CD44v6和E-cad在舌鱗癌中的表達(dá)差異及意義

李正非劉佳柏* 郭婷婷

（1 吉林省通化市人民醫(yī)院口腔科，吉林 通化 134000；

2 吉林大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春 130000；3 遼寧醫(yī)學(xué)院，遼寧 錦州 121000）

CD44v6和E-cad在舌鱗癌中的表達(dá)差異及意義

李正非1劉佳柏2* 郭婷婷3

（1 吉林省通化市人民醫(yī)院口腔科，吉林 通化 134000；

2 吉林大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春 130000；3 遼寧醫(yī)學(xué)院，遼寧 錦州 121000）

目的 研究舌鱗癌組織中 CD44v6和 E-cad 的表達(dá)差異，評(píng)價(jià)其臨床意義。方法 免疫組化 SP 法檢測(cè) 60 例舌鱗癌組織中 CD44v6和 E-cad的表達(dá)，應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)。結(jié)果 CD44v6與臨床分期及頸淋巴轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，E-cad 與臨床分期及頸淋巴轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)。CD44v6與 E-cad表達(dá)量呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。結(jié)論 CD44v6與 E-cad 在舌鱗癌組織中表達(dá)差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，兩者可能存在相互作用，共同在舌鱗癌的發(fā)生發(fā)展，侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中起作用。

CD44v6；E-cad；舌鱗癌；侵襲轉(zhuǎn)移

舌鱗癌是口腔領(lǐng)面部常見(jiàn)的惡性腫瘤，在口腔癌中所占比率最高且近年來(lái)發(fā)病率呈快速上升趨勢(shì)。臨床上由于腫瘤生長(zhǎng)快，易侵襲，有豐富的淋巴管和血液循環(huán)加之舌體的運(yùn)動(dòng)頻繁，早期就會(huì)發(fā)生頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，現(xiàn)今治療仍然是以手術(shù)切除為主，由于口腔是消化道的始端且組織有限，大范圍切除勢(shì)必會(huì)影響功能和美觀，給患者帶來(lái)極大的痛苦。因此早期診斷和控制舌癌的侵襲性可以提高患者的生存質(zhì)量。本文通過(guò)對(duì)舌鱗癌組織中CD44v6和E-cad的表達(dá)情況分析探尋二者與舌鱗癌侵襲性的關(guān)系及二者之間的相關(guān)性。目的在于尋找腫瘤標(biāo)志物及舌鱗癌侵襲轉(zhuǎn)移的證據(jù)。

1 方法與資料

1.1 標(biāo)本選擇

選擇2003～2012年吉林省通化市人民醫(yī)院保留的76例舌鱗癌的石蠟切片為標(biāo)本。所有病例術(shù)前均為行放化療，術(shù)后病理均為鱗狀細(xì)胞癌。均保留有完整的臨床資料；其中男69例，女7例，最大年齡82歲，最小年齡41歲，年齡平均為67歲；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者33例，無(wú)轉(zhuǎn)移者43例。取10例癌緣1cm外的正常組織做為對(duì)照。蠟塊制成連續(xù)切片，厚度為4μm。

1.2 試劑

鼠抗人CD44v6單克隆抗體上海恒斐生物科技有限公司，E-cad免疫組化SP超敏試劑盒和DAB顯色試劑盒購(gòu)自北京中杉生物技術(shù)有限公司。

1.3 方法

以上所選標(biāo)本采用免疫組化SP法檢測(cè)CD44v6和E-cad的表達(dá)，具體操作按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。光鏡下觀察，棕黃色顆粒為陽(yáng)性，無(wú)染色者為陰性，陽(yáng)性細(xì)胞的顯色部位為胞質(zhì)。每張切片可觀察5個(gè)高倍視野（×400），每個(gè)視野計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞，共計(jì)1000個(gè)細(xì)胞。按照所染色強(qiáng)弱度及陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)所占腫瘤細(xì)胞總數(shù)的百分?jǐn)?shù)計(jì)分。染色強(qiáng)度：未染色為0分，淡黃色計(jì)1分，棕黃色計(jì)2分，棕褐色計(jì)3分；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)計(jì)算：＜5%為0分，5%～25%計(jì)1分，26%～50%計(jì)2分，＞50%計(jì)3分；染色強(qiáng)度得分和陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)得分相加，總分0～2分者為陰性（-），＞2分者為陽(yáng)性（+）。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

應(yīng)用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件，所有數(shù)據(jù)比較采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用列聯(lián)表的關(guān)聯(lián)性分析法，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，P＜0.05則說(shuō)明差異有顯著性。

2 結(jié) 果

2.1 CD44v6和E-cad兩者表達(dá)差異與舌鱗癌臨床病理特點(diǎn)的關(guān)系

臨床分期Ⅲ～Ⅳ期的患者組織中的CD44v6的表達(dá)高于Ⅰ～Ⅱ期的患者（P＜0.001），組織分化程度低患者的組織中CD44v6表達(dá)高于組織分化程度高者（P＜0.001），有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者的組織中CD44v6表達(dá)較無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者高（P＜0.05），而組織中的E-cad結(jié)果與CD44v6相反。兩者在舌鱗癌組織的表達(dá)率與患者年齡不相關(guān)（P＞0.05）。見(jiàn)表1。

