• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    新輔助化療對乳腺癌組織因子、基質(zhì)金屬蛋白酶-9和蛋白酶激活受體-2的表達及療效的影響

    2013-06-09 15:37:51
    中國癌癥雜志 2013年3期
    關(guān)鍵詞:蛋白酶陰性輔助

    北京大學(xué)第一醫(yī)院乳腺疾病中心,北京 100034

    新輔助化療對乳腺癌組織因子、基質(zhì)金屬蛋白酶-9和蛋白酶激活受體-2的表達及療效的影響

    趙建新 林增茂 段學(xué)寧 劉蔭華

    北京大學(xué)第一醫(yī)院乳腺疾病中心,北京 100034

    背景與目的:組織因子(tissue factor,TF)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)是影響乳腺癌轉(zhuǎn)移和預(yù)后的重要因子,蛋白酶激活受體-2(proteinase activated receptor-2,PAR-2)是二者之間的介導(dǎo)因子。本研究旨在探討乳腺癌組織中TF、PAR-2和MMP-9表達的變化與乳腺癌新輔助化療療效的關(guān)系。方法:應(yīng)用二步法免疫組織化學(xué)方法檢測85例乳腺癌新輔助化療前后乳腺癌組織中TF、PAR-2和MMP-9的表達,分析新輔助化療前后其表達的變化與新輔助化療療效的關(guān)系。結(jié)果:85例乳腺癌新輔助化療患者病理完全緩解率(G5)為8.3%,其他患者在新輔助化療后TF、PAR-2和MMP-9陽性率均降低,其中MMP-9顯著降低(P<0.05)。新輔助化療后,MMP-9表達陽性減弱的患者病理療效顯著好于陽性增強者(P<0.05);TF、MMP-9由陽性轉(zhuǎn)為陰性患者的病理療效顯著好于由陰性轉(zhuǎn)為陽性患者(P<0.05)。PAR-2的改變則與病理療效無顯著關(guān)系。結(jié)論:乳腺癌新輔助化療后TF、MMP-9的陽性表達降低與病理緩解率相關(guān),有助于判斷新輔助化療療效。

    乳腺癌;組織因子;蛋白酶激活受體-2;基質(zhì)金屬蛋白酶-9;新輔助化療

    新輔助化療是乳腺癌全身治療的重要組成部分,新輔助化療前后細胞因子的變化可能對患者的治療和預(yù)后產(chǎn)生影響。組織因子(tissue factor,TF)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)是影響乳腺癌轉(zhuǎn)移和預(yù)后的重要因子,蛋白酶激活受體-2(proteinase activated receptor-2,PAR-2)是二者之間的介導(dǎo)因子。因此,本研究旨在探討乳腺癌組織中TF、PAR-2和MMP-9的表達變化與乳腺癌新輔助化療療效的關(guān)系。

    1 材料和方法

    1.1 研究對象

    2008年1月1日—12月31日北京大學(xué)第一醫(yī)院普通外科收治的經(jīng)空心針穿刺活檢病理診斷為乳腺癌的85例行新輔助化療患者,年齡29~71歲,臨床TNM分期:Ⅱ期59例,Ⅲ期26例,化療方案為TE:多西他賽75 mg/m2,表柔比星75 mg/m2,每3周1次,化療2~4個周期后手術(shù),術(shù)后標本由同1位病理醫(yī)師閱片。術(shù)前病理分型:浸潤性導(dǎo)管癌(非特殊型)79例,其他類型6例(浸潤性小葉癌4例,浸潤性篩狀癌1例,黏液癌1例)。組織學(xué)分級:1級23例,2級28例,3級34例。所有標本經(jīng)4%甲醛溶液固定,石蠟包埋,連續(xù)切片,片厚4 μm。

    1.2 TF、PAR-2和MMP-9蛋白檢測方法及結(jié)果判定

    1.2.1 主要試劑

    第一抗體:小鼠抗人TF單克隆抗體購自Abcam公司(1:100),小鼠抗人MMP-9單克隆抗體和小鼠抗人PAR-2單克隆抗體均購自Santa Cruz公司。第二抗體:辣根酶標記山羊抗小鼠IgG 購自北京中杉金橋生物技術(shù)公司,PV9000免疫組化二步法試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)公司。

