胃癌組織和循環(huán)miR-21與胃癌伊立替康敏感性關(guān)系的初步研究

徐登誠劉寶瑞沈潔

1.解放軍第452醫(yī)院內(nèi)科，四川 成都 610021；

2.南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院腫瘤中心，江蘇 南京 210008

胃癌組織和循環(huán)miR-21與胃癌伊立替康敏感性關(guān)系的初步研究

徐登誠1,2劉寶瑞2沈潔2

1.解放軍第452醫(yī)院內(nèi)科，四川 成都 610021；

2.南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院腫瘤中心，江蘇 南京 210008

背景與目的：腫瘤組織和細胞中的miR-21先后被證實與腫瘤對化療藥物的敏感性有關(guān)，高表達miR-21提示腫瘤對多種化療藥物不敏感。外周血蘊含豐富的腫瘤信息，為個體化藥物治療提供了新的檢測來源。本研究初步探討胃癌組織和血漿循環(huán)miR-21表達水平與胃癌鉑類藥物和伊立替康敏感性之間的關(guān)系。方法：系統(tǒng)收集35例經(jīng)病理確診的新鮮人胃癌標本，采用三維微組織塊培養(yǎng)法行兩種藥物的體外敏感試驗；實時熒光定量PCR檢測血漿和對應(yīng)胃癌石蠟組織中miR-21表達水平。結(jié)果：血漿miR-21與對應(yīng)腫瘤組織miR-21呈正相關(guān)(rho=0.736, P＜0.001)。血漿miR-21水平與性別、年齡、病理類型、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、腫瘤部位無統(tǒng)計學(xué)相關(guān)性，但是Ⅱ期和Ⅲ期的miR-21水平較Ⅰ期有偏高的趨勢。鉑類藥物敏感組與耐藥組腫瘤組織miR-21相對表達量分別為1.32(95%CI：0.73～1.90)和4.06(95%CI：1.71～6.41)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.004)；鉑類藥物敏感組與耐藥組血漿miR-21相對表達量分別為5.25(95%CI：0.14～10.64)和5.82(95%，差異無統(tǒng)計學(xué)意義CI：2.27～9.37),差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.19)。伊立替康敏感組與耐藥組腫瘤組織miR-21相對表達量分別為1.09(95%CI：0.65～1.54)和4.94(95%CI：2.44～7.44)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.001)；伊立替康敏感組與耐藥組血漿miR-21相對表達量分別為1.86(95%CI：1.08～2.64)和12.42(95%CI：3.14～21.70)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.001)。結(jié)論：血漿循環(huán)miR-21與對應(yīng)腫瘤組織miR-21水平呈顯著正相關(guān)，在一定程度上能反映腫瘤組織miR-21的水平。血漿miR-21水平與新鮮胃癌組織對伊立替康的敏感性呈負相關(guān)，腫瘤組織miR-21水平與新鮮胃癌組織對伊立替康和鉑類藥物的敏感性呈負相關(guān)。

胃癌；三維微組織塊培養(yǎng)法；循環(huán)miR-21；鉑類；伊立替康

微小RNA(microRNA，miRNA)是一類長約19～24 nt的非編碼單鏈小RNA分子，在轉(zhuǎn)錄后通過降解mRNA或者抑制mRNA翻譯而調(diào)控蛋白的表達。miRNA調(diào)控細胞周期、分化等細胞基本功能，并參與調(diào)控生物體的生長發(fā)育及多種疾病發(fā)生、發(fā)展過程。研究發(fā)現(xiàn)，miRNA的表達譜具有明顯的組織特異性及階段特異性，腫瘤組織具有特殊的miRNA表達譜［1］。在腫瘤組織，紊亂的miRNA表達包括抑癌miRNA的下調(diào)與促癌miRNA的上調(diào)等，參與了腫瘤發(fā)生、發(fā)展［2］。

