宮頸癌患者血清VEGF-C、VEGF-D的臨床研究

楊春燕許 歡路考生張 杰程 莉*

（1 山西醫(yī)科大學(xué)，山西 太原 030001；2 山西醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院產(chǎn)科，山西 太原 030001；

3 山西醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院骨科，山西 太原 030001；4 山西生命醫(yī)學(xué)科學(xué)院，山西 太原 030001）

宮頸癌患者血清VEGF-C、VEGF-D的臨床研究

楊春燕1許 歡2路考生3張 杰1程 莉4*

（1 山西醫(yī)科大學(xué)，山西 太原 030001；2 山西醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院產(chǎn)科，山西 太原 030001；

3 山西醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院骨科，山西 太原 030001；4 山西生命醫(yī)學(xué)科學(xué)院，山西 太原 030001）

目的 探討血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 C 及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 D 在宮頸癌、CIN Ⅱ /Ⅲ及正常宮頸組織中的表達(dá)情況，分析其在宮頸癌生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移中的作用，并評(píng)價(jià) VEGF-C 用于預(yù)測(cè)宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的診斷效能。方法 采用 ELISA 法檢測(cè) 16 例正常對(duì)照、12 例 CIN Ⅱ /Ⅲ、6 例無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸癌患者、6 例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸癌患者血清中 VEGF-C 及 VEGF-D 的表達(dá)并比較各組間差異性，用 ROC 曲線評(píng)價(jià)VEGF-C 預(yù)測(cè)宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的診斷效能。結(jié)果 ①宮頸癌有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組血清 VEGF-C 水平高于宮頸癌組無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（P＜ 0.05）；無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組血清 VEGF-C 水平高于 CIN Ⅱ /Ⅲ組（P ＜ 0.05）；CINII/III 組血清 VEGF-C 水平高于正常對(duì)照組 （P＜ 0.05）。②宮頸癌有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組與無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組及 CIN Ⅱ /Ⅲ組三組血清 VEGF-D 水平相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞ 0.05）；宮頸癌有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組及 CIN Ⅱ /Ⅲ組均高于正常宮頸組（P ＜ 0.05）。當(dāng)劃定 VEGF-C 的診斷閾值為 356.52pg/mL 時(shí)，其預(yù)測(cè)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的敏感度為 83.3%，特異度為 83.3%。在 ROC 分析中，VEGF-C 的曲線下面積為 97.2%。結(jié)論 ① VEGF-C 在宮頸癌生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移和預(yù)后過(guò)程中起一定的作用，VEGF-D 可能在癌前病變的發(fā)生、演變過(guò)程中起作用；②可用宮頸癌患者血清中 VEGF-C 的水平來(lái)預(yù)測(cè)淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移。

宮頸癌；血清；VEGF-C；VEGF-D；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；ROC 曲線

宮頸癌在女性生殖道惡性腫瘤中居首位，發(fā)病率呈升高和低齡化趨勢(shì)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是造成宮頸癌死亡的主要原因，然而目前的儀器檢查很難較早發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)。有研究顯示VEGF-C、VEGF-D在宮頸癌組織中高表達(dá)，VEGF-C與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，VEGF-D與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否尚存在爭(zhēng)議。且宮頸癌患者血清中VEGF-C及VEGF-D的表達(dá)研究尚少。本實(shí)驗(yàn)的目的是通過(guò)研究宮頸癌患者血清中VEGF-C及VEGF-D的表達(dá)水平并分析其意義，為臨床宮頸癌的早期診斷、淋巴轉(zhuǎn)移的早期發(fā)現(xiàn)及治療提供新的臨床思維。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2011年12月至2012年6月山西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦科收治的12例CINⅡ/Ⅲ患者、6例無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸癌患者、6例淋巴轉(zhuǎn)移宮頸癌患者、16例非宮頸疾病患者的血清。所有宮頸癌病例均為鱗癌，所有患者術(shù)前均未輸血或行化療放療等治療。