    1.2.2 免疫組化染色

    標本經(jīng)4%甲醛溶液固定,常規(guī)脫水,石蠟包埋,連續(xù)切片,切片厚度為4 μm,60 ℃烤片7 h以上后行免疫組化染色。

    采用二步法檢測TF、PAR-2和MMP-9蛋白的表達,按照試劑盒說明書操作。二甲苯脫蠟,梯度酒精水化,微波抗原修復(fù),依次用第一抗體(TF一抗1:100、PAR-2一抗1:100、MMP-9一抗1:200)和第二抗體溫育,PBS洗片后DAB染色,Mayer氏蘇木素復(fù)染后封片。正常人肝臟組織(TF高表達)和正常人心肌組織(PAR-2、MMP-9高表達)為陽性對照,PBS替代第一抗體作為陰性對照。

    1.2.3 結(jié)果判定

    陽性評判標準參照文獻[1-2]的方法:每例觀察10個高倍鏡視野,連續(xù)計數(shù)不少于1 000個細胞,以腫瘤細胞的細胞質(zhì)(MMP-9)或細胞膜(TF和PAR-2)呈現(xiàn)棕黃色為陽性;陽性細胞數(shù)<10%為陰性,≥10%為陽性,按照陽性細胞數(shù)的多少量化為1+(10%),2+(30%),3+(70%)?;熀箨栃约毎麛?shù)減少(或增多)稱陽性減弱(或陽性增強),即量變,其中由陽性轉(zhuǎn)為陰性或由陰性轉(zhuǎn)為陽性為質(zhì)變。

    1.3 新輔助化療病理療效評價

    患者在新輔助化療后接受全乳房切除術(shù)或保乳術(shù),病灶組織根據(jù)病理(Miller-Payne系統(tǒng))進行療效評價[3]。1級(G1):個別癌細胞有變化,但總數(shù)未減少;2級(G2):<30%癌細胞退變;3級(G3):30%~90%的癌細胞退變;4級(G4):>90%的癌細胞退變;5級(G5):未見浸潤癌細胞,可出現(xiàn)導(dǎo)管原位癌。G1和G2為未顯效,G3和G4為有效,G5為達到病理完全緩解。

    1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

    采用SPSS 13.0軟件進行數(shù)據(jù)分析,通過χ2檢驗判斷化療前后TF、PAR-2和MMP-9的表達變化及其與化療療效的關(guān)系,P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié) 果

    2.1 病理療效

    85例患者新輔助化療后,病理療效評價為G1為15例(17.6%),G2為15例(17.6%),G3為14例(16.5%),G4為34例(40.0%),G5為7例(8.3%)。未顯效(G1+G2)占35.29%,有效(G3+G4)占56.47%。

    2.2 G5組患者的新輔助化療前TF、PAR-2和MMP-9蛋白表達情況

    因G5病理完全緩解的標本無法進行腫瘤細胞的免疫組化染色,因此將這部分患者化療前免疫組化染色結(jié)果進行歸納(表1)。

    2.3 新輔助化療前后TF、PAR-2和MMP-9蛋白表達情況變化

    新輔助化療前后TF、PAR-2和MMP-9陽性率均降低(圖1~3),其中MMP-9表達減少具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),3者的陽性表達量變和質(zhì)變的情況見表2。

    2.4 新輔助化療前后TF、PAR-2和MMP-9的表達變化與化療療效的關(guān)系

    新輔助化療后MMP-9表達陽性減弱的患者病理療效顯著好于陽性增強者(P=0.04);TF和MMP-9由陽性轉(zhuǎn)為陰性的患者病理療效顯著好于由陰性轉(zhuǎn)為陽性患者(P<0.05),PAR-2的變化與化療療效無關(guān)(表3~5)。

    表 1 達到病理完全緩解患者資料Tab. 1 The data of the pCR patients

    表 2 新輔助化療前后TF、PAR-2和MMP-9蛋白表達變化Tab. 2 The change of TF, PAR-2 and MMP-9 expression pre and post neoadjuvant chemotherapy

    圖 1 乳腺癌新輔助治療前后TF、PAR-2和MMP-9的表達情況Fig. 1 The expression of TF, PAR-2 and MMP-9 pre and post-chemotherapy (EnVision, ×400)

    表 3 TF的表達與化療療效的關(guān)系Tab. 3 The relation between TF and chemotherapeutic response

    表 4 PAR-2的表達與化療療效的關(guān)系Tab. 4 The relation between PAR-2 and chemotherapeutic response

    表 5 MMP-9的表達與化療療效的關(guān)系Tab. 5 The relation between MMP-9 and chemotherapeutic response

    3 討 論

    新輔助化療已成為治療局部晚期乳腺癌患者的方法之一,具有早期全身治療、降低腫瘤分期、提高手術(shù)切除率和保乳率、術(shù)前體內(nèi)藥敏試驗、選擇個體化治療等優(yōu)點。新輔助化療的療效評估主要通過臨床體檢、影像學(xué)[4]和病理學(xué)檢查完成,其中金標準是病理檢查,免疫組化因子的變化在療效評估中的作用尚不明確。

