烏靈菌粉中總黃酮含量測定

潘 旖 姚 瑤 姚炳興 逯振宇

烏靈菌粉中總黃酮含量測定

潘 旖 姚 瑤 姚炳興 逯振宇

目的建立烏靈菌粉中總黃酮含量的測定方法。方法采用紫外-可見分光光度法，通過紫外掃描確定最大吸收波長，在最大波長處以蘆丁為對照品對總黃酮含量進(jìn)行測定。結(jié)果采用以亞硝酸鈉-硝酸鋁顯色的可見分光光度法在 510nm處測定烏靈菌粉中總黃酮含量，蘆丁對照品在 5.5～55μg?ml-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，線性回歸方程：y=0.013x－0.0176（r=0.9997），平均回收率為 99.430%（n=6），RSD%為 1.268%。結(jié)論采用以亞硝酸鈉-硝酸鋁顯色的可見分光光度法簡便，準(zhǔn)確可靠，可作為烏靈菌粉中總黃酮的含量測定方法。

烏靈菌粉；黃酮；含量測定

烏靈菌粉是從我國珍稀藥用真菌烏靈參中分離獲得的菌種，經(jīng)現(xiàn)代生物工程技術(shù)精制而成的純中藥制劑，具有補(bǔ)腎健腦、養(yǎng)心安神的功效，臨床多用于治療失眠，或與西藥聯(lián)合使用治療抑郁、神經(jīng)官能癥等[1-2]。目前對烏靈菌粉的研究主要集中于氨基酸、多糖以及藥理方面等，對烏靈菌粉黃酮含量的測定還尚未見諸報道。本試驗(yàn)采用紫外-可見光分光光度法，對制劑中黃酮含量進(jìn)行測定，以便更全面地控制其質(zhì)量。

1 材料與儀器

1.1 試劑蘆丁對照品（中國藥品生物制品檢定所）；烏靈菌粉（浙江佐力藥業(yè)股份有限公司）；無水乙醇（杭州大方化學(xué)試劑廠）；NaOH（河南爾康制藥有限公司）；NaNO2（天津博迪化工股份有限公司）；Al（NO3）3（上海振欣試劑廠）。

1.2 儀器UV2550紫外可見光分光光度計（日本島津）；離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的配制

2.1.1 對照品溶液的配制精密稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，用60%乙醇溶解并定容至50ml容量瓶中，配制成0.11mg?ml-1溶液，作為標(biāo)準(zhǔn)液備用。

2.1.2 樣品溶液的配制精密稱取烏靈菌粉約3g，加90%乙醇100ml，浸泡0.5h，在85℃水浴條件下回流提取2h，抽濾。同法再提取一次，抽慮，合并濾液，減壓回收乙醇至僅剩5～7ml為止，置100ml容量瓶中，用60%乙醇稀釋至刻度，得樣品溶液。

2.2 測定方法及波長的選擇供試品溶液 3.0ml，置于25ml容量瓶中，加5% NaNO2溶液1.0ml，搖勻，放置6min，加10% Al（NO3）3溶液1.0ml，搖勻，放置6min，加4% NaOH溶液10.0ml，然后用60%乙醇定容至刻度，搖勻，10000r/min離心20min，在波長400～700nm范圍內(nèi)掃描，圖譜顯示在510nm處有最大吸收峰。以相應(yīng)試劑為空白，在波長400～700nm范圍內(nèi)掃描，510nm附近未見吸收峰，故選擇測定波長為510nm。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 線性關(guān)系考察分別精密吸取蘆丁對照液0.50、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00ml于10ml容量瓶中，加5% NaNO2溶液0.3ml，搖勻，放置6min加10% A1（NO3）3溶液0.3ml，搖勻，放置6min加4% NaOH溶液4ml，再用60%乙醇液稀釋至刻度，搖勻，10000r/min離心20min置比色皿中，以試劑作空白參比，于510nm處測吸光度。用最小二乘法以吸光度（y）對濃度（x）（μg?ml-1）建立線性回歸方程得回歸方程：y=0.013x－0.0176（r=0.9997），表明線性關(guān)系良好。