1.2 方法

所有研究對(duì)象均于入院后抽肘靜脈血4mL，注入試管中，充分搖勻。凝固后分離血清標(biāo)本以2000r/min，10min離心。取上清液置于-20℃保存待測(cè)。采用雙抗體夾心ELISA法測(cè)定VEGF-C及VEGF-D濃度，試劑盒為美國(guó)R＆D公司產(chǎn)品。嚴(yán)格按照人VEGF-C及D的ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.3 主要試劑及儀器

人VEGF-CELISA試劑盒 （R＆Dsystems美國(guó)）；酶標(biāo)儀Model680全自動(dòng)高精度BIO-RAD美國(guó)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS13.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。各組數(shù)據(jù)經(jīng)方差分析后進(jìn)行比較，多組間比較采用單向方差分析（One-way ANOVA），以α=0.05為檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié) 果

通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度和所對(duì)應(yīng)的OD值得出VEGF-C和VEGF-D的方程式分別為y=-13.1399+164.8014X和y=-10.0649+122.5375X，依據(jù)方程式求出40例患者血清中VEGF-C及VEGF-D的濃度（ng/mL）。VEGF-C的濃度隨著宮頸病變程度的加深逐漸增高，正常對(duì)照組中VEGF-C的平均值最低，伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌患者組VEGF-C的平均值最高。宮頸癌組無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移組、有淋巴轉(zhuǎn)移組及癌前病變組的VEGF-D水平無(wú)差別，均高于正常對(duì)照組。

2.1 各組血清VEGF-C、D水平比較

宮頸癌有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組血清VEGF-C水平高于宮頸癌組無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（P＜0.05）；無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組血清VEGF-C水平高于CINⅡ/Ⅲ組及正常對(duì)照組 （P＜0.05）；CINⅡ/Ⅲ組血清VEGF-C水平高于正常對(duì)照組（P＜0.05），見(jiàn)表1。宮頸癌有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組與宮頸CINⅡ/Ⅲ組的血清VEGF-D濃度相比差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）且均高于正常宮頸組，見(jiàn)表2。

表1 各組血清VEGF-C含量（ng/L）

表2 各組血清VEGF-D含量（ng/L）

2.2 宮頸癌患者血清中VEGF-C含量與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

12例宮頸癌患者中，6例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，6例無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組VEGF-C的平均濃度高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者。差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.009）。見(jiàn)表3、4。

表3 各組血清VEGF-C含量（ng/L）

表4 各組血清VEGF-D含量（ng/L）

2.3 宮頸癌患者血清VEGF-C的ROC曲線分析

見(jiàn)圖1。曲線下面積為97.2%，當(dāng)取值為356.52時(shí)靈敏度為83.3%，特異度為83.3%。

3 討 論

VEGF家族及其受體（VEGFR）家族是參與血管新生、淋巴管新生的主要因子。VEGF家族有6個(gè)成員，VEGF-C、VEGF-D及它們的受體VEGFR-3是目前研究最多的介導(dǎo)淋巴管生成的信號(hào)系統(tǒng)[1]。VEGF-C 和VEGF-D是分泌型的糖蛋白，水解后其對(duì)VEGFR-3的親和力逐漸提高，提示其水解程度可能影響淋巴管生成的程度。VEGF-C和VEGF-D的成熟形式也能同時(shí)結(jié)合激活VEGFR-2、VEGFR-3促進(jìn)血管生成，但對(duì)后者的活性更強(qiáng)[2]。本課題同時(shí)測(cè)定了宮頸癌患者血清中的VEGF-C和VEGF-D，將二者的濃度與以往實(shí)驗(yàn)結(jié)果相比較，并首次用ROC曲線分析了VEGF-C預(yù)測(cè)宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的診斷效能。

