兩種方法測(cè)定乳糜血標(biāo)本淀粉酶結(jié)果比較

湯雪彪，胡江紅，袁平宗，張 偉，邵 陽(yáng)（四川省內(nèi)江市第二人民醫(yī)院 641100）

急診患者血標(biāo)本檢測(cè)時(shí)，標(biāo)本離心后經(jīng)常發(fā)現(xiàn)有不同程度的乳糜標(biāo)本，如果采用常規(guī)的濕化學(xué)法測(cè)定，有些項(xiàng)目如：淀粉酶（AMY）、清蛋白、肌酐、膽紅素等生化指標(biāo)結(jié)果易受乳糜血干擾，常呈假性升高[1]，不能為臨床提供真實(shí)可靠的數(shù)據(jù)，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果與臨床診斷不符，容易誤導(dǎo)醫(yī)生診斷。急性胰腺炎是一種急腹癥，必須及時(shí)作出正確的診斷。本研究采用干化學(xué)法和濕化學(xué)法同時(shí)測(cè)定乳糜血標(biāo)本的AMY活性，并進(jìn)行比對(duì)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 本院門(mén)診15份急診患者血標(biāo)本，離心后肉眼觀察為乳糜樣標(biāo)本。

1.2 儀器與試劑 美國(guó)強(qiáng)生VIPROS－350干化學(xué)儀，美國(guó)強(qiáng)生公司提供的AMY試劑；日立7600－020自動(dòng)生化分析儀，上海合富醫(yī)學(xué)科技有限公司提供的AMY試劑。兩種方法均嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.3 檢驗(yàn)方法 標(biāo)本采集后1h內(nèi)采用干化學(xué)法與濕化學(xué)法同時(shí)檢測(cè)15份乳糜血標(biāo)本AMY，該批次兩種儀器淀粉酶質(zhì)控在控。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 用配對(duì)設(shè)計(jì)資料的秩和t檢驗(yàn)比較兩組數(shù)據(jù)的差異，取α＝0.05，單側(cè)t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

干化學(xué)法較濕化學(xué)方法測(cè)定乳糜血標(biāo)本AMY含量低，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。采用干化學(xué)法測(cè)定的15份乳糜血標(biāo)本血清AMY值全部都在參考值范圍內(nèi)，而采用濕化學(xué)法測(cè)定的只有2例在參考值范圍內(nèi)，13例高于參考值范圍，結(jié)果見(jiàn)表1。（AMY參考范圍：≤220U/L）[2]。

表1 15份標(biāo)本兩種方法測(cè)定AMY結(jié)果（U/L）

續(xù)表1 15份標(biāo)本兩種方法測(cè)定AMY結(jié)果（U/L）

3 討 論

乳糜血血漿顏色呈乳白色或混濁狀，表示血液中含有大量脂肪。乳糜血中乳糜微粒是三酰甘油、膽固醇、磷脂及載脂蛋白共同組成的載脂蛋白。乳糜微粒空腹12h后就被完全清除。乳糜可造成血漿渾濁，脂濁使血清分布呈現(xiàn)非均一性，嚴(yán)重影響檢測(cè)，常規(guī)采用可見(jiàn)光及紫外光光度法中濕化學(xué)法測(cè)定AMY、清蛋白、肌酐、膽紅素等生化指標(biāo)的可靠性，導(dǎo)致結(jié)果常成假性升高，不能為臨床提供真實(shí)可靠的數(shù)據(jù)。本實(shí)驗(yàn)測(cè)定15份乳糜血標(biāo)本AMY含量，干化學(xué)法較濕化學(xué)法測(cè)定乳糜血標(biāo)本AMY含量低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。采用干化學(xué)法測(cè)定的15份乳糜血標(biāo)本的血清AMY值全部都在參考值范圍內(nèi)，而采用濕化學(xué)法測(cè)定的只有2例在參考范圍內(nèi)，13例假性升高。濕化學(xué)法結(jié)果是干化學(xué)法的3.2～11.6倍，15例患者隨訪均不是胰腺炎患者，因此作者認(rèn)為干化學(xué)法較濕化學(xué)法更適合對(duì)乳糜血標(biāo)本的AMY測(cè)定。