    TF和MMP-9可能通過影響腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移和血管生成等對化療的療效產(chǎn)生影響。在乳腺癌組織中兩者的陽性表達率可達40%以上[5]。Ueno等[6]研究表明,TF在乳腺癌中的表達可作為生存的獨立預(yù)后因素,對評價乳腺癌患者的遠處轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)提供有效的前瞻性價值。Giannelli等[7]研究發(fā)現(xiàn),乳腺癌術(shù)后血清中MMP-9 的活性較術(shù)前顯著降低。MMP-9活性水平可作為術(shù)后重要的隨訪資料,王新友等[8]的研究也發(fā)現(xiàn),血清MMP-9的活性水平與新輔助化療的療效顯著相關(guān)。湯堅強等[9]認為,在人白血病細胞中TF可通過PARs調(diào)控MMPs的表達,PAR-2可能是TF激活MMP-9分泌的重要介導(dǎo)因子。因此,新輔助化療對三者的作用可能影響患者的預(yù)后和療效評估。

    本研究主要通過化療后腫瘤細胞密度和數(shù)量減低來評價療效,其中有7例患者達到G5,這些患者化療前TF、MMP-9、PAR-2的表達沒有顯示有規(guī)律性。新輔助化療不僅使得患者的腫瘤細胞數(shù)量和密度發(fā)生變化,也使得細胞的分子標志物的表達發(fā)生改變,其中,化療后MMP-9陽性表達率顯著降低,而TF、PAR-2的陽性表達也有所減少。這可能由于MMP-9是TF和PAR-2激活后的效應(yīng)因子,因此表達的降低更明顯。新輔助化療后TF、PAR-2和MMP-9發(fā)生量變的患者占全部患者的40%,發(fā)生質(zhì)變的患者占20%。蛋白表達的變化可能導(dǎo)致腫瘤對化療藥物耐藥,從而影響療效。研究結(jié)果還顯示,新輔助化療后MMP-9表達陽性減弱的患者療效顯著好于陽性增強者,TF和MMP-9由陽性轉(zhuǎn)為陰性的患者療效顯著好于由陰性轉(zhuǎn)為陽性患者,表明化療后出現(xiàn)TF、MMP-9的表達減少可能預(yù)示療效較好;而PAR-2表達與患者療效無關(guān),這可能與PAR-2的表達陽性率較高有關(guān),且PAR-2為多種信號通路蛋白,可能被其他蛋白影響,因此敏感性不高。部分患者在新輔助化療后TF、MMP-9表達由陰性轉(zhuǎn)為陽性,且多為療效較差患者,提示化療可能誘導(dǎo)TF和MMP-9表達增強,也可能與化療藥物耐藥有關(guān)。

    因此,新輔助化療可使TF、MMP-9和PAR-2的陽性表達下降,三者的變化將有助于判斷新輔助化療的療效。

    [1] CONTRINO J, HAIR G, KREUTZER D L, et al. In situ detection of tissue factor in vascular endothelial cells: correlation with the malignant phenotype of human breast disease[J]. Nat Med, 1996, 2: 209-215.

    [2] BARTSCH J E, STAREN E D, APPERT H E. Matrix metalloproteinase expression in breast cancer[J]. J Surg Res, 2003, 110 (2): 383-392.

    [3] OGSTON KN, MILLER I D, PAYNE S, et al. A new histological grading system to assess response of breast cancers to primary chemotherapy: prognostic significance and survival[J]. Breast, 2003, 12: 320-327.

    [4] DUCH J, FUSTER D, MU?OZ M, et al. 18F-FDG PET/CT for early prediction of response to neoadjuvant chemotherapy in breast cancer[J]. Eur J Nucl Med Mol Imaging, 2009, 36(10):1551-1557.

    [5] 趙建新, 林增茂, 姚宏偉, 等,組織因子和基質(zhì)金屬蛋白酶-9在乳腺癌中的表達與預(yù)后分析[J].中國腫瘤臨床, 2008, 1(35): 22-25.

    [6] UENO T, TOI M, KOIKE M , et al. Tissue factor expression in breast cancer tissues : its correlation with prognosis and plasma concentration[J] . Br J Cancer, 2000, 83(2): 164.

    [7] GIANNELLI G, ERRIQUEZ R, FRANSVEA E, et al. Proteolytic imbalance is reversed after therapeutic surgery in breast cancer patients[J]. Int J Cancer, 2005, 116(6): 1000-1001.

