自制凝血質(zhì)控物穩(wěn)定性及復(fù)融方式探討

華麗姿（遼寧省朝陽(yáng)市建平縣醫(yī)院檢驗(yàn)科 122400）

凝血酶原時(shí)間（PT）、活化部分凝血活酶時(shí)間（APTT）和凝血酶時(shí)間（TT）是臨床血栓與止血以及用藥監(jiān)測(cè)的常用篩查項(xiàng)目，不僅要求報(bào)告迅速，而且要準(zhǔn)確可靠[1]。目前多數(shù)實(shí)驗(yàn)室采用自制正?；旌涎獫{代替商品質(zhì)控物。其有文獻(xiàn)報(bào)道，自制混合血漿作為實(shí)驗(yàn)室凝血篩查試驗(yàn)項(xiàng)目的質(zhì)控物，其采集方便，制作簡(jiǎn)單，結(jié)果較穩(wěn)定，精密度高，且費(fèi)用低廉，特別適合基層醫(yī)院[2]。本文就自制正?；旌涎獫{穩(wěn)定期限及其復(fù)融方式對(duì)結(jié)果的影響進(jìn)行探討，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 選取門(mén)診健康體檢者110例，其中男55例，女55例，年齡18～85歲。無(wú)用藥史，無(wú)貧血，無(wú)出血及血栓類疾病，排除妊娠或行經(jīng)期女性。檢測(cè)乙型肝炎表面抗原、丙型肝炎病毒抗體和人類免疫缺陷病毒（HIV）1/2抗體均陰性。

1.2 儀器與試劑 日本希森美康醫(yī)用電子有限公司生產(chǎn)的Sysmex CA－50血凝儀；上海長(zhǎng)島生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的PT、APTT、TT試劑。上海長(zhǎng)島生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的正常質(zhì)控血漿。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 標(biāo)本采集 門(mén)診健康體檢者處于平靜與空腹?fàn)顟B(tài)，采血要求順利。109mmol/L枸櫞酸鈉作為抗凝劑，與血液按1∶9混合，采血后立即輕輕顛倒混勻，避免用力振蕩。3 000 r/min離心10min，分離血漿，收集無(wú)黃疸、脂血及溶血血漿于滅菌大塑料容器中，充分混勻，避免產(chǎn)生氣泡。取0.20mL混合血漿分裝于1.5mL帶蓋離心管內(nèi)，－80℃冰箱冰凍保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 自制正常質(zhì)控血漿定值 儀器在正常工作狀態(tài)，商品正常凝血質(zhì)控物在控情況下，取容器中混合血漿測(cè)定PT、APTT、TT值，連續(xù)20次，求其均值、標(biāo)準(zhǔn)差，作為混合血漿定值及取值范圍。

1.3.3 自制正常凝血質(zhì)控物不同復(fù)融方式測(cè)定及穩(wěn)定性觀察 取完全冰凍混合血漿40支，20支為一組，一組用流水沖洗復(fù)融，另一組37℃水浴復(fù)融，分別測(cè)定PT、APTT、TT。以后每天實(shí)驗(yàn)前37℃水浴復(fù)融一支自制凝血質(zhì)控物，測(cè)定PT、APTT、TT，連續(xù)10個(gè)月，觀察自制凝血質(zhì)控物穩(wěn)定性及測(cè)定結(jié)果的精密度。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用SPSS11.5軟件包對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，各項(xiàng)參數(shù)以±s表示，采用t檢驗(yàn)進(jìn)行分析。

2 結(jié) 果

2.1 自制正常凝血質(zhì)控物流水沖洗復(fù)融的測(cè)定結(jié)果與37℃水浴復(fù)融的測(cè)定結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表1。

表1 兩種復(fù)融方式3項(xiàng)結(jié)果比較（±s，s）

表1 兩種復(fù)融方式3項(xiàng)結(jié)果比較（±s，s）

組別 n PT APTT TT 37℃水浴復(fù)融組20 12.4±0.31 31.1±1.10 16.3±0.47流水沖洗復(fù)融組20 12.3±0.32 31.3±1.09 16.2±0.49

2.2 自制正常凝血質(zhì)控物連續(xù)測(cè)定10個(gè)月，每個(gè)月測(cè)定結(jié)果與對(duì)照比較，PT、TT在9個(gè)月后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；APTT在8個(gè)月后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。每個(gè)月精密度均較好，見(jiàn)表2。

