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    新輔助化療對乳腺癌組織因子、基質(zhì)金屬蛋白酶-9和蛋白酶激活受體-2的表達及療效的影響

    2013-06-09 15:37:51
    中國癌癥雜志 2013年3期
    關(guān)鍵詞:蛋白酶陰性輔助

    北京大學(xué)第一醫(yī)院乳腺疾病中心,北京 100034

    新輔助化療對乳腺癌組織因子、基質(zhì)金屬蛋白酶-9和蛋白酶激活受體-2的表達及療效的影響

    趙建新 林增茂 段學(xué)寧 劉蔭華

    北京大學(xué)第一醫(yī)院乳腺疾病中心,北京 100034

    背景與目的:組織因子(tissue factor,TF)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)是影響乳腺癌轉(zhuǎn)移和預(yù)后的重要因子,蛋白酶激活受體-2(proteinase activated receptor-2,PAR-2)是二者之間的介導(dǎo)因子。本研究旨在探討乳腺癌組織中TF、PAR-2和MMP-9表達的變化與乳腺癌新輔助化療療效的關(guān)系。方法:應(yīng)用二步法免疫組織化學(xué)方法檢測85例乳腺癌新輔助化療前后乳腺癌組織中TF、PAR-2和MMP-9的表達,分析新輔助化療前后其表達的變化與新輔助化療療效的關(guān)系。結(jié)果:85例乳腺癌新輔助化療患者病理完全緩解率(G5)為8.3%,其他患者在新輔助化療后TF、PAR-2和MMP-9陽性率均降低,其中MMP-9顯著降低(P<0.05)。新輔助化療后,MMP-9表達陽性減弱的患者病理療效顯著好于陽性增強者(P<0.05);TF、MMP-9由陽性轉(zhuǎn)為陰性患者的病理療效顯著好于由陰性轉(zhuǎn)為陽性患者(P<0.05)。PAR-2的改變則與病理療效無顯著關(guān)系。結(jié)論:乳腺癌新輔助化療后TF、MMP-9的陽性表達降低與病理緩解率相關(guān),有助于判斷新輔助化療療效。

    乳腺癌;組織因子;蛋白酶激活受體-2;基質(zhì)金屬蛋白酶-9;新輔助化療

    新輔助化療是乳腺癌全身治療的重要組成部分,新輔助化療前后細胞因子的變化可能對患者的治療和預(yù)后產(chǎn)生影響。組織因子(tissue factor,TF)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)是影響乳腺癌轉(zhuǎn)移和預(yù)后的重要因子,蛋白酶激活受體-2(proteinase activated receptor-2,PAR-2)是二者之間的介導(dǎo)因子。因此,本研究旨在探討乳腺癌組織中TF、PAR-2和MMP-9的表達變化與乳腺癌新輔助化療療效的關(guān)系。

    1 材料和方法

    1.1 研究對象

    2008年1月1日—12月31日北京大學(xué)第一醫(yī)院普通外科收治的經(jīng)空心針穿刺活檢病理診斷為乳腺癌的85例行新輔助化療患者,年齡29~71歲,臨床TNM分期:Ⅱ期59例,Ⅲ期26例,化療方案為TE:多西他賽75 mg/m2,表柔比星75 mg/m2,每3周1次,化療2~4個周期后手術(shù),術(shù)后標本由同1位病理醫(yī)師閱片。術(shù)前病理分型:浸潤性導(dǎo)管癌(非特殊型)79例,其他類型6例(浸潤性小葉癌4例,浸潤性篩狀癌1例,黏液癌1例)。組織學(xué)分級:1級23例,2級28例,3級34例。所有標本經(jīng)4%甲醛溶液固定,石蠟包埋,連續(xù)切片,片厚4 μm。

    1.2 TF、PAR-2和MMP-9蛋白檢測方法及結(jié)果判定

    1.2.1 主要試劑

    第一抗體:小鼠抗人TF單克隆抗體購自Abcam公司(1:100),小鼠抗人MMP-9單克隆抗體和小鼠抗人PAR-2單克隆抗體均購自Santa Cruz公司。第二抗體:辣根酶標記山羊抗小鼠IgG 購自北京中杉金橋生物技術(shù)公司,PV9000免疫組化二步法試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)公司。

    1.2.2 免疫組化染色

    標本經(jīng)4%甲醛溶液固定,常規(guī)脫水,石蠟包埋,連續(xù)切片,切片厚度為4 μm,60 ℃烤片7 h以上后行免疫組化染色。

    采用二步法檢測TF、PAR-2和MMP-9蛋白的表達,按照試劑盒說明書操作。二甲苯脫蠟,梯度酒精水化,微波抗原修復(fù),依次用第一抗體(TF一抗1:100、PAR-2一抗1:100、MMP-9一抗1:200)和第二抗體溫育,PBS洗片后DAB染色,Mayer氏蘇木素復(fù)染后封片。正常人肝臟組織(TF高表達)和正常人心肌組織(PAR-2、MMP-9高表達)為陽性對照,PBS替代第一抗體作為陰性對照。

