HPLC標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定格列吡嗪控釋片的釋放度及平均釋放速率

竇 佳董 莉戴睿嬌

（1 大連市食品藥品檢驗(yàn)所，遼寧 大連 116021；2 大連理工大學(xué)，遼寧 大連 116024）

HPLC標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定格列吡嗪控釋片的釋放度及平均釋放速率

竇 佳1董 莉1戴睿嬌2

（1 大連市食品藥品檢驗(yàn)所，遼寧 大連 116021；2 大連理工大學(xué)，遼寧 大連 116024）

目的 用高效液相色譜標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定格列吡嗪控釋片的釋放度。方法 用C18柱；流動(dòng)相：磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫鈉13.8g加水溶解并稀釋至1000mL，用2mol/L氫氧化鈉調(diào)pH至6.0）-甲醇（55∶45）；檢測(cè)波長(zhǎng)：225nm。采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定釋放度。結(jié)果 格列吡嗪濃度在1.0～10.0μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，r=0.9998。平均加樣回收率為100.19%，RSD=0.99%(n=5)。結(jié)論 本方法靈敏度高、專屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確可靠，較準(zhǔn)確的反映了格列吡嗪控釋片每4h的釋放情況。

格列吡嗪控釋片；高效液相；標(biāo)準(zhǔn)曲線法；釋放度；平均釋放速率

格列吡嗪控釋片用于治療糖尿病。原企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中的釋放度和平均釋放速率的測(cè)定方法，是在4、8、12、16h時(shí)分別取樣，以紫外分光光度法測(cè)定并計(jì)算釋放量，因這四個(gè)點(diǎn)的吸光度數(shù)值較?。?.01～0.14之間），使測(cè)定結(jié)果誤差較大，本文采用高效液相標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定格列吡嗪的釋放度及平均釋放速率，具有靈敏度高、專屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確可靠等優(yōu)點(diǎn)[1-3]。且經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證后，方法可行。

1 儀器與試藥

Agilent 1200高效液相色譜儀。UV檢測(cè)器。甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。對(duì)照品格列吡嗪（批號(hào)QCS 0509015純度：99.5%），均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。供試品規(guī)格為5mg，批號(hào)為B110115、B110133、B110206。共三批。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

高效液相色譜柱為C18 Tigerkin ODS-3（5μm，4.6×150mm）不銹鋼柱，流動(dòng)相：磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫鈉13.8g加水溶解并稀釋至1000mL，用2mol/L氫氧化鈉調(diào)pH至6.0）-甲醇（55∶45）；檢測(cè)波長(zhǎng)：225nm。流速：1.0mL/min；柱溫：40℃。進(jìn)樣量：20μL。格列吡嗪峰的保留時(shí)間約為6min，格列吡嗪及其他有關(guān)物質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求，理論板數(shù)按格列吡嗪計(jì)為5000。見(jiàn)圖1。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線

對(duì)照品溶液：取格列吡嗪對(duì)照品約20mg，精密稱定，置50mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。

精密量取上述對(duì)照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，分別置于200mL容量瓶中,用溶出介質(zhì)稀釋至刻度。在上述色譜條件下,分別進(jìn)樣3次，記錄色譜圖，以濃度X為橫坐標(biāo)，峰面積Y為縱坐標(biāo)，計(jì)算線性回歸方程：Y=65034X+744，r=0.9998。結(jié)果表明：格列吡嗪在1.0～10.0μg/mL濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

圖1 格列吡嗪控釋片HPLC色譜圖

2.3 加樣回收率試驗(yàn)

精密量取“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液5mL，置于50mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液A。取已知含量的樣品5份，分別加入上述對(duì)照品溶液A 1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，置于25mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，照上述HPLC法測(cè)定，每份樣品進(jìn)樣3次，結(jié)果平均回收率為100.19%，RSD=0.99%。見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率測(cè)定結(jié)果（n=5）

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

將于室溫避光放置4、8、12、24、48h的樣品溶液進(jìn)行HPLC法測(cè)定，峰面積基本不變，結(jié)果表明：該溶液穩(wěn)定性良好，能滿足測(cè)定要求。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

表2 三批釋放度的重現(xiàn)性比較（6片均值）（%）

取同一批號(hào)的樣品（批號(hào)B110206），連續(xù)3次進(jìn)樣測(cè)定，格列吡嗪的釋放度及平均釋放速率基本不變。

2.6 釋放度及平均釋放速率

取本品，照釋放度測(cè)定法（中國(guó)藥典2010版二部，附錄XD第一法），采用溶出度測(cè)定法第二法裝置，以磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫鉀6.8g加水適量溶解，加0.2mol/L氫氧化鈉溶液190mL，加水約至900mL，用0.2mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)pH至7.5，加水至1000mL，混勻）900mL為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為50轉(zhuǎn)，依法測(cè)定，在4、8、12、16h時(shí)分別取溶液9mL，并即時(shí)補(bǔ)充已預(yù)熱至37℃的磷酸鹽緩沖液9mL，濾過(guò)，用上述標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定釋放度及平均釋放速率。取格列吡嗪控釋片B110115、B110133、B110206三批，每批6片，照上述方法依法測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2。

3 討 論

3.1 分別使用Alltima C18（5μm，4.6×250mm）、大連依利特ODS2 C18（5μm，4.6×150mm）、Tigerkin C18（5μm，4.6×150mm）以及Kromasil C18（5μm，4.6×150mm）等色譜柱分析供試品溶液（批號(hào)B110206）樣品的有關(guān)物質(zhì)與含量，其結(jié)果基本一致。因此認(rèn)為本法對(duì)色譜柱的耐受性良好。

3.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇：根據(jù)《中國(guó)藥典》2010年版中該片劑紫外分光光度法，在226nm與274nm的波長(zhǎng)處有最大吸收，用本方法分別進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果在225nm的響應(yīng)值較好，故選用225nm波長(zhǎng)。

3.3 對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果表明，液相色譜法與紫外分光光度法測(cè)定結(jié)果基本一致，但由于紫外分光光度法在測(cè)定釋放量時(shí)其吸收值過(guò)低，容易產(chǎn)生誤差，故液相色譜法優(yōu)于原方法。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典2010版(二部)[S].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:812.

[2] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn).新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)第十冊(cè)[S].1997:91-92.

[3] 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局進(jìn)口藥品注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)JX20060002[S].

Determination of the Drug Release and the Average Release Rates of Glipizide Extended Release Tablets by HPLC Standard Curve Method

Dou Jia1, Dong Li1, Dai Rui-jiao2
(1 Dalian Institute for Food and Drug Control, Dalian 116021, China; 2 Dalian University of Technology, Dalian 116024, China)

Objective A HPLC standard curve method has been established for the determination of the drug release of glipizide extended release tablets. Methods C18 column was used. The mobile phase was phosphate BS (dissolve 13.8g of sodium dihydrogen phosphate in water and dilute to 1000mL, adjust pH to 6.0 with 2mol·L-1 sodium hydroxide) - Methonal (55∶45). The detection wavelength was at 225 nm. The HPLC standard curve method was employed to determine the drug release. Results The linear range of 1.0～10.0μg/mL (r=0.9998) was obtained. The average recovery of add sample was 100.19%, RSD was 0.99% (n=5). Conclusion The method was of high sensitivity and specificity, accurate, reliable. The method can reflect accurately the drug release of glipizide extended release tablets every 4 hours.

Glipizide extended release tablets; HPLC; Standard curve method; Drug release; Average release rates

R917

B

1671-8194（2013）23-0050-02