通過對腫瘤miRNA表達譜的研究發(fā)現(xiàn)，miR-21在多種腫瘤中高表達。miR-21是腫瘤領(lǐng)域研究最為成熟的小RNA，被認為是oncomiR。胃癌相關(guān)研究也提示，miR-21在胃癌組織不僅表達較正常組織升高，同時也是預(yù)后的指標之一［3-4］。在藥物敏感性方面，腫瘤組織和細胞中的miR-21先后被證實與腫瘤對健擇、紫杉類、蒽環(huán)類和氟尿嘧啶類等藥物敏感性有關(guān)［5-6］，miR-21高表達提示腫瘤對多種化療藥物不敏感。大樣本研究提示，腫瘤組織miR-21高表達結(jié)腸腺癌患者從化療獲益可能性較?。?］。

近年來的研究也證實腫瘤患者與健康人群循環(huán)miRNA表達譜不同。這為循環(huán)miRNA作為無創(chuàng)性診斷和預(yù)后的腫瘤標志物提供了依據(jù)。循環(huán)腫瘤相關(guān)miRNA在血液中的狀態(tài)包括游離miRNA、外泌小體exosomes、微囊(microvesicles，MVs)，并在一定程度上能反映腫瘤的信息。2010年，日本學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)胃癌患者循環(huán)miR-21表達顯著升高(P=0.006)［8］，循環(huán)miR-21在胃癌中具有腫瘤指標的潛在價值。

因此，本研究以胃癌患者組織和循環(huán)miR-21作為主要研究對象，同步分析循環(huán)miR-21和對應(yīng)胃癌組織中miR-21之間的相關(guān)性，并初步分析胃癌組織和循環(huán)miR-21與胃癌新鮮組織對鉑類藥物和伊立替康敏感性之間的關(guān)系，為循環(huán)miR-21作為藥物敏感性預(yù)測生物標志提供初步理論依據(jù)。

1 資料和方法

1.1 研究對象

收集2011年1月—2011年12月在南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院普外科手術(shù)切除的新鮮胃癌標本(35例)和對應(yīng)術(shù)前血樣(35例)共70份，腫瘤經(jīng)病理確診為胃癌。具體收集方法為：①從手術(shù)室取得新鮮胃癌標本，并將腫瘤組織分為2部分，一部分置入含有100 U/mL青霉素和100 U/mL鏈霉素的0.9%NaCl溶液中，另一部分置入4%的中性甲醛溶液中。在4 ℃條件下，30 min內(nèi)將標本送至實驗室并立即進行體外藥敏實驗；用4%的甲醛溶液固定標本24 h后，按常規(guī)石蠟包埋技術(shù)進行胃癌石蠟標本的制作，用于病理學(xué)觀察和miR-21基因檢測。②麻醉前采集新鮮血樣4 mL，置于紫色抗凝管中。將標本放入冰盒中盡快運到腫瘤實驗室。二步離心法分離血漿，加入TRIzol LS，-80 ℃保存，用于后續(xù)循環(huán)miR-21基因檢測。

1.2 新鮮胃癌組織藥物敏感實驗

采用Furukawa等［9］創(chuàng)建的模擬體內(nèi)實體瘤生長情況的三維微組織塊培養(yǎng)法(histoculture drug response assay，HDRA)對新鮮胃癌組織進行藥物敏感實驗。藥物測試濃度(test drugconcentration，TDC)參考其在人體內(nèi)的血漿峰濃度設(shè)定：鉑類濃度為20 μg/mL［10］，伊立替康濃度為20 μg/mL［10］。每個標本加入不同受試藥物設(shè)有8個復(fù)孔和8個對照孔。藥物對腫瘤組織的抑制率=(1-T/C)×100%，其中T為實驗組每克腫瘤組織的A540nm，C為對照組每克腫瘤組織的A540nm。定義每種受試藥物8孔抑制率的平均值為該藥的最終抑制率。以抑制率的平均值作為敏感組與耐藥組分界點，鉑類抑制率＞52.02%定義為敏感，≤52.02%定義為耐藥；伊立替康抑制率＞47.67%定義為敏感，≤47.67%定義為耐藥。