    1.2.3 結(jié)果判定

    陽性評判標準參照文獻[1-2]的方法:每例觀察10個高倍鏡視野,連續(xù)計數(shù)不少于1 000個細胞,以腫瘤細胞的細胞質(zhì)(MMP-9)或細胞膜(TF和PAR-2)呈現(xiàn)棕黃色為陽性;陽性細胞數(shù)<10%為陰性,≥10%為陽性,按照陽性細胞數(shù)的多少量化為1+(10%),2+(30%),3+(70%)?;熀箨栃约毎麛?shù)減少(或增多)稱陽性減弱(或陽性增強),即量變,其中由陽性轉(zhuǎn)為陰性或由陰性轉(zhuǎn)為陽性為質(zhì)變。

    1.3 新輔助化療病理療效評價

    患者在新輔助化療后接受全乳房切除術(shù)或保乳術(shù),病灶組織根據(jù)病理(Miller-Payne系統(tǒng))進行療效評價[3]。1級(G1):個別癌細胞有變化,但總數(shù)未減少;2級(G2):<30%癌細胞退變;3級(G3):30%~90%的癌細胞退變;4級(G4):>90%的癌細胞退變;5級(G5):未見浸潤癌細胞,可出現(xiàn)導(dǎo)管原位癌。G1和G2為未顯效,G3和G4為有效,G5為達到病理完全緩解。

    1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

    采用SPSS 13.0軟件進行數(shù)據(jù)分析,通過χ2檢驗判斷化療前后TF、PAR-2和MMP-9的表達變化及其與化療療效的關(guān)系,P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié) 果

    2.1 病理療效

    85例患者新輔助化療后,病理療效評價為G1為15例(17.6%),G2為15例(17.6%),G3為14例(16.5%),G4為34例(40.0%),G5為7例(8.3%)。未顯效(G1+G2)占35.29%,有效(G3+G4)占56.47%。

    2.2 G5組患者的新輔助化療前TF、PAR-2和MMP-9蛋白表達情況

    因G5病理完全緩解的標本無法進行腫瘤細胞的免疫組化染色,因此將這部分患者化療前免疫組化染色結(jié)果進行歸納(表1)。

    2.3 新輔助化療前后TF、PAR-2和MMP-9蛋白表達情況變化

    新輔助化療前后TF、PAR-2和MMP-9陽性率均降低(圖1~3),其中MMP-9表達減少具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),3者的陽性表達量變和質(zhì)變的情況見表2。

    2.4 新輔助化療前后TF、PAR-2和MMP-9的表達變化與化療療效的關(guān)系

    新輔助化療后MMP-9表達陽性減弱的患者病理療效顯著好于陽性增強者(P=0.04);TF和MMP-9由陽性轉(zhuǎn)為陰性的患者病理療效顯著好于由陰性轉(zhuǎn)為陽性患者(P<0.05),PAR-2的變化與化療療效無關(guān)(表3~5)。

    表 1 達到病理完全緩解患者資料Tab. 1 The data of the pCR patients

    表 2 新輔助化療前后TF、PAR-2和MMP-9蛋白表達變化Tab. 2 The change of TF, PAR-2 and MMP-9 expression pre and post neoadjuvant chemotherapy

    圖 1 乳腺癌新輔助治療前后TF、PAR-2和MMP-9的表達情況Fig. 1 The expression of TF, PAR-2 and MMP-9 pre and post-chemotherapy (EnVision, ×400)

    表 3 TF的表達與化療療效的關(guān)系Tab. 3 The relation between TF and chemotherapeutic response

    表 4 PAR-2的表達與化療療效的關(guān)系Tab. 4 The relation between PAR-2 and chemotherapeutic response

    表 5 MMP-9的表達與化療療效的關(guān)系Tab. 5 The relation between MMP-9 and chemotherapeutic response

    3 討 論

    新輔助化療已成為治療局部晚期乳腺癌患者的方法之一,具有早期全身治療、降低腫瘤分期、提高手術(shù)切除率和保乳率、術(shù)前體內(nèi)藥敏試驗、選擇個體化治療等優(yōu)點。新輔助化療的療效評估主要通過臨床體檢、影像學(xué)[4]和病理學(xué)檢查完成,其中金標準是病理檢查,免疫組化因子的變化在療效評估中的作用尚不明確。

    TF和MMP-9可能通過影響腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移和血管生成等對化療的療效產(chǎn)生影響。在乳腺癌組織中兩者的陽性表達率可達40%以上[5]。Ueno等[6]研究表明,TF在乳腺癌中的表達可作為生存的獨立預(yù)后因素,對評價乳腺癌患者的遠處轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)提供有效的前瞻性價值。Giannelli等[7]研究發(fā)現(xiàn),乳腺癌術(shù)后血清中MMP-9 的活性較術(shù)前顯著降低。MMP-9活性水平可作為術(shù)后重要的隨訪資料,王新友等[8]的研究也發(fā)現(xiàn),血清MMP-9的活性水平與新輔助化療的療效顯著相關(guān)。湯堅強等[9]認為,在人白血病細胞中TF可通過PARs調(diào)控MMPs的表達,PAR-2可能是TF激活MMP-9分泌的重要介導(dǎo)因子。因此,新輔助化療對三者的作用可能影響患者的預(yù)后和療效評估。

