三七總皂苷對(duì)痛風(fēng)的干預(yù)※

陸再華 張?？?楊妍華

三七總皂苷對(duì)痛風(fēng)的干預(yù)※

陸再華 張?？?楊妍華

目的本文以尿酸鈉100μg?mL-1誘導(dǎo)體外急性炎癥模型，觀察三七總皂苷對(duì)ICAM-1表達(dá)及內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響，探討臨床用于痛風(fēng)的價(jià)值。方法采用2.5、5.0、10.0μg?mL-1濃度的三七總皂苷進(jìn)行預(yù)干預(yù)，實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)ICAM-1的基因表達(dá)，流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞凋亡率。結(jié)果三七總皂苷組2.5、5.0、10.0μg?mL-1明顯抑制細(xì)胞凋亡（6.90 ±1.07）%，與模型組比較P＜0.01；能顯著抑制ICAM-1基因的表達(dá)。結(jié)論三七總皂苷顯著抑制炎癥因子ICAM-1的表達(dá)及細(xì)胞凋亡。

三七總皂苷；ICAM-1；痛風(fēng)

三七總皂苷可以調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫炎癥因子表達(dá)的作用，具有降低氧化應(yīng)激、減輕炎癥[1]，可調(diào)節(jié)細(xì)胞因子水平，改善外周血T淋巴細(xì)胞亞群，調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞釋放保護(hù)性細(xì)胞因子增多，釋放有害細(xì)胞因子減少，改善患者免疫紊亂狀態(tài)，使細(xì)胞因子水平恢復(fù)正常，可增強(qiáng)對(duì)急性期炎癥及病情活動(dòng)的控制[2]，能夠減輕oxLDL對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，升高內(nèi)皮細(xì)胞活性，降低內(nèi)皮細(xì)胞免疫炎癥因子CD40、VCAM-1的表達(dá)[3]，能抑制心肌細(xì)胞的肥大以及心肌細(xì)胞凋亡[4]。本文以尿酸鈉100μg?mL-1誘導(dǎo)體外急性炎癥模型，觀察三七總皂苷對(duì)炎癥因子ICAM-1表達(dá)及內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響，以探討臨床用于痛風(fēng)患者的干預(yù)價(jià)值。

1 儀器與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器電熱恒溫水浴箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；CO2恒溫培養(yǎng)箱；超凈工作臺(tái)（蘇州凈化設(shè)備有限公司）；Olympu顯微鏡；Bio-Red全自動(dòng)酶標(biāo)儀；NAPCO，細(xì)胞培養(yǎng)箱；9SORVALL高速冷凍離心機(jī)；GeneMate PCR循環(huán)儀；DYY-6B電泳儀；BIO-RAD Gel DocTM XR凝膠紫外s成像系統(tǒng)；BD流式細(xì)胞檢測(cè)儀。

1.2 方法實(shí)驗(yàn)方法分為空白對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、模型組（尿酸鈉刺激組）、三七總皂苷（血塞通）干預(yù)組?？瞻讓?duì)照組（200μL 1640培養(yǎng)液）、模型組（尿酸鈉刺激組50μg?ml-1MSU溶液）、陽(yáng)性對(duì)照組（50μg?ml-1吲哚美辛），三七總皂苷（血塞通）干預(yù)組（2.5、5.0、10.0μg?mL-1）。

1.3 HUVEC細(xì)胞的培養(yǎng)HUVEC細(xì)胞株經(jīng)支原體檢測(cè)符合要求，HUVEC細(xì)胞經(jīng)0.25%胰蛋白酶消化，含10%胎牛血清的1640培養(yǎng)液中和，離心后去上清液，加含10%胎牛血清的1640培養(yǎng)液培養(yǎng)，移入細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，在37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱中傳代培養(yǎng)。

1.4 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡對(duì)處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HUVEC用0.25%的胰蛋白酶消化，輕輕吹打，制成細(xì)胞懸液，調(diào)整好細(xì)胞密度為5×106/L，接種于普通細(xì)胞培養(yǎng)瓶中。待細(xì)胞長(zhǎng)滿后，再進(jìn)行三七總皂苷藥物干預(yù)，PBS收集細(xì)胞，離心去上清液，加入CD54單克隆抗體，30min后，PBS洗滌，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡。觀察細(xì)胞凋亡的現(xiàn)象，具有明顯抑制細(xì)胞凋亡的作用。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理計(jì)量資料以表示，組間采用t檢驗(yàn)，以P＜0.01為具有顯著性差異。

2 痛風(fēng)患者的治療前后尿酸值變化情況

見表1。

表1 臨床治療痛風(fēng)患者尿酸值的變化

3 結(jié)果

用MSU誘導(dǎo)刺激HUVEC細(xì)胞，對(duì)ICAM-1的基因表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)?？瞻讓?duì)照組對(duì)ICAM-1的基因表達(dá)僅有少量，模型組對(duì)ICAM-1的基因表達(dá)明顯高于空白對(duì)照組P＜0.01，陽(yáng)性對(duì)照組和三七總皂苷（血塞通）明顯降低對(duì)ICAM-1的基因表達(dá)P＜0.01，具有顯著性差異。三七總皂苷（血塞通）組2.5/μg?ml-1對(duì)MSU誘導(dǎo)的HUVEC致炎癥模型下的ICAM-1的表達(dá)有顯著抑制作用，具有抗炎作用。

