HPLC法快速測(cè)定復(fù)方板藍(lán)根顆粒中表告依春的含量

全維明董 禮彭裕紅

（1 雅安市食品藥品檢驗(yàn)所，四川 雅安 625000；2 雅安三九藥業(yè)有限公司，四川 雅安 625000；3 雅安職業(yè)技術(shù)學(xué)院，四川 雅安 625000）

HPLC法快速測(cè)定復(fù)方板藍(lán)根顆粒中表告依春的含量

全維明1董 禮2彭裕紅3

（1 雅安市食品藥品檢驗(yàn)所，四川 雅安 625000；2 雅安三九藥業(yè)有限公司，四川 雅安 625000；3 雅安職業(yè)技術(shù)學(xué)院，四川 雅安 625000）

目的 建立復(fù)方板藍(lán)根顆粒中表告依春的含量快速測(cè)定方法。方法 采用 HPLC 快速分析技術(shù)，色譜柱為 Waters XBridgeTM BEH Shield RP18（4.6×100mm，2.5μm），流動(dòng)相為甲醇 - 水（10 ∶ 90），流速為 2mL/min，柱溫 30℃，檢測(cè)波長(zhǎng) 245nm。結(jié)果 表告依春在進(jìn)樣量為 0.00908～0.3632μg 范圍內(nèi)峰面積線性良好，平均回收率為 99.4%，RSD 為 1.8%。結(jié)論 該法快速、準(zhǔn)確，可用于復(fù)方板藍(lán)根顆粒中表告依春的含量測(cè)定。

HPLC；復(fù)方板藍(lán)根顆粒；表告依春

復(fù)方板藍(lán)根顆粒由板藍(lán)根、大青葉，混合煎煮，精制而成。具有清熱解毒，涼血功效；用于溫病發(fā)熱，出斑，風(fēng)熱感冒，咽喉腫爛，流行性乙腦型腦炎，肝炎，腮腺炎[1]。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，表告依春是板藍(lán)根主要的抗病毒成分[2]，研究復(fù)方板藍(lán)根顆粒中表告依春的含量測(cè)定，對(duì)控制其質(zhì)量和評(píng)價(jià)其有效性具有十分重要的意義。

隨著色譜技術(shù)的提高，本文以Waters XBridgeTM BEH Shield RP18（4.6×100mm，2.5μm）為固定性，建立快速、高效測(cè)定復(fù)方板藍(lán)根顆粒中表告依春含量的方法。

圖1 高效液相色譜圖

1 試劑與試藥

Agilent 1260高效液相色譜儀；VWD紫外檢測(cè)器；色譜柱為Waters XBridgeTM BEH Shield RP18（4.6×100mm，2.5μm）；Sartorius BD-125電子天平；表告依春購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所（批號(hào)：111753-200601）；甲醇為色譜純，水為注射用水，其他試劑均為分析純；板藍(lán)根顆粒由雅安三九藥業(yè)有限公司研制，批號(hào)：120501，120502，120503。

2 溶液的制備

2.1 對(duì)照品溶液

精密稱(chēng)取對(duì)照品11.35mg，置50mL量瓶中，加甲醇-水（10∶90）溶液稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品儲(chǔ)備液（0.227mg/mL）；精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液1mL，用甲醇-水（10∶90）溶液定容到10mL，搖勻，即得對(duì)照品溶液（22.7μg/mL）。

2.2 供試品溶液和陰性對(duì)照溶液

取復(fù)方板藍(lán)根顆粒，研細(xì)，精密稱(chēng)取粉末約2g，精密加入70%乙醇25mL，密塞，稱(chēng)定重量，超聲提取30min，放冷，再稱(chēng)重，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5mL，水浴蒸干，殘?jiān)铀芙?，轉(zhuǎn)移，定容至25mL量瓶中，搖勻，續(xù)濾液用微孔濾膜（0.22μm）過(guò)濾，即得供試品溶液[3]；另取缺板藍(lán)根藥材的陰性顆粒，同法制成陰性對(duì)照溶液。

3 色譜條件

色譜柱Waters XBridgeTM BEH Shield RP18（4.6×100mm，2.5μm）；流動(dòng)相為甲醇-水（10∶90）；檢測(cè)波長(zhǎng)：245nm；流速：2mL/min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：4μL。分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液4μL，注入高效液相色譜儀中，記錄色譜圖，結(jié)果見(jiàn)圖1。

4 方法學(xué)考察

4.1 線性關(guān)系考察

精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液0.1，0.2，0.5，1，2，4mL，用甲醇-水（10∶90）定容到10mL，按本文色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以峰面積值Y為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量X為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：Y=9956.0X-1.51，r=0.9999。