    本研究主要通過化療后腫瘤細胞密度和數(shù)量減低來評價療效,其中有7例患者達到G5,這些患者化療前TF、MMP-9、PAR-2的表達沒有顯示有規(guī)律性。新輔助化療不僅使得患者的腫瘤細胞數(shù)量和密度發(fā)生變化,也使得細胞的分子標志物的表達發(fā)生改變,其中,化療后MMP-9陽性表達率顯著降低,而TF、PAR-2的陽性表達也有所減少。這可能由于MMP-9是TF和PAR-2激活后的效應(yīng)因子,因此表達的降低更明顯。新輔助化療后TF、PAR-2和MMP-9發(fā)生量變的患者占全部患者的40%,發(fā)生質(zhì)變的患者占20%。蛋白表達的變化可能導(dǎo)致腫瘤對化療藥物耐藥,從而影響療效。研究結(jié)果還顯示,新輔助化療后MMP-9表達陽性減弱的患者療效顯著好于陽性增強者,TF和MMP-9由陽性轉(zhuǎn)為陰性的患者療效顯著好于由陰性轉(zhuǎn)為陽性患者,表明化療后出現(xiàn)TF、MMP-9的表達減少可能預(yù)示療效較好;而PAR-2表達與患者療效無關(guān),這可能與PAR-2的表達陽性率較高有關(guān),且PAR-2為多種信號通路蛋白,可能被其他蛋白影響,因此敏感性不高。部分患者在新輔助化療后TF、MMP-9表達由陰性轉(zhuǎn)為陽性,且多為療效較差患者,提示化療可能誘導(dǎo)TF和MMP-9表達增強,也可能與化療藥物耐藥有關(guān)。

    因此,新輔助化療可使TF、MMP-9和PAR-2的陽性表達下降,三者的變化將有助于判斷新輔助化療的療效。

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    The impact of neoadjuvant chemotherapy on the expression of tissue factor, protease activated receptor-2 and matrix metalloproteinase-9

    ZHAO Jian-xin, LIN Zeng-mao, DUAN Xue-ning, LIU Yinhua (Breast Disease Centre, Peking University First Hospital, Beijing 100034, China)

    ZHAO Jian-xin E-mail: zjxcn@yahoo.com.cn

    Background and purpose: TF and MMP-9 are important factors for prognosis and metastasis of breast cancer, PAR-2 is the mediate factor of them, this study aimed to evaluate the change of expressions of TF PAR-2 and MMP-9 in breast cancer patients after neoadjuvant chemotherapy and their correlations with pathologic response. Methods: The expressions of TF, PAR-2 and MMP-9 in 85 breast cancer tissues were examined by immunohistochemical technique (SP) before and after neoadjuvant chemotherapy. Correlation analysis were made between the change of expressions and pathologic response. Results: The strictly pathologic completely response rate (G5) was 8.3% in 85 breast cancer patients after neoadjuvant chemotherapy. The decrease of expression of MMP-9 after neoadjuvant chemotherapy was statistically significant correlations with pathological response (P<0.05). The expression changes of TF and MMP-9 from positive to negative was statistically significant correlated with tumor pathological response(P<0.05). The expression change of PAR-2 showed rarely significant (P>0.05). Conclusion: The decrease of expression of TF and MMP-9 after neoadjuvant chemotherapy have statistically significant correlations with pathological response, would be probably useful for estimating the effect of neoadjuvant chemotherapy.

    Breast cancer; TF; PAR-2; MMP-9; Neoadjuvant chemotherapy

    10.3969/j.issn.1007-3969.2013.03.007

    R737.9

    :A

    :1007-3639(2013)03-0195-05

    2012-10-10

    2013-02-24)

    歡迎訂閱《臨床腫瘤學(xué)雜志》

    趙建新 E-mail:zjxcn@yahoo.com.cn

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    本刊為月刊,大16開本,96頁,激光照排,隨文插放彩圖,印刷裝幀精美,國內(nèi)外公開發(fā)行。標準刊號:ISSN 1009-0460,CN 32-1577/R,郵發(fā)代號:28-267(國內(nèi)),BM8600(國外)。每期定價10元(包括郵寄費),全年120元。全國各地郵局均可訂閱,漏訂者請直接匯款至南京市楊公井34標34號《臨床腫瘤學(xué)雜志》編輯部補訂。郵編:210002,電話:025-84400143、80864363,傳真:025-84400143,E-mail:lczlx@vip.163.com、lczlx@csco.org.cn。

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