    [8] 王新友,王嶺,陳江浩, 等,CEF 方案新輔助化療對乳腺癌患者血漿基質(zhì)金屬蛋白酶- 2, -9活性的影響[J].中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志, 2006, 16(18): 2741-2743.

    [9] 湯堅強, 萬遠廉, 劉玉村, 等,組織因子促進人類大腸癌細胞的侵襲及與基質(zhì)金屬蛋白酶類的相關(guān)性研究[J].北京大學(xué)學(xué)報, 2005, 3(37): 265-268.

    The impact of neoadjuvant chemotherapy on the expression of tissue factor, protease activated receptor-2 and matrix metalloproteinase-9

    ZHAO Jian-xin, LIN Zeng-mao, DUAN Xue-ning, LIU Yinhua (Breast Disease Centre, Peking University First Hospital, Beijing 100034, China)

    ZHAO Jian-xin E-mail: zjxcn@yahoo.com.cn

    Background and purpose: TF and MMP-9 are important factors for prognosis and metastasis of breast cancer, PAR-2 is the mediate factor of them, this study aimed to evaluate the change of expressions of TF PAR-2 and MMP-9 in breast cancer patients after neoadjuvant chemotherapy and their correlations with pathologic response. Methods: The expressions of TF, PAR-2 and MMP-9 in 85 breast cancer tissues were examined by immunohistochemical technique (SP) before and after neoadjuvant chemotherapy. Correlation analysis were made between the change of expressions and pathologic response. Results: The strictly pathologic completely response rate (G5) was 8.3% in 85 breast cancer patients after neoadjuvant chemotherapy. The decrease of expression of MMP-9 after neoadjuvant chemotherapy was statistically significant correlations with pathological response (P<0.05). The expression changes of TF and MMP-9 from positive to negative was statistically significant correlated with tumor pathological response(P<0.05). The expression change of PAR-2 showed rarely significant (P>0.05). Conclusion: The decrease of expression of TF and MMP-9 after neoadjuvant chemotherapy have statistically significant correlations with pathological response, would be probably useful for estimating the effect of neoadjuvant chemotherapy.

    Breast cancer; TF; PAR-2; MMP-9; Neoadjuvant chemotherapy

    10.3969/j.issn.1007-3969.2013.03.007

    R737.9

    :A

    :1007-3639(2013)03-0195-05

    2012-10-10

    2013-02-24)

    歡迎訂閱《臨床腫瘤學(xué)雜志》

    趙建新 E-mail:zjxcn@yahoo.com.cn

    《臨床腫瘤學(xué)雜志》是由國家新聞出版總署和解放軍總政治部批準創(chuàng)辦的腫瘤專業(yè)高級學(xué)術(shù)期刊,是中國科技論文統(tǒng)計源期刊(中國科技核心期刊)、中國生物醫(yī)學(xué)核心期刊和CSCO團體會員期刊,已被“萬方數(shù)據(jù)-數(shù)字化期刊群”、“中國核心期刊(遴選)數(shù)據(jù)庫”、“中國學(xué)術(shù)期刊綜合評價數(shù)據(jù)庫(CAJCED)”、“中國期刊全文數(shù)據(jù)庫(CJFD)”、“中文科技期刊數(shù)據(jù)庫”、“中文生物醫(yī)學(xué)期刊文獻/會議論文數(shù)據(jù)庫”等多家數(shù)據(jù)庫收錄,還被國際著名的檢索系統(tǒng)美國《化學(xué)文摘》(Chemical Abstracts,CA)、《烏利希國際期刊指南》(Ulrich’s International Periodicals Directory)及波蘭《哥白尼索引》(Index Copernius, IC)收錄。

    本刊為月刊,大16開本,96頁,激光照排,隨文插放彩圖,印刷裝幀精美,國內(nèi)外公開發(fā)行。標準刊號:ISSN 1009-0460,CN 32-1577/R,郵發(fā)代號:28-267(國內(nèi)),BM8600(國外)。每期定價10元(包括郵寄費),全年120元。全國各地郵局均可訂閱,漏訂者請直接匯款至南京市楊公井34標34號《臨床腫瘤學(xué)雜志》編輯部補訂。郵編:210002,電話:025-84400143、80864363,傳真:025-84400143,E-mail:lczlx@vip.163.com、lczlx@csco.org.cn。