1.3 胃癌石蠟標本miRNA的提取及逆轉(zhuǎn)錄

將4%的甲醛溶液固定后的胃癌標本按常規(guī)石蠟包埋技術(shù)進行腫瘤石蠟標本的制作。每個標本切取7 μm厚度的石蠟切片7張，行常規(guī)HE染色，在高倍顯微鏡下圈劃出腫瘤細胞區(qū)域，確保腫瘤細胞占80%以上。刮取圈定的腫瘤細胞入600 μL的無酶離心管中，加入200 μL的裂解液(10 mmol/L Tris/HCl，0.1 mmol/L EDTA，2%SDS)，60 ℃過夜。加入20 mg/L蛋白酶K，60 ℃，震蕩15 min；300 μL酚：氯仿(V∶V=6∶1)抽提；等體積異丙醇和3 mol/L醋酸鈉沉淀；70%乙醇洗滌RNA；空氣干燥后，加無RNA酶水溶解；取1 μL在核算定量儀上進行定量后，將剩余RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA(采用ABI公司的TaqMan MicroRNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒進行逆轉(zhuǎn)錄，具體步驟見說明書)。RNA提取與逆轉(zhuǎn)錄均設(shè)有陽性及陰性對照。

1.4 血漿miR-21的提取及逆轉(zhuǎn)錄

血漿和TRIzol LS的混合體系用力震蕩均勻后，室溫靜置15 min，加入1/5體積的氯仿抽提，兩倍體積異丙醇和3 mol/L醋酸鈉沉淀；用70%乙醇洗滌RNA；空氣干燥后，加入無RNA酶水溶解；取1 μL在核酸定量儀上進行定量后，將剩余RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA(采用ABI公司的TaqMan MicroRNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒進行逆轉(zhuǎn)錄，具體步驟見說明書)。RNA提取與逆轉(zhuǎn)錄均設(shè)有陽性及陰性對照。

1.5 實時熒光定量RT-PCR進行miR-21定量

PCR反應(yīng)體系總體積為12.5 μL，含cDNA 2.5 μL，Taqman Universal Master MixⅡ(ABI產(chǎn)品號：4440038) 6.25 μL，引物和探針Mix 0.625 μL，用滅菌雙蒸水定容至12.5 μL。在ABI7900型實時熒光定量PCR儀上進行檢測，PCR循環(huán)參數(shù)為：50 ℃，2 min；95 ℃預(yù)變性10 min，95 ℃變性15 s、60 ℃退火、延伸60 s，共40個循環(huán)，分析其Ct值。每個樣本、每個基因設(shè)有3個復(fù)孔，以U6為內(nèi)參，以商品化的陽性對照作為校正(calibrator)，以滅菌雙蒸水為陰性對照。MiR-21和U6引物和探針均購自ABI公司(序列號如下：miR-21：ABI000387； U6；001093)。采用2-△△Ct公式計算miR-21相對表達量［11］。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 16.0 (SPSS Inc，Chicago，Illinois，USA)統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析。使用Mann-Whitney U檢驗比較患者不同性別、年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與鉑類藥物、伊立替康抑制率、腫瘤miR-21、循環(huán)miR-21水平的相關(guān)性，使用Kruskal-Wallis H檢驗比較患者不同病理類型、分化程度、腫瘤部位、TNM分期與鉑類藥物、伊立替康抑制率、腫瘤miR-21、循環(huán)miR-21水平的相關(guān)性。采用Student-t檢驗(方差齊性)和Mann-Whitney U檢驗(方差非齊性)分析鉑類和伊立替康敏感組與耐藥組的miR-21水平的差異。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 患者資料

35例患者平均年齡為63歲，年齡范圍32～80歲，其中男性28例(80%)，女性7例(20%)。病理類型以胃腺癌為主，共29例(83%)；中分化7例(20%)，低分化16例(46%)，中低分化12例(34%)。26例(74%)有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。Ⅰ、Ⅱ期患者分別為4例(11%)和8例(23%)，Ⅲ期患者為23例(66%)，無Ⅳ期患者。具體臨床病例參數(shù)(表1)。