結(jié)果表明表告依春進(jìn)樣量在0.00908～0.3632μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

4.2 精密度試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液4μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)得峰面積的RSD為0.4%（n=6）。結(jié)果表明精密度良好。

4.3 穩(wěn)定性考察

取供試品溶液，在0，2，4，6，8，16，24h進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算RSD為1.2%。表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

4.4 重復(fù)性試驗(yàn)

分別平行配制同一批樣品（批號(hào)120501）的供試品溶液6份，在本文色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，表告依春含量平均值為0.735mg/g，RSD為1.4%。結(jié)果重復(fù)性良好。

4.5 加樣回收率試驗(yàn)

稱(chēng)取對(duì)照品14.33mg，用70%乙醇定容到10mL，制得加樣回收對(duì)照液。精密稱(chēng)取已知含量的樣品（批號(hào)120501）粉末約2g共6份，分別精密加入加樣回收對(duì)照液1mL，按“2.2”項(xiàng)下方法制備溶液。按本文色譜條件測(cè)定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果表告依春加樣回收率在97.8%～102.3%之間，平均加樣回收率為99.4%，RSD為1.8%（n=6）。

4.6 樣品測(cè)定

取三批樣品，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液和“3”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算表告依春的含量，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 樣品測(cè)定結(jié)果（n=6）

5 討 論

5.1 表告依春是板藍(lán)根中的抗病毒活性成分，文獻(xiàn)報(bào)道了板藍(lán)根藥材的指紋圖譜相似度偏差較大（0.851～0.991）、表告依春含量波動(dòng)也大（0.005～0.068%）[4]，對(duì)板藍(lán)根原料提出質(zhì)量要求，對(duì)控制復(fù)方板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量有十分重要的意義。

5.2 文獻(xiàn)報(bào)道板藍(lán)根中存在表告依春對(duì)映體（R-告依春和S-告依春），其中R-告依春為活性成分，而S-告依春具有致甲狀腺腫大的作用[5]。本文只討論了以表告依春為對(duì)照所測(cè)得總對(duì)映體含量，故在以表告依春為指標(biāo)控制復(fù)方板藍(lán)根質(zhì)量時(shí)，應(yīng)制定其含量的上下限。

5.3 本文研究采用極性酰胺嵌入的C18細(xì)顆粒（2.5μm）填料柱，同時(shí)用流速2mL/min進(jìn)行洗脫，結(jié)果表告依春在3.25min出峰，大大縮短了分析時(shí)間。通過(guò)方法學(xué)考察，本方法快速、準(zhǔn)確，可用于復(fù)方板藍(lán)根顆粒中表告依春含量的快速分析。

[1]WS3-B-2377-97.Drug Specification Promulgated by the Ministry of Public Health,P R China[S].

[2]Xu LH,Huang F,Cheng T,et al.Antivirus constituents of radix of Isatis indigotica[J].Chin J Nat Med,2005,3(6):359.

[3]Cui T,Zhang ZL.Determination of Epigoitrin in Banlangen Granules by HPLC[J].China Pharmaceuticals,2012,2l(8):50.

[4]Hu XY,Sun Q,Jiang L,et al.Quality evaluation of isatidis radix from different growing areas by content of epigoitrin and HPLC fingerprint[J].J Luzhou Med Coll,2012,35(1):1.

[5]Nie LX,Wang GL,Dai Z,et al.Determination of epigoitrin and goitrin in Isatidis Radix by chiral high performance liquid chromatography[J].Chin J Chromatogr,2010,28(10):1001.

Determination of Epigoitrin in Fufang Banlangen Granules by HPLC

QUAN Wei-ming1, DONG Li2, Peng Yu-hong3
(1 Ya’an Institute for Food and Drug Control, Ya’an 625000, China; 2 Ya’an Sanjiu Pharmaceutical CO.Ltd, Ya’an 625000, China; 3 Ya’an Vocational College, Ya’an 625000, China)

ObjectiveTo establish faster determination method for epigoitrin in Fufang Banlangen granules.MethodThe HPLC analysis was carried out on Waters XBridgeTM BEH Shield RP18(4.6×100mm,2.5μm). The mixture of methanol- water (10∶90) was used as the mobilephase. The Column temperature was 30℃. The flow rate was 2mL/min. The detection wavelength was 245nm.ResultsThe linear range of epigoitrin was 0.00908-0.3632μg. The average recovery of this method was 99.4% and the RSD was 1.8%.ConclusionThe method was faster and accuracy. And it can be applied in determanition of epigoitrin in Fufang Banlangen Granules.

HPLC; Fufang Banlangen granules; Epigoitrin

R282.710.3

：B

：1671-8194（2013）07-0030-02