    猜你喜歡
    蛋白酶陰性輔助
    小議靈活構(gòu)造輔助函數(shù)
    倒開水輔助裝置
    思鄉(xiāng)與蛋白酶
    文苑(2018年22期)2018-11-19 02:54:30
    鉬靶X線假陰性乳腺癌的MRI特征
    三陰性乳腺癌的臨床研究進展
    減壓輔助法制備PPDO
    多胚蛋白酶 高效養(yǎng)畜禽
    IgA蛋白酶在IgA腎病治療中的潛在價值
    提高車輛響應(yīng)的轉(zhuǎn)向輔助控制系統(tǒng)
    汽車文摘(2015年11期)2015-12-02 03:02:53
    hrHPV陽性TCT陰性的婦女2年后隨訪研究
    国产大屁股一区二区在线视频| 国内精品久久久久精免费| 欧美人与善性xxx| 人妻夜夜爽99麻豆av| 久久久久久久久大av| 日本免费a在线| 午夜爱爱视频在线播放| 全区人妻精品视频| 成人欧美大片| 又黄又爽又免费观看的视频| 一级黄色大片毛片| 成人鲁丝片一二三区免费| 99热精品在线国产| 日韩欧美 国产精品| 国产精品免费一区二区三区在线| 欧美另类亚洲清纯唯美| 国产探花极品一区二区| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 中文字幕熟女人妻在线| 午夜激情欧美在线| 欧美日韩国产亚洲二区| 亚洲精品亚洲一区二区| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 亚洲成人久久爱视频| 成人综合一区亚洲| 国产精品永久免费网站| 黄色日韩在线| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | av天堂中文字幕网| 久久中文看片网| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 老司机影院成人| 久久久久久久亚洲中文字幕| 五月玫瑰六月丁香| 午夜福利视频1000在线观看| 99国产极品粉嫩在线观看| 精品人妻偷拍中文字幕| 淫秽高清视频在线观看| 三级毛片av免费| 国产成人a区在线观看| h日本视频在线播放| 久久国产乱子免费精品| 女人被狂操c到高潮| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 婷婷色综合大香蕉| 一区二区三区免费毛片| 亚洲在线观看片| 免费观看在线日韩| 久久久久久久午夜电影| 久久精品国产亚洲网站| 伊人久久精品亚洲午夜| 色5月婷婷丁香| 久久久午夜欧美精品| 综合色av麻豆| 极品教师在线视频| 欧美不卡视频在线免费观看| 精品一区二区免费观看| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 国内精品一区二区在线观看| 草草在线视频免费看| 欧美zozozo另类| 精品日产1卡2卡| 少妇熟女aⅴ在线视频| 久久国产乱子免费精品| .国产精品久久| 麻豆乱淫一区二区| 91在线观看av| 国产成人一区二区在线| 亚洲国产精品合色在线| 日本成人三级电影网站| 亚洲国产精品合色在线| 大型黄色视频在线免费观看| 久久精品国产亚洲av天美| 看片在线看免费视频| 国产高潮美女av| 欧美精品国产亚洲| 午夜爱爱视频在线播放| 国产午夜精品论理片| 免费看a级黄色片| 国产精品精品国产色婷婷| 麻豆乱淫一区二区| 国产精品国产高清国产av| 看非洲黑人一级黄片| 日本在线视频免费播放| 你懂的网址亚洲精品在线观看 | 97热精品久久久久久| 免费av观看视频| 亚洲在线自拍视频| 精品久久久久久成人av| 99久久成人亚洲精品观看| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 在线国产一区二区在线| 在线观看免费视频日本深夜| 亚洲精品成人久久久久久| 久久中文看片网| 我要看日韩黄色一级片| 成人鲁丝片一二三区免费| 亚洲国产精品久久男人天堂| 国产高清不卡午夜福利| 天堂√8在线中文| 在线免费十八禁| 真人做人爱边吃奶动态| 国产精品无大码| 一级毛片久久久久久久久女| 日本黄大片高清| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 日韩亚洲欧美综合| 少妇的逼水好多| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| а√天堂www在线а√下载| 色av中文字幕| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 久久人人爽人人爽人人片va| 成年av动漫网址| 少妇的逼好多水| 久久久午夜欧美精品| 日韩欧美精品v在线| 日本精品一区二区三区蜜桃| 99久久无色码亚洲精品果冻| 精品欧美国产一区二区三| 久久精品国产亚洲网站| 直男gayav资源| 成人欧美大片| 亚洲av成人精品一区久久| 男女那种视频在线观看| 日韩在线高清观看一区二区三区| 国产视频一区二区在线看| 国产成年人精品一区二区| 国产男人的电影天堂91| 欧美性感艳星| 久久久色成人| 亚洲国产精品久久男人天堂| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 丰满人妻一区二区三区视频av| 校园人妻丝袜中文字幕| 嫩草影院新地址| 久久午夜亚洲精品久久| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 天堂影院成人在线观看| 久久久欧美国产精品| 精品一区二区三区av网在线观看| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 