2.2 35例新鮮胃癌組織的鉑類和伊立替康的藥敏結(jié)果

鉑類藥物平均抑制率為52.02%(11.25%～86.23%)，伊立替康平均抑制率為47.67% (2.34%～89.42%)。新鮮腫瘤組織對鉑類藥物的敏感性均與年齡(P=0.59)、性別(P=0.18)、病理類型(P=0.87)、分化程度(P=0.12)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.05)、腫瘤部位(P=0.05)無顯著相關(guān)性，但與腫瘤TNM分期相關(guān)(P=0.01)，分期越早對鉑類藥物越敏感(54.25% vs 41.01% vs 38.93%)。新鮮腫瘤組織對伊立替康的藥物敏感性均與年齡(P=0.86)、性別(P=0.34)、病理類型(P=0.57)、分化程度(P=0.30)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.32)、腫瘤部位(P=0.51)、TNM分期(P=0.28)無顯著相關(guān)性。

2.3 腫瘤石蠟組織miR-21定量

35例標本的石蠟組織中均成功檢測出miR-21表達。miR-21相對于內(nèi)參U6的平均表達量為2.41(0.01～16.12)，且與性別、年齡、病理類型、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、腫瘤部位無顯著相關(guān)性(表1)。但是Ⅱ期和Ⅲ期的miR-21水平較Ⅰ期有偏高的趨勢。

2.4 血漿miR-21定量

35例標本的血漿中均成功檢測出miR-21表達。miR-21相對于內(nèi)參U6的平均表達量為5.48(0.03～52.41)，且血漿miR-21與對應(yīng)腫瘤組織miR-21呈正相關(guān)(rho=0.736, P＜0.001，圖1)。血漿miR-21水平與性別、年齡、病理類型、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、腫瘤部位無顯著相關(guān)性(表1)，但是Ⅱ期和Ⅲ期的miR-21水平較Ⅰ期有偏高的趨勢。

表 1 35 例患者臨床病理參數(shù)與miR-21水平關(guān)系Tab. 1 The expression of miR-21 and clinical characteristics

2.5 血漿和腫瘤組織miR-21水平與新鮮胃癌組織對鉑類藥物和伊立替康敏感性關(guān)系

按照所劃分的界限，鉑類藥物敏感組為21例，耐藥組為14例；伊立替康敏感組為23例，耐藥組為12例。鉑類藥物敏感組與耐藥組腫瘤組織miR-21相對表達量分別為1.32(95% CI：0.73～1.90)和4.06(95%CI：1.71～6.41) (P=0.004，圖2A)；鉑類藥物敏感組與耐藥組血漿miR-21相對表達量分別為5.25(95%CI：0.14～10.64)和5.82(95%CI：2.27～9.37) (P=0.19)。伊立替康敏感組與耐藥組腫瘤組織miR-21相對表達量分別為1.09(95%CI：0.65～1.54)和4.94(95%CI：2.44～7.44) (P＜0.001，圖2B)；伊立替康敏感組與耐藥組血漿miR-21相對表達量分別為1.86(95%CI：1.08～2.64)和12.42(95%CI：3.14～21.70) (P=0.001，圖2C)。血漿miR-21水平與新鮮胃癌組織對伊立替康的敏感性呈負相關(guān)，腫瘤組織miR-21水平與新鮮胃癌組織對伊立替康和鉑類藥物的敏感性呈負相關(guān)。

圖 1 血漿miR-21與對應(yīng)腫瘤組織miR-21表達水平呈正相關(guān)Fig. 1 Circulating miR-21 was positively correlated with tumor miR-21 in corresponding samples

圖 2 腫瘤組織和血漿miR-21水平與新鮮胃癌組織對鉑類藥物和伊立替康敏感性關(guān)系Fig. 2 The expression of tumor and circulating miR-21 and the chemosensitivity of platinum and irinotecan

3 討 論

分子標志指導(dǎo)下的個體化療是當前惡性腫瘤藥物治療的主流方向［12］。由于腫瘤進展及治療過程中新的遺傳學(xué)、表觀遺傳學(xué)等的改變將使惡性腫瘤生物學(xué)發(fā)生變化，從而使得藥物敏感性改變，導(dǎo)致腫瘤治療的困難性增加。實時檢測個體化化療相關(guān)標志并據(jù)此選擇化療方案是未來個體化療研究方向。循環(huán)miRNA是外周血腫瘤標志物新秀，能夠用于腫瘤診斷與預(yù)后，但是作為藥物療效預(yù)測指標鮮有相關(guān)報道。本項目選擇在腫瘤研究領(lǐng)域較為公認的具有診斷、預(yù)后價值并與化療預(yù)后相關(guān)的miR-21，通過同步分析循環(huán)miR-21與對應(yīng)腫瘤組織miR-21之間的相關(guān)性，初步探討循環(huán)miR-21與胃癌鉑類藥物和伊立替康藥物敏感性的相關(guān)性。