干化學(xué)法和濕化學(xué)法均采用可見(jiàn)光及紫外光光度法中的對(duì)比法[3]，干化學(xué)法和濕化學(xué)法測(cè)定血清AMY反應(yīng)原理基本一致。干化學(xué)法采用已染色支鏈淀粉為底物，通過(guò)樣本中AMY的作用生成糖類(lèi)物質(zhì)，測(cè)定已染色糖類(lèi)的反射光強(qiáng)度，反映在干燥的載玻片上。載玻片由5層構(gòu)成，分別為干片上層、擴(kuò)散層、試劑層、支持層、干片底層。采用干化學(xué)法測(cè)定AMY時(shí)將1滴患者樣本滴在干片上，并通過(guò)擴(kuò)散層均勻分布到下面的試劑層，擴(kuò)散層不僅可阻留細(xì)胞、結(jié)晶和其他小顆粒，也可以根據(jù)需要讓大分子（如蛋白質(zhì)）滯留，以提高分析的特異性。因此該層可以阻留乳糜微粒等物質(zhì)，起到抗乳糜微粒干擾的作用。同時(shí)當(dāng)待檢樣品通過(guò)擴(kuò)散層后，可以消除溶液中影響檢測(cè)的干擾物質(zhì)。擴(kuò)散層中的某些特殊物質(zhì)一方面可用來(lái)掩蓋待檢樣品中的有色物質(zhì)，使反射光度計(jì)的測(cè)定結(jié)果不受影響。

濕化學(xué)法測(cè)定血清AMY時(shí)反應(yīng)試劑與血清所有成分在一起，因此該反應(yīng)方法不能起到抗乳糜微粒干擾的作用，這是引起濕化學(xué)法測(cè)定乳糜血標(biāo)本AMY值偏高的主要原因。同時(shí)該反應(yīng)方法不能消除溶液中影響檢測(cè)的干擾物質(zhì)以及不能掩蓋待檢樣品中的有色物質(zhì)，使測(cè)定結(jié)果受到影響。干化學(xué)法測(cè)定AMY時(shí)試劑層提供用于測(cè)定AMY反應(yīng)的反射背景，其中含有用來(lái)測(cè)定AMY所需的所有試劑，經(jīng)過(guò)一系列反應(yīng)后，通過(guò)透明的支持層，在540nm和660nm兩種波長(zhǎng)下測(cè)定已染色糖類(lèi)的反射強(qiáng)度以確定AMY濃度。660nm下的反射測(cè)定用于矯正光譜干涉。采用雙波長(zhǎng)測(cè)定可以通過(guò)副波長(zhǎng)加以修正，減少甚至消除干擾因素，提高測(cè)定的準(zhǔn)確性。而濕化學(xué)法測(cè)定血清AMY采用單波長(zhǎng)（540nm），單波長(zhǎng)測(cè)定易受樣品溶血、黃疸、脂濁等因素干擾，這也是干化學(xué)法測(cè)定血清AMY較濕化學(xué)法準(zhǔn)確的原因。干化學(xué)法反應(yīng)底物進(jìn)入指示劑層，在這里發(fā)生顯色反應(yīng)。此層包含染料或相似的指示劑，使反應(yīng)產(chǎn)物到達(dá)指示劑層后生成了有色化合物，其顏色變化與分析物濃度呈比例變化，被反射光檢測(cè)。由于光線不通過(guò)已經(jīng)被阻留在擴(kuò)散層上的潛在干擾物，從而避免了對(duì)檢測(cè)結(jié)果的干擾。因此多層的設(shè)計(jì)，不同的項(xiàng)目加入了特殊的試劑層，增強(qiáng)反應(yīng)的特異性，使干化學(xué)法具有優(yōu)異的抗干擾能力[4]。

綜上所述，干化學(xué)法由于其獨(dú)特的反應(yīng)設(shè)計(jì)可以抗血清標(biāo)本乳糜的干擾，使其較濕化學(xué)法更適合對(duì)乳糜血標(biāo)本進(jìn)行AMY測(cè)定，因此也適合測(cè)定乳糜血中白蛋白、肌酐等生化指標(biāo)。至于干化學(xué)法是否具有完全的抗乳糜血干擾的作用，還需進(jìn)一步進(jìn)行臨床生化方法學(xué)的評(píng)價(jià)。

[1] 鮑瀛，段櫻，譚兵，等.干化學(xué)法與濕化學(xué)法測(cè)定結(jié)果的比較[J].哈爾濱醫(yī)藥，2008，28（5）：6－7.

[2] 葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜，等.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程[M].3版.南京：東南大學(xué)出版社，2006：425.

[3] 寇麗筠，陳宏礎(chǔ).臨床基礎(chǔ)檢驗(yàn)學(xué)[M].2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2001：144.

[4] 宋書(shū)衛(wèi)，陳國(guó)軍.尿液分析儀質(zhì)量控制的體會(huì)[J].陜西醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)，2008，23（15）：160.