丰满乱子伦码专区| 国产欧美日韩精品亚洲av| 偷拍熟女少妇极品色| 久久99热6这里只有精品| 亚洲av成人精品一区久久| 特级一级黄色大片| 日韩av不卡免费在线播放| av中文乱码字幕在线| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 精品午夜福利视频在线观看一区| 最近最新中文字幕大全电影3| 国产精品永久免费网站| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 国产精品野战在线观看| 亚洲电影在线观看av| 人人妻人人澡欧美一区二区| 在线免费观看的www视频| av视频在线观看入口| 成人二区视频| 中文字幕av在线有码专区| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| avwww免费| 综合色丁香网| 免费在线观看成人毛片| 欧美一级a爱片免费观看看| 免费av不卡在线播放| eeuss影院久久| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 亚洲成人久久爱视频| 午夜精品一区二区三区免费看| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 看非洲黑人一级黄片| 校园人妻丝袜中文字幕| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 欧美日本亚洲视频在线播放| 久久人人爽人人片av| 伊人久久精品亚洲午夜| 午夜老司机福利剧场| 国产欧美日韩精品一区二区| 国产精品av视频在线免费观看| 亚洲欧美日韩高清专用| 白带黄色成豆腐渣| 综合色av麻豆| 丝袜喷水一区| 成年女人毛片免费观看观看9| 丰满乱子伦码专区| av黄色大香蕉| av在线观看视频网站免费| 少妇的逼好多水| 一级av片app| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 国产精品久久视频播放| 亚洲欧美成人精品一区二区| 亚洲自偷自拍三级| 99热这里只有精品一区| 午夜福利在线在线| 日本欧美国产在线视频| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 亚洲精品国产成人久久av| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 国产高潮美女av| 精品久久久噜噜| 精品一区二区三区人妻视频| 国产成人a∨麻豆精品| 99热精品在线国产| 国产精品一及| 老司机福利观看| 国产高潮美女av| 欧美zozozo另类| 99热精品在线国产| 国产精品一及| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 亚洲精品成人久久久久久| 日韩欧美精品v在线| 欧美最黄视频在线播放免费| 永久网站在线| 色吧在线观看| 欧美色视频一区免费| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 91久久精品电影网| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 成年免费大片在线观看| 丝袜喷水一区| 成人亚洲欧美一区二区av| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 特大巨黑吊av在线直播| 国产av一区在线观看免费| 国产成人a区在线观看| 亚洲国产高清在线一区二区三| 久久久久久久久大av| 听说在线观看完整版免费高清| 国产精品一区www在线观看| 欧美潮喷喷水| av福利片在线观看| 一进一出好大好爽视频| 97热精品久久久久久| 色尼玛亚洲综合影院| 婷婷精品国产亚洲av| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 插阴视频在线观看视频| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 亚洲欧美精品自产自拍| 亚洲精品国产成人久久av| 成熟少妇高潮喷水视频| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 亚洲av成人av| 欧美高清性xxxxhd video| 男人舔奶头视频| 性色avwww在线观看| 久久久久久久久久成人| 亚洲精品国产成人久久av| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 最新中文字幕久久久久| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 久久精品91蜜桃| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 搞女人的毛片| 国产精品精品国产色婷婷| 99热这里只有是精品50| 免费av毛片视频| 干丝袜人妻中文字幕| 九色成人免费人妻av| 别揉我奶头 嗯啊视频| 欧美日本亚洲视频在线播放| 一级黄片播放器| 久久精品91蜜桃| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 男人舔奶头视频| 国内精品宾馆在线| av.