目前對腫瘤miRNA表達譜的研究發(fā)現(xiàn)，miR-21在多種腫瘤中高表達，包括乳腺癌、膠質(zhì)瘤、前列腺癌、肝細胞癌、胃癌和腸癌等，而且在腫瘤組織的研究中發(fā)現(xiàn)，高表達miR-21提示腫瘤對多種化療藥物不敏感。本研究也發(fā)現(xiàn)，腫瘤組織中miR-21高表達的標本出現(xiàn)鉑類藥物和伊立替康的抵抗。其潛在機制可能為miR-21能夠負性調(diào)控PTEN、PDCD4和hMSH2等抑癌基因的表達，從而調(diào)控細胞周期以及增殖相關(guān)信號通路，并能促進細胞遷移；miR-21能夠下調(diào)Cdc25A，負性調(diào)控細胞周期G1/S期轉(zhuǎn)變，并且參與了DNA損傷修復(fù)相關(guān)的G2/M期檢查點19，從而表現(xiàn)為對引起DNA損傷的藥物抵抗。潛在具體機制正在進一步研究中。

在臨床實踐操作中，很多腫瘤在確診時已經(jīng)無法接受手術(shù)治療，無法獲得腫瘤標本。穿刺活檢雖能提供部分標本，但獲得的腫瘤組織量少，要確保待檢標本為腫瘤細胞占70%以上，有一定難度。同時穿刺活檢雖然創(chuàng)傷性較手術(shù)小，也存在出血及組織損傷等風(fēng)險，因而難以多次反復(fù)進行，不適合作為實時個體化療待測標本。血液標本簡便易獲取，是臨床最常用的標本。循環(huán)腫瘤細胞、血清和血漿均攜帶腫瘤組織信息，并可實時獲取，為實時個體化檢測提供了新的檢測來源。Lawrie等［13］首次采用熒光定量PCR的方法發(fā)現(xiàn)大B細胞淋巴瘤患者血清miR-21、miR-155和miR-210表達水平上升。Mitchell等［14］與Chen等［15］分別對循環(huán)miRNA進行了系統(tǒng)的研究發(fā)現(xiàn)循環(huán)miRNA普遍存在于健康個體與腫瘤患者，但表達譜不同，采用熒光定量PCR檢測能在血清或血漿中對miRNA進行定量研究，為循環(huán)miRNA作為診斷和預(yù)后的無創(chuàng)性腫瘤標志物提供了依據(jù)。本研究通過腫瘤標本和外周血樣品的同步比較，證實miR-21在外周血和對應(yīng)腫瘤組織中的表達水平呈顯著正相關(guān)，在一定程度上能反映腫瘤組織的信息。這為腫瘤標本不足的患者提供了新的檢測來源。