圖1 ROC曲線分析

國(guó)內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)VEGF-C與許多惡性腫瘤相關(guān)，且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。VEGF-C、VEGF-D與宮頸癌關(guān)系較為密切，Van等[3]發(fā)現(xiàn)VEGF-C、VEGF-D和VEGFR-3在宮頸病變進(jìn)展不同階段表達(dá)有顯著正相關(guān)性。CINⅠ～Ⅱ和CINⅢ相比有明顯差異（P＜0.001），但在CINⅢ和宮頸癌中沒(méi)有差異。提示淋巴血管形成的表型可能發(fā)生在CIN。有研究發(fā)現(xiàn)：宮頸癌患者血清中VEGF-C在CINⅠ的表達(dá)較在正常宮頸中的表達(dá)高（P=0.002），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。CINⅡ～Ⅲ患者血清中VEGF-C的表達(dá)較正常對(duì)照組高（P=0.001）。持續(xù)轉(zhuǎn)移宮頸癌患者血清中VEGF-C的表達(dá)高于正常對(duì)照（P＜0.0001）[4]。

本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：①宮頸癌有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組血清VEGF-C水平高于宮頸癌組無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（P＜0.05）；無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組血清VEGF-C水平高于CINⅡ/Ⅲ組（P＜0.05）；CINⅡ/Ⅲ組血清VEGF-C水平高于正常對(duì)照組（P＜0.05）。②宮頸癌有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組與無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組及CINⅡ/Ⅲ組三組血清VEGF-D水平相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；宮頸癌有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組及CINⅡ/Ⅲ組均高于正常宮頸組（P＜0.05）。當(dāng)劃定VEGF-C的診斷閾值為356.52pg/mL時(shí)，其預(yù)測(cè)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的敏感度為83.3%，特異度為83.3%。在ROC分析中，VEGF-C的曲線下面積為97.2%。

血清中VEGF-C及VEGF-D檢測(cè)的意義：①在臨床上檢查HPV病毒及宮頸細(xì)胞學(xué)檢測(cè)價(jià)格較貴，為了降低普查費(fèi)用可以用VEGF-D來(lái)篩查癌前病變，可以檢測(cè)血清中的VEGF-C來(lái)預(yù)測(cè)宮頸癌的發(fā)病率，從而降低普查費(fèi)用，減少患者的痛苦及醫(yī)務(wù)人員的工作量。②淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否直接關(guān)系到手術(shù)的范圍及患者的生存期，VEGF-C可以作為術(shù)者評(píng)估手術(shù)時(shí)機(jī)及淋巴結(jié)清理范圍的參考指標(biāo)。③淋巴結(jié)清掃只能掃除肉眼可見(jiàn)的淋巴結(jié)，而對(duì)淋巴管內(nèi)的微轉(zhuǎn)移卻無(wú)效，新輔助化療的應(yīng)用一定程度上可控制亞臨床轉(zhuǎn)移。宮頸癌患者血清中的VEGF-C的水平高低可以指導(dǎo)臨床的輔助化療。④有研究顯示術(shù)后患者較術(shù)前患者VEGF-C顯著降低，而復(fù)發(fā)患者VEGF-C又會(huì)升高，所以VEGF-C還可以預(yù)測(cè)宮頸癌的復(fù)發(fā)，預(yù)測(cè)宮頸癌患者的生存期。

[1]Jussila L,Alitalo K.Vascular growth factors and lymphangiogenesis [J].Physiol Rev,2002,82(3):673-700.

[2]Joukov V,Sorsa T,Kumar V,et al.Proteolytic processing regulates receptor specificity and activity of VEGF-C[J].EMBO J,1997,16 (5):3898-3911.

[3]Van Trappen Philippe O,Steele D,Lowe DG,et al.Expression of vascular endothelial growth factor (VEGF)-C and VEGF-D, and their receptor VEGFR-3, during different stages of cervical carcinogenesis[J].J Pathol,2003,201(4):544-547.

[4]Mathur SP,Rajesh S,Mathu R,et al.Serum vascular endothelial grath factor C (VEGF-C) as a specific biomarker for advanced cervical cancer : Relationship to insulin-like growth factorⅡ (IGF-Ⅱ) IGF binding protein 3 (IGF-BP3 ) and VEGF-B[J].Gynecologic Oncology,2005,98(2): 467.

R737.33

：B

：1671-8194（2013）06-0145-03

*通訊作者