在线天堂| 欧美在线一区亚洲| 日本熟妇午夜| av在线观看视频网站免费| 伦理电影大哥的女人| 五月伊人婷婷丁香| 性插视频无遮挡在线免费观看| 亚洲国产精品成人久久小说 | 毛片一级片免费看久久久久| 久久人妻av系列| 男女啪啪激烈高潮av片| 在线免费十八禁| 国产熟女欧美一区二区| 亚洲五月天丁香| 国产成人freesex在线 | 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 欧美高清成人免费视频www| 日韩三级伦理在线观看| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 亚洲成人精品中文字幕电影| 色视频www国产| 22中文网久久字幕| 最近在线观看免费完整版| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 欧美成人a在线观看| av在线亚洲专区| 亚洲国产欧美人成| 国产精品电影一区二区三区| 床上黄色一级片| 久久人妻av系列| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 国产精品久久久久久久久免| 深夜a级毛片| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 国产极品精品免费视频能看的| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 日韩精品中文字幕看吧| 国产高清有码在线观看视频| 午夜精品一区二区三区免费看| 男女下面进入的视频免费午夜| 啦啦啦啦在线视频资源| 婷婷精品国产亚洲av在线| 麻豆成人午夜福利视频| 国产精品综合久久久久久久免费| 麻豆成人午夜福利视频| 成人毛片a级毛片在线播放| 一边摸一边抽搐一进一小说| 99视频精品全部免费 在线| 性插视频无遮挡在线免费观看| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 精品日产1卡2卡| 国产一区二区三区av在线 | 国产伦一二天堂av在线观看| 久久综合国产亚洲精品| 欧美日韩国产亚洲二区| 深爱激情五月婷婷| 欧美潮喷喷水| 成人国产麻豆网| 亚洲国产精品成人久久小说 | 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 三级国产精品欧美在线观看| 中国国产av一级| 99久久成人亚洲精品观看| 日本免费一区二区三区高清不卡| 最近中文字幕高清免费大全6| 99热这里只有是精品50| 村上凉子中文字幕在线| 97热精品久久久久久| 免费av观看视频| www.色视频.com| 国产黄色视频一区二区在线观看 | 秋霞在线观看毛片| av天堂中文字幕网| 久久久精品欧美日韩精品| 久久久精品大字幕| 欧美区成人在线视频| 欧美成人a在线观看| 看十八女毛片水多多多| 国模一区二区三区四区视频| 高清午夜精品一区二区三区 | 人人妻,人人澡人人爽秒播| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 日韩精品青青久久久久久| 精品人妻熟女av久视频| 日日啪夜夜撸| 国产精品伦人一区二区| 午夜a级毛片| 午夜精品国产一区二区电影 | 久久久精品大字幕| 国产成人福利小说| 免费av观看视频| 国产精品爽爽va在线观看网站| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 久久久精品欧美日韩精品| 18+在线观看网站| 久久久精品欧美日韩精品| 在线播放无遮挡| 性欧美人与动物交配| 亚洲精品一区av在线观看| 韩国av在线不卡| av在线观看视频网站免费| 成年免费大片在线观看| 无遮挡黄片免费观看| 免费看av在线观看网站| 少妇丰满av| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 热99在线观看视频| 中文在线观看免费www的网站| 久久精品国产清高在天天线| 久久久精品大字幕| 久久久精品94久久精品| 色5月婷婷丁香| 一个人免费在线观看电影| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 成人午夜高清在线视频| av福利片在线观看| 亚洲av免费高清在线观看| 三级国产精品欧美在线观看| 三级毛片av免费| 婷婷精品国产亚洲av在线| 国产亚洲欧美98| 国产 一区精品| 精品日产1卡2卡| 国内揄拍国产精品人妻在线| 亚洲不卡免费看| av视频在线观看入口| 伦理电影大哥的女人| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 国产精品亚洲一级av第二区| 国产精品嫩草影院av在线观看| 成人毛片a级毛片在线播放| 91精品国产九色| 久久国产乱子免费精品| 亚洲美女搞黄在线观看 | a级一级毛片免费在线观看| 亚洲精品国产成人久久av| 欧美日韩国产亚洲二区| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 亚洲自偷自拍三级| 波多野结衣巨乳人妻| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 国产精品久久久久久久电影| 亚洲国产精品成人久久小说 | 国产精品精品国产色婷婷| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 老司机福利观看| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄 | 亚洲欧美日韩高清专用| 午夜福利在线在线| 午夜精品国产一区二区电影 | 激情 狠狠 欧美| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 男女视频在线观看网站免费| 成人特级黄色片久久久久久久| 麻豆成人午夜福利视频| 欧美日本亚洲视频在线播放| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 