1μL.

質(zhì)譜條件：電離方式EI，電子能量70eV，源溫150℃，收集電流200μA，全程掃描m／z33～500.

2 結(jié)果與討論

2.1 雷公藤S1樣品分析結(jié)果

雷公藤索氏提取后，大部分物質(zhì)轉(zhuǎn)移到提取液中.乙醇提取液酸化，乙醚去脂，氮?dú)鉂饪s后得淡黃色S1樣品.圖1是S1樣品的GC－MS的分析圖.由圖1看出共分離出130色譜峰，其中高溫區(qū)分出幾個(gè)大峰，相對(duì)含量占到38%.根據(jù)它們的質(zhì)譜，經(jīng)圖譜檢索出58種成分，表1列出了鑒定出的化合物名稱.其中41峰為棕櫚酸，56，57峰為雷芬萜.從表中看出，它們主要為酸、醇、酮、酯、生物堿、萜類、烷烴、醚、醛等化合物.萜類化合物相對(duì)含量較高，是雷公藤中的藥用活性成分.還有些色譜峰，它們的質(zhì)譜在譜庫中檢索的匹配度不到80%，表1未列出.其中有1個(gè)較大色譜峰（圖1中a峰，保留時(shí)間為46.631min），它的相對(duì)分子質(zhì)量與山海棠素和雷芬萜分子通式一致.結(jié)合譜圖檢索和質(zhì)譜的碎片離子，推定為山海棠素類化合物.

2.2 雷公藤中生物堿的分析結(jié)果

S2樣品旨在分析雷公藤中的生物堿.圖2是它的GC－MS分析色譜圖.由圖2看出，共分離出111個(gè)色譜峰.根據(jù)它們的質(zhì)譜，經(jīng)譜圖檢索和人工解析，鑒定出40種化合物（表2）.有幾個(gè)相對(duì)較大的色譜峰（圖2中a，b，e峰），其質(zhì)譜在譜庫檢索中，沒有相應(yīng)的化合物與之匹配，未鑒定出.其余的色譜峰（圖2中d，c，f，g，h，i，j峰），它們的分子量有的與三環(huán)氧化合物分子通式一致，有的與雷芬萜分子通式一致.由碎片離子，推定其中的c，f，g色譜峰為三環(huán)氧類化合物；d，h，i，j4個(gè)峰為雷芬萜.由它們的碎片離子，定出了它們的取代基.其中d峰取代基R為2個(gè)甲基，1個(gè)乙基；i峰為2個(gè)乙基，1個(gè)H；j峰為3個(gè)甲基.由表2看出，S2樣品中檢出的生物堿不多，原因可能是雷公藤中生物堿的分子量和極性較大，用二氯甲烷不能有效萃取過來或其中有些成分揮發(fā)性差，GC－MS檢測不到.

圖2 S2樣品色譜Fig.2 Chromatogram of S2sample

表1 雷公藤乙醚萃取液GC－MS分析結(jié)果Tab.1 GC－MS analysis result of aether extract fromTripterygium wilfordii

續(xù)表1Continue tab.1

續(xù)表1Continue tab.1

表2 雷公藤二氯甲烷萃取液GC－MS分析結(jié)果Tab.2 Tripterygium wilfordii methylene chloride extract GC－MS analysis results

續(xù)表2Continue tab.2

3 結(jié)論

采用GC－MS的方法，對(duì)雷公藤粉末乙醇提取液中的去脂乙醚萃取液和二氯甲烷的生物堿提取液的化學(xué)成分進(jìn)行定性分析.乙醚提取液中色譜共分出130個(gè)峰，由質(zhì)譜鑒定出58種化合物，主要是酸，醇，酮，酯，醚，烷烴類，萜類，類芬萜.二氯甲烷生物堿提取液色譜共分出111個(gè)峰，譜圖檢索和人工質(zhì)譜解析鑒定出的40種化合物，主要為生物堿，酸，醇，酮，醚，烷烴.

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（責(zé)任編輯：梁俊紅）

Gas chromatography－mass spectrometry analysis of terpenes and alkaloids in Tripterygium wilfordii

GUO Zhifeng，WU Xiaoyang，ZHANG Xiaoxuan，GAO Zhili
（Key Laboratory of Medical Chemistry and Molecular Diagnosis，College of Chemistry and Environmental Science，Hebei University，Baoding 071002，China）

Terpenes and Alkaloids in Tripterygium wilfordii were analyzed using GC－MS.Before alkaloids and terpenes were striped the extracted liquids of Tripterygium wilfordii had been defatted by ether，which was separated 130peaks by gas chromatographic.58compounds were identified through their corresponding to the mass spectrometry.These substances included mainly alcohols，aldehydes，acids，esters，ether，terpenoids and alkyls etc.The liquid extracted alkaloids were separated 111peaks and 40substances were identified.The relative content of terpenoids and alkaloids were 30%，and others were mainly acid compound and lipid compounds.

Tripterygium wilfordii；alkaloids；aether；GC－MS

O657.63

A

1000－1565（2013）02－0167－08

10.3969／j.issn.1000－1565.2013.02.011

2012－10－20

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（20575016）

郭志峰（1955－），男，河北保定人，河北大學(xué)研究員，主要從事有機(jī)質(zhì)譜方面研究.E－mail：gzfvg＠hbu.edu.cn