2.3.2 精密度試驗(yàn)取同一份對照品溶液，按2.2方法進(jìn)行處理，510nm處測定吸光度值，連續(xù)測定 6次，計算RSD值為0.329%，表明儀器精密度良好。

2.3.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一份對照品溶液，按2.2方法進(jìn)行處理，顯色后于 10000r/min離心機(jī)離心20min后，于離心后0、10、20、30、40、50、60min時測定吸光度，結(jié)果表明樣品溶液在顯色后80min內(nèi)吸光度穩(wěn)定。

2.3.4 重復(fù)性試驗(yàn)精密稱取同一批次過 60目烏靈菌粉3g共6份，按2.2方法進(jìn)行處理，于510nm處測定吸光度值并計算含量，含量平均值為2.31%，RSD為2.309%，表明重復(fù)性良好。

2.3.5 加樣回收率試驗(yàn)精密吸取烏靈菌粉提取液6份于10ml容量瓶中，每份2.5ml（含總黃酮0.075mg），加入與樣品中總黃酮含量相等的蘆丁對照品，加0.3ml 5% NaNO2，搖勻后靜置6min；加0.3mlAL（NO3）3，搖勻后靜置6min；加4% NaOH 4ml搖勻后靜置6min，加60%乙醇補(bǔ)足至刻度；10000r/min離心20min，于510nm處測定測定吸光度值。計算得平均回收率為 99.430%，RSD%為1.268%（見表1）。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4 樣品中總黃酮的含量測定精密稱取3份不同批次烏靈菌粉，精密稱定，按相同方法制備成溶液，按2.2方法進(jìn)行處理，于510nm處測定吸光度值，根據(jù)回歸方程計算總黃酮含量（見表2）。

表2 樣品中總黃酮的含量測定結(jié)果

3 討論

本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用紫外分光光度法建立測定烏靈菌粉中總黃酮含量的方法。試驗(yàn)曾嘗試使用AlCl3顯色法以及鹽酸-鎂粉顯色法進(jìn)行顯色，但是AlCl3顯色法在350nm處有最大吸收，但極不穩(wěn)定，空白試劑在350nm 處無最大吸收；鹽酸-鎂粉法在顯色后在285nm處有最大吸收，但未顯色的供試品溶液、對照品溶液在280nm處有吸收，可以形成干擾，故未能用于本試驗(yàn)總黃酮含量的測定，最終選擇NaNO2-Al（NO3）3-NaOH顯色法為本試驗(yàn)總黃酮含量測定的顯色方法。本實(shí)驗(yàn)以蘆丁作為對照品，在 510nm處對烏靈菌粉樣品進(jìn)行總黃酮含量測定，結(jié)果表明該含量測定方法操作簡單、結(jié)果準(zhǔn)確、回收率高、重復(fù)性好，可用于烏靈菌粉總黃酮含量測定及質(zhì)量控制。

[1] 任少紅,王峰,丁靜,等.靈芝中總黃酮的含量測定[J].中國科技信息,2009(14)：214.

[2] 張丕奇,孔祥輝,劉佳寧,等.黑木耳中總黃酮提取及含量測定[J].食用菌,2010(4)：71.

Determination of Total Flavone content in WuLing Powder

Pan Yi Yao Yao Yao Bingxing Lu Zhenyu

ObjectiveTo establish a method to determine the content of total flavonoids in Wuling powder.MethodsTotal flavonoids in WuLing Powder were determined at 510nm by ult raviolet spectrophotometry with rutin as standard control.ResultsNaNO2-AL(NO3)3-NaOH colorimetry was used for determination of flavonoids in Wuling powder. The regressive equation was y=0.013x-0.0176(r=0.9997), the recovery was 99.430%(n=6) with RSD was 1.268%.ConclusionThe methods is simple and accurate. It can be used as an quality control method of total flavonoids in Wuling powder.

Wuling mycelia powder; Flavonoids; Content determination

R927.2

A

1673-5846(2013)07-0032-03

浙江佐力藥業(yè)股份有限公司，浙江湖州 313200