国产精品一区二区三区四区久久| 午夜日韩欧美国产| 两个人视频免费观看高清| 在线观看66精品国产| 国产精华一区二区三区| 国产三级中文精品| 晚上一个人看的免费电影| 久久这里只有精品中国| 成人综合一区亚洲| 最近视频中文字幕2019在线8| 亚洲无线观看免费| 国产精品久久久久久av不卡| 麻豆久久精品国产亚洲av| 99热6这里只有精品| 国产一区二区三区av在线 | 亚洲色图av天堂| 日韩欧美精品免费久久| 91久久精品电影网| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 午夜a级毛片| 国产高清三级在线| 亚洲无线在线观看| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 十八禁国产超污无遮挡网站| 久久久久久大精品| 一个人看视频在线观看www免费| 美女内射精品一级片tv| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | av天堂中文字幕网| 91久久精品国产一区二区成人| 高清毛片免费看| 亚州av有码| 人人妻人人看人人澡| 校园人妻丝袜中文字幕| 亚洲成人av在线免费| 国产人妻一区二区三区在| 国产精品无大码| 99久久成人亚洲精品观看| 国产av不卡久久| 看黄色毛片网站| 天美传媒精品一区二区| 全区人妻精品视频| 国产日本99.免费观看| avwww免费| 精品久久久噜噜| 舔av片在线| 成年版毛片免费区| 成人av在线播放网站| 国产三级在线视频| 在线播放国产精品三级| 一级毛片电影观看 | 欧美高清成人免费视频www| av视频在线观看入口| av.在线天堂| aaaaa片日本免费| 午夜a级毛片| 联通29元200g的流量卡| 男女之事视频高清在线观看| 亚洲电影在线观看av| 麻豆乱淫一区二区| 免费av毛片视频| 99久久精品一区二区三区| 校园人妻丝袜中文字幕| 国产高清不卡午夜福利| 亚洲va在线va天堂va国产| 日韩精品青青久久久久久| 国产91av在线免费观看| 色哟哟·www| 亚洲最大成人中文| 亚洲最大成人手机在线| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 别揉我奶头 嗯啊视频| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 亚洲最大成人中文| 99在线视频只有这里精品首页| 深夜a级毛片| 真实男女啪啪啪动态图| 俄罗斯特黄特色一大片| 大香蕉久久网| 麻豆国产av国片精品| 深夜a级毛片| av在线老鸭窝| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 精品不卡国产一区二区三区| 国产中年淑女户外野战色| 草草在线视频免费看| 麻豆一二三区av精品| 日韩av在线大香蕉| 一进一出抽搐gif免费好疼| 久久草成人影院| 国产精品人妻久久久影院| 亚洲,欧美,日韩| 国产精品一及| 中文资源天堂在线| 日本一二三区视频观看| 亚洲美女黄片视频| 亚洲av成人精品一区久久| 亚洲av一区综合| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 亚洲图色成人| 少妇的逼好多水| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 网址你懂的国产日韩在线| 成人性生交大片免费视频hd| 精品国产三级普通话版| 真人做人爱边吃奶动态| 中文字幕熟女人妻在线| 不卡视频在线观看欧美| 岛国在线免费视频观看| 国产探花在线观看一区二区| 亚洲精品粉嫩美女一区| 欧美日韩在线观看h| 日本三级黄在线观看| www.色视频.com| 精品久久久久久久久久免费视频| 嫩草影院精品99| 精品不卡国产一区二区三区| 亚洲人成网站高清观看| 一级毛片我不卡| av在线观看视频网站免费| 久久久a久久爽久久v久久| 免费看美女性在线毛片视频| 寂寞人妻少妇视频99o| 老司机午夜福利在线观看视频| 五月玫瑰六月丁香| 欧美激情久久久久久爽电影| 国产人妻一区二区三区在| 国产高清激情床上av| 小说图片视频综合网站| 99热这里只有是精品在线观看| 99热只有精品国产| 欧美高清性xxxxhd video| or卡值多少钱| 国产视频一区二区在线看| 国产69精品久久久久777片| 97超视频在线观看视频| 精品少妇黑人巨大在线播放 | 99久久无色码亚洲精品果冻| 嫩草影视91久久| 中文在线观看免费www的网站| 日韩欧美免费精品| 亚洲一区二区三区色噜噜| 成人亚洲精品av一区二区| 亚洲国产欧美人成| 日韩精品青青久久久久久| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 亚洲电影在线观看av| 亚洲欧美精品综合久久99| 亚洲内射少妇av| h日本视频在线播放| 国产视频内射| 99久国产av精品国产电影| 五月伊人婷婷丁香| 亚洲人成网站在线观看播放| 最近手机中文字幕大全| 搡老岳熟女国产| 国产激情偷乱视频一区二区| 性色avwww在线观看| 日本色播在线视频| 国产av麻豆久久久久久久| videossex国产| 无遮挡黄片免费观看| 可以在线观看毛片的网站| 一区二区三区免费毛片| 深夜a级毛片| 真人做人爱边吃奶动态| 一本久久中文字幕| www日本黄色视频网| 久久久久久久久中文| 中文字幕av在线有码专区| 春色校园在线视频观看| 婷婷色综合大香蕉| 国产精品人妻久久久久久| 毛片女人毛片| 久久这里只有精品中国| 伦精品一区二区三区| 成人性生交大片免费视频hd| 久久精品国产清高在天天线| 老熟妇乱子伦视频在线观看| a级毛色黄片|