表1 不同臨床病理特點(diǎn)的舌鱗癌組織中CD44v6和E-cad的陽(yáng)性表達(dá)率

2.3 CD44v6和E-ca表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系分析

有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例中CD44v6陽(yáng)性表達(dá)時(shí)，E-cad陰性表達(dá)率較高為95.45%，CD44v6陰性表達(dá)時(shí)，E-cad陽(yáng)性表達(dá)率相對(duì)較高為68.57%。統(tǒng)計(jì)分析顯示，列聯(lián)系數(shù)r=0.306，P=0.015＜0.05，說(shuō)明在淋巴轉(zhuǎn)移的舌鱗癌中兩種蛋白表達(dá)具有關(guān)聯(lián)性。

表2 轉(zhuǎn)移病例中CD44v6和E-cad兩蛋白表達(dá)差異關(guān)系

3 討 論

本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)不同的臨床病理學(xué)特點(diǎn)的舌鱗癌中CD44v6和E-cad的表達(dá)存在差異，臨床分期Ⅲ～Ⅳ期，分化程度低的患者組織中的CD44v6的表達(dá)高于Ⅰ～Ⅱ期，分化程度高的患者，而E-cad在Ⅲ～Ⅳ期分化程度低的患者中的表達(dá)則低于Ⅰ～Ⅱ期，分化程度高。在出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中CD44v6表達(dá)明顯高于未出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，而E-cad的表達(dá)也明顯降低。這與國(guó)內(nèi)外的其他學(xué)者的結(jié)果相同。如袁天柱等通過(guò)免疫組化ABC法檢測(cè)肺鱗癌組織及其癌旁組織發(fā)現(xiàn)CD44v6不但與腫瘤的發(fā)生有關(guān)，其陽(yáng)性還可能預(yù)示淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)[1]。Lee表明，E-cad在早期，分化高，無(wú)浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的肺癌組織中表達(dá)水平較高，而在晚期分化水平低，有轉(zhuǎn)移的肺癌組織中表達(dá)水平低[2]。Prudkin等也發(fā)現(xiàn)肺鱗癌中E-cad表達(dá)降低明顯有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[3]。

CD44是細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分，在組織完整性上起作用，CD44v6由于編碼CD44基因片段功能區(qū)外的外顯子6發(fā)生可變拼接后轉(zhuǎn)錄而成，被認(rèn)為與腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[4]。Stochler等認(rèn)為CD44v6的過(guò)度表達(dá)，可使腫瘤細(xì)胞牢牢的固定在正常細(xì)胞基底膜與細(xì)胞外間質(zhì)中。其穩(wěn)定性為發(fā)展成癌灶創(chuàng)造條件，是腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的基礎(chǔ)。同時(shí)其表達(dá)過(guò)度可使腫瘤細(xì)胞周圍的透明質(zhì)酸濃度升高，細(xì)胞間質(zhì)滲透壓升高，吸收過(guò)多水份造成細(xì)胞外間質(zhì)結(jié)構(gòu)的破壞，為腫瘤細(xì)胞侵襲創(chuàng)造條件[5]。Orian-Rousseau等認(rèn)為，CD44v6通過(guò)與肝細(xì)胞生成因子HGF及酪氨酸激酶受體形成復(fù)合物來(lái)激活Ras信號(hào)通路。Ras被激活后會(huì)產(chǎn)生細(xì)胞增值及抗凋亡作用[6]。E-cad是一種主要表達(dá)在上皮細(xì)胞上的鈣依賴性跨膜蛋白。它主要起到介導(dǎo)細(xì)胞之間相互黏附的作用。同時(shí)也對(duì)保持細(xì)胞間的連接，維持上皮細(xì)胞的完整性，誘導(dǎo)上皮細(xì)胞分化[7]。二者協(xié)同促進(jìn)轉(zhuǎn)移的機(jī)制可能是當(dāng)E-cad表達(dá)降低時(shí)腫瘤細(xì)胞間黏附力下降，腫瘤細(xì)胞變得松散，單個(gè)的腫瘤細(xì)胞更容易浸潤(rùn)到腫瘤周圍的正常組織中，加之高表達(dá)的CD44v6使腫瘤細(xì)胞固定可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)展成癌灶，從而促進(jìn)了轉(zhuǎn)移。

CD44v6和E-cad均與舌鱗癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，且兩者在腫瘤轉(zhuǎn)移中存在密切關(guān)聯(lián)，兩者同時(shí)檢測(cè)可能更準(zhǔn)確的反映預(yù)后，為臨床醫(yī)師提供更有意義的指導(dǎo)。

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：1671-8194（2013）04-0193-02

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