目前循環(huán)miRNA在腫瘤診斷和預(yù)后判斷方面已顯示出卓越的敏感性及特異性，如血漿miR-106a/let-7a表達比值在胃癌診斷中受試者工作特征曲線(ROC)下面積高達0.879［8］。Ng等［16］的研究結(jié)果提示，大腸癌患者miR-92 ROC曲線下面積為0.885(敏感度為89%，特異度為70%)，另一項研究聯(lián)合miR-29a與miR-92a在腸癌診斷中ROC曲線下面積達0.883(敏感度為83.0%，特異度為84.7%)［17］。Hu等［18］發(fā)現(xiàn)血清miR-486、miR-30d、miR-1和miR-499表達水平是肺癌患者預(yù)后指標。然而在循環(huán)miRNA與藥物敏感性方面，除小樣本研究報道發(fā)現(xiàn)miR-21在多西他賽耐藥的患者血清表達較高外(n=10，P=0.032)，未見循環(huán)miRNA與化療藥物敏感性的相關(guān)報道。本研究首次證實循環(huán)miR-21與對應(yīng)腫瘤組織miR-21水平呈顯著正相關(guān)；胃癌組織中miR-21在伊立替康耐藥和鉑類藥物耐藥的患者中表達顯著偏高，循環(huán)miR-21在胃癌伊立替康耐藥的患者血漿中表達顯著偏高，與伊立替康敏感性呈負相關(guān)。這為后續(xù)大樣本臨床研究的開展提供了客觀的理論依據(jù)。當然，本研究未能證實循環(huán)miR-21在胃癌鉑類耐藥的患者血漿中表達顯著偏高，這可能是由于血漿中存在的干擾因素較多，比如淋巴細胞分泌miRNA對腫瘤來源的miRNA的干擾、血液的稀釋以及血漿miRNA的降解等。此外，本研究只是小樣本初步探索，未能充分證實血漿miR-21與鉑類藥物敏感性的關(guān)系。

綜上所述，本研究初步證實循環(huán)miR-21與對應(yīng)腫瘤組織miR-21水平呈顯著正相關(guān)，循環(huán)miR-21水平與新鮮胃癌組織對伊立替康敏感性呈負相關(guān)，miR-21在胃癌個體化治療中具有潛在指導(dǎo)價值。

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Circulating and tumor miR-21 could predict irinotecan sensitivity in gastric cancer

XU Deng-cheng1,2, LIU Bao-rui2, SHEN Jie2(1. Department of Internal Medicine, The people’s Liberation Army 452thHospital , Chengdu Sichuan 610021, China; 2. Cancer Center, Drum Tower Hospital of Nanjing University, Nanjing Jiangsu 210008, China)

SHEN Jie E-mail: shenjie2008nju@163.com

Background and purpose: Mir-21 has been demonstrated high expressed in many kinds of tumor tissues and cell lines. High expressed miR-21 leads to chemoresistance. Circulating miRNA is a novel biomarker for chemosensitivity prediction. The aim of our study was to investigate the role of plasma and tumor miR-21 levels as predictive biomarkers for irinotecan in gastric cancer. Methods: The histoculture drug response assay (HDRA) was used to determine irinotecan and cisplatin sensitivity on 35 freshly removed gastric tumor specimens. miR-21 expressions in tumor and plasma were determined by quantitative reverse transcription polymerase chain reaction. Results: Plasma miR-21 was closely correlated with corresponding miR-21 mRNA level in tumor tissues (rho=0.736, P＜0.001) and was not correlated with sex, age, pathology type, differentiation, lymph node metastasis, TNM stage or tumor location. Patients with stage Ⅱ-Ⅲ had higher miR-21 levels. The tumor miR-21 expressions in cisplatinsensitive group and resistant group were 1.32 (95%CI: 0.73-1.90) and 4.06 (95%CI: 1.71-6.41)(P=0.004), respectively. The plasma miR-21 expressions in cisplatin-sensitive group and resistant group were 5.25 (95% CI: 0.14-10.64) and5.82 (95%CI: 2.27-9.37)(P=0.19). The tumor miR-21 expressions in irinotecan-sensitive group and resistant group were 1.09 (95%CI: 0.65-1.54) and 4.94 (95%CI: 2.44-7.44)(P＜0.001), respectively. The plasma miR-21 expressions in irinotecan-sensitive group and resistant group were 1.86 (95%CI: 1.08-2.64) and 12.42 (95%CI: 3.14-21.70)(P=0.001). Conclusion: A significant correlation was observed between plasma and tumor miR-21 level. The low plasma miR-21 level could benefit from treatment with irinotecan. And low tumor miR-21 expression correlated with increased irinotecan and cisplatin response rate.

Gastric cancer; Histoculture drug response assay; Circulating miR-21; Cisplatin; Irinotecan

10.3969/j.issn.1007-3969.2013.09.009

R735.2

：A

：1007-3639(2013)09-0744-07

2013-07-02

2013-08-20）

沈潔 E-mail:shenjie2008nju@163.com