表2 自制正常凝血質(zhì)控物連續(xù)測(cè)定10個(gè)月其測(cè)定值與定值比較

3 討 論

血栓與止血涉及臨床許多疾病的發(fā)生和發(fā)展，并與臨床治療和預(yù)后有非常密切的關(guān)系。血凝4項(xiàng)（PT、APTT、TT、纖維蛋白原）是臨床進(jìn)行止血和血栓方面檢查的常用篩查試驗(yàn)項(xiàng)目，報(bào)告PT、APTT和TT測(cè)定結(jié)果的同時(shí)必須報(bào)告正常對(duì)照組。因購(gòu)買(mǎi)質(zhì)控品價(jià)格昂貴，許多醫(yī)院都自制正?；旌涎獫{代替商品質(zhì)控物[3]。用于質(zhì)控過(guò)程的質(zhì)控物最低要求包括2點(diǎn)：（1）具有均一性，將質(zhì)控物的批內(nèi)差減到最小，才能保證更好地體現(xiàn)檢測(cè)體系的波動(dòng)；（2）具有適當(dāng)?shù)姆€(wěn)定性[4]。在有效期內(nèi)質(zhì)控物的性能或濃度基本不變是質(zhì)量控制的前提。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，自制正常凝血質(zhì)控物－80℃保存，PT和TT在9個(gè)月內(nèi)穩(wěn)定性較好，9個(gè)月后凝血時(shí)間延長(zhǎng)，與對(duì)照血漿相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。APTT在8個(gè)月內(nèi)穩(wěn)定性較好，8個(gè)月后凝血時(shí)間也延長(zhǎng)，與對(duì)照血漿相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。由表2可見(jiàn)，PT在保存6個(gè)月后，APTT在保存3個(gè)月后，TT在保存5個(gè)月后，測(cè)定值有延長(zhǎng)趨勢(shì)，這主要是因?yàn)殡S著保存時(shí)間的延長(zhǎng)，凝血因子促凝活性逐漸減低，從而使PT、APTT和TT結(jié)果延長(zhǎng)[5]。血凝標(biāo)本原則上應(yīng)立即檢測(cè)，若不能立即檢測(cè)，應(yīng)將血漿貯存。在－20℃條件下可放置2周，在－70℃條件下可放置6個(gè)月[6]。本次實(shí)驗(yàn)把自制正常凝血質(zhì)控物于－80℃深凍冰箱保存，維持新鮮冰凍血漿的凝血性質(zhì)等同于新鮮血漿，保證了凝血因子、抗凝物質(zhì)的活性，可至少穩(wěn)定8個(gè)月。說(shuō)明－80℃冰箱保存效果更好些。通過(guò)對(duì)自制正常凝血質(zhì)控物的精密度觀察，每個(gè)月混合血漿的PT、APTT值均符合《臨床檢驗(yàn)管理與技術(shù)規(guī)范》中規(guī)定的PT、APTT值（應(yīng)在均值±15%以內(nèi)），且PT、APTT的CV值均低于美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)所規(guī)定的CV（3.5%，5.5%），說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)室自制正常凝血質(zhì)控物的精密度較好。自制血漿不能反復(fù)凍融，復(fù)融時(shí)從冰箱取出要迅速放入37℃水浴中并輕輕搖晃，使其迅速溶化[7]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)流水沖洗復(fù)融與37℃水浴復(fù)融對(duì)結(jié)果的影響觀察，證明采用流水沖洗復(fù)融與37℃水浴復(fù)融對(duì)結(jié)果的影響差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。由此說(shuō)明只要遵循快速融化的原則，就能充分保存凝血因子的生物活性，從而保證PT、APTT和TT結(jié)果的穩(wěn)定性。

總之，自制正常凝血質(zhì)控物精密度高，使用方便，配置不需要特殊設(shè)備，且價(jià)格低廉，適合在國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)室推廣使用[8]。

[1] 孔立新，張道杰，孫黎，等.凝血檢驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)控血漿的制備與評(píng)估[J].臨床檢驗(yàn)雜志，2006，24（2）：146.

[2] 方國(guó)華，李萍，陳校鋒，等.自制凝血質(zhì)控品的應(yīng)用與體會(huì)[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2011，27（21）：3991－3992.

[3] 王文工，鄧?guó)P琳，馬杰.用正常人混合血漿制作凝血質(zhì)控物的探討[J].中國(guó)誤診雜志，2008，8（30）：7361.

[4] 張淑瓊，楊映華，孫武，等.臨床凝血－止血功能檢驗(yàn)質(zhì)控物的研制與應(yīng)用[J].現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2007，22（5）：115.

[5] 蔣靈霓.凝血及纖溶實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)的影響因素及臨床應(yīng)用[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2009，30（2）：196－198.

[6] 葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程[M].3版.南京：東南大學(xué)出版社，2006：211.

[7] 葛學(xué)順.常規(guī)凝血檢查室內(nèi)質(zhì)控血漿的制備與評(píng)價(jià)[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2007，4（3）：184－185.

[8] 李曼輝，楊宇勤，姚元超.健康者混合血漿制備凝血質(zhì)控物及其穩(wěn)定性的探討[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2011，32（7）：809.