流式細(xì)胞儀染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡：將收集的細(xì)胞用PBS洗滌，懸浮于buffer中，取100μL的細(xì)胞懸液于試管中，加入5μL Annexin V-FITC和5μL PI，混勻，于室溫避光30min，在反應(yīng)試管加入400μL buffer液，雙染后流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡。雙染后流式細(xì)胞儀檢測(cè)可見，在由4個(gè)象限組成的散點(diǎn)圖上。與正常組比較，模型組細(xì)胞凋亡率明顯增加為（9.30±1.32）%；三七總皂苷組2.5、5.0、10.0μg/ml明顯抑制細(xì)胞凋亡（6.90±1.07）%，與模型組比較P＜0.01，具有顯著性差異。

4 結(jié)論

用尿酸鈉溶液刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞株可以形成急性炎癥模型，三七總皂苷（PNS）對(duì)以尿酸鈉（MSU）100μg?mL-1誘導(dǎo)體外急性炎癥模型，對(duì)MSU誘導(dǎo)的HUVEC損傷致炎癥模型下的ICAM-1的表達(dá)都有顯著抑制作用。模型組明顯高于空白組P＜0.01，三七總皂苷組2.5μg?mL-1降低MSU對(duì)HUVEC刺激的基因表達(dá)，P＜0.01。三七總皂苷（血塞通）組2.5、5.0、10.0μg?mL-1明顯抑制細(xì)胞凋亡（6.90± 1.07）%，與模型組比較P＜0.01。

臨床應(yīng)用血塞通治療痛風(fēng)患者療效確切，使用方便，患者的依從性好，且癥狀得到改善，尿酸值治療前后有顯著性差異。通過臨床治療，體外藥效評(píng)價(jià)，構(gòu)建成分基本清楚，作用靶點(diǎn)明確的中藥治療方案和體系。體內(nèi)外結(jié)合評(píng)價(jià)治療標(biāo)準(zhǔn)的方法，體內(nèi)主要是藥物療效的體現(xiàn)，體外主要是藥物作用機(jī)制的探討和評(píng)價(jià)。減少中藥成分復(fù)雜，作用機(jī)理不明確的弱點(diǎn)，形成成分清楚、作用目標(biāo)明確、質(zhì)量穩(wěn)定可靠的特點(diǎn)，同時(shí)又具有傳統(tǒng)中成藥相似的整體功能，毒副作用小的特點(diǎn)。

[1] 張?？?陸再華,楊妍華.三七總皂苷對(duì)細(xì)胞免疫炎癥因子作用的研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥師,2011,14(9)：1349-1350.

[2] 張佳紅,王晉平,王慧娟.三七總皂苷調(diào)整類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎免疫相關(guān)內(nèi)環(huán)境失衡狀態(tài)的臨床研究[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志,2007, 27(7)：589-592.

[3] 劉桂林,竇迎春,劉粉葉,等.三七總皂苷對(duì)oxLDL誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞CD40,VCAM-1表達(dá)的影響[J].山東大學(xué)學(xué)報(bào),2010, 48(10)：14-19.

[4] 謝輝,陳俊.三七總皂苷對(duì)心肌細(xì)胞肥大及凋亡的影響[J].山西醫(yī)藥雜志,2010,39(11)：1059-1060.

PNS on Gout the Hntervention

Lu Zaihua Zhang Fukang Yang Yanhua

ObjectiveIn this paper, uric acid sodium 100μg?mL-1induced acute inflammation model in vitro, to observe the effect of total saponins of three seven on ICAM-1 expression and apoptosis of endothelial cells, to investigate the clinical value of for ventilation.MethodsThe total saponins of three seven 2.5,5.0,10.0μg?mL-1concentration of pre intervention, expression of real-time quantitative PCR detection of ICAM-1 gene,cell apoptosis was detected by flow cytometry.ResultsTotal saponins of three seven groups of 2.5,5.0,10.0μg?mL-1significantly inhibited apoptosis (6.90±1.07)%, compared with model group,P＜0.01; expression can significantly inhibit ICAM-1 gene.ConclusionTotal saponins three seven inhibited the cell apoptosis and expression of ICAM-1 cytokines.

Total saponins three seven; ICAM-1; Gout

R259

A

1673-5846(2013)06-0027-02

江蘇省常州市第七人民醫(yī)院，江蘇常州 213011

常州市科技計(jì)劃項(xiàng)目：血塞通（三七總皂苷）對(duì)痛風(fēng)的治療及對(duì)痛風(fēng)炎癥損傷的ICAM-1的表達(dá)，編號(hào)（CS20109011）