CD64和T細胞亞群的表達在新生兒敗血癥中的價值

梁紅英，劉光輝，張 健，程邦寧（安徽醫(yī)科大學(xué)兒科臨床學(xué)院新生兒科，合肥 230051）

新生兒免疫功能尚未發(fā)育完善，容易發(fā)生感染尤其是敗血癥，由于新生兒敗血癥臨床癥狀的多樣性與非典型性，使早期診斷新生兒敗血癥成為難題，新生兒感染與感染途徑、致病原及自身免疫力有關(guān)。如何能早期準(zhǔn)確地診斷新生兒敗血癥及評價新生兒的細胞免疫功能，將對新生兒敗血癥的治療及預(yù)后有重大的意義。本研究通過檢測敗血癥新生兒與非感染新生兒CD64及CD3、CD4、CD8的表達情況，探討新生兒外周血CD64及CD3、CD4、CD8的變化與新生兒敗血癥的關(guān)系，以期明確CD64在診斷新生兒敗血癥中的價值，并對新生兒細胞免疫功能進行評價，探討細胞免疫與敗血癥的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 以2012年4～9月安徽省立兒童醫(yī)院新生兒科病房收治的新生兒作為研究對象，其中敗血癥組共30例（敗血癥者28例，敗血癥合并感染性休克者2例），血培養(yǎng)陽性者12例（大腸埃希菌3例、肺炎克雷伯桿菌4例、綠膿桿菌1例、表皮葡萄球菌1例、金黃色葡萄球菌2例、陰溝腸桿菌1例）。同時選取50例非感染患兒（吸入性肺炎、羊水咽下、單純早產(chǎn)兒等）作為對照組。敗血癥組患兒胎齡（37.6±1.9）周，體質(zhì)量（3 110.2±533.7）g，日齡（12.5±3.2）d；非感染組胎齡（38.0±1.6）周，體質(zhì)量（3 108.1±592.7）g，日齡（12.2±3.0）d，兩組胎齡、出生體質(zhì)量及日齡差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn) 新生兒敗血癥的診斷參考第四版《實用新生兒學(xué)》，敗血癥確診的診斷指標(biāo)[1]為：（1）具有臨床表現(xiàn)，血培養(yǎng)或無菌體腔內(nèi)培養(yǎng)出致病菌。（2）具有臨床表現(xiàn)，如果血培養(yǎng)培養(yǎng)出條件致病菌，則必須與另一份血或無菌體腔內(nèi)或?qū)Ч茴^培養(yǎng)出同種細菌。滿足以上任意一條者，都可以確診為敗血癥。臨床診斷指標(biāo)為：對于血培養(yǎng)陰性的感染病例，（1）符合非特異性檢查大于或等于2條，（2）血標(biāo)本病原菌抗原或DNA檢測陽性，可以診斷為臨床敗血癥。非特異指標(biāo)如下等：（1）具有敗血癥的臨床表現(xiàn)，白細胞總數(shù)小于5×109/L或出生3d后大于20×109/L，或桿狀核白細胞與多形核細胞之比大于或等于0.2。（2）具有易發(fā)生敗血癥的誘因及相應(yīng)的臨床表現(xiàn)，C反應(yīng)蛋白（CRP）明顯升高而無肺炎等其他可使之升高的疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：患有先天性免疫障礙性疾病及除外先天性畸形及遺傳代謝性疾病者。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)本收集 敗血癥組標(biāo)本的采集：在確定感染且未用抗生素之前采集上肢靜脈血2mL，分別進行CD64、CD3、CD4、CD8、CRP及血常規(guī)檢測，同時做血培養(yǎng)；非感染組一次性采集上肢靜脈血進行血常規(guī)及CRP、CD3、CD4、CD8及CD64檢測。

1.3.2 CD64檢測 全血100μL＋20μL CD64－異硫氰酸熒光素標(biāo)記試劑（美國貝克曼庫爾特公司產(chǎn)品）混勻，加1mL溶血素，暗處放置15min后用流式細胞儀（美國貝克曼庫爾特公司產(chǎn)品）分別測定淋巴細胞和粒細胞的CD64平均熒光強度（MFI），計算CD64指數(shù)。

1.3.3 CD3、CD4、CD8檢測 采用美國 Beckman Coulter Epies－XL4型單激光4色流式細胞儀檢測CD3、CD4、CD8，試劑及質(zhì)控品均為Beckman Coulter公司配套產(chǎn)品。

1.3.4 血常規(guī)檢測 使用Sysmex XE－5000全自動血液分析儀檢測血常規(guī)。

1.3.5 CRP檢測 采用散射比濁法檢測CRP，試劑及其配套儀器購于深圳市國賽生物技術(shù)有限公司。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS11.0軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以±s表示，兩組之間比較采用t檢驗，計數(shù)資料采用卡方檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。繪制ROC曲線確定CD64的臨界值，計算診斷敗血癥指標(biāo)的靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值和陰性預(yù)測值。

2 結(jié) 果

2.1 CD64、CRP、白細胞計數(shù)（WBC）、血培養(yǎng)在診斷新生兒敗血癥中的比較 見表1。敗血癥組的CD64表達明顯高于非感染組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），敗血癥組的CRP高于非感染組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），兩組之間 WBC差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

表1 CD64、CRP、WBC在診斷新生兒敗血癥中的比較（±s）

表1 CD64、CRP、WBC在診斷新生兒敗血癥中的比較（±s）

注：－表示無數(shù)據(jù)。

組別 n CD64（%） WBC（×109/L） CRP（mg/L）敗血癥組30 6.7±2.9 11.9±5.2 34.2±29.3非感染組 50 3.1±1.2 11.9±4.1 3.6±2.9 t－ 7.711 －0.034 7.423 P － 0.000 0.973 0.000

2.2 CD64與CRP在診斷新生兒敗血癥中的敏感性和特異性比較 將兩組數(shù)據(jù)作ROC曲線，計算得CD64曲線下面積為0.903，CD64臨界值為3.45%，診斷敗血癥的敏感度為87.0%，特異度為88.0%，陽性預(yù)測值為83.9%，陰性預(yù)測值91.8%；CRP曲線下面積為0.813，臨界值為80mg/L，診斷敗血癥的敏感度為83.3%，特異度為70.0%，陽性預(yù)測值為70.6%，陰性預(yù)測值71.4%。

2.3 外周血中性粒細胞CD64與血培養(yǎng)在診斷新生兒敗血癥中的評估 見表2。30例敗血癥患兒中，CD64的檢測陽性率為86.7%（26/30），血培養(yǎng)中 CRP檢測陽性率為40.0%（12/30），CD64與血培養(yǎng)中CRP診斷新生兒敗血癥比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。

表2 2項檢測陽性率比較[n（%）]

2.4 兩組新生兒CD3、CD4、CD8的比較 見表3。敗血癥組的CD3、CD4低于非感染組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），兩組CD8差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

表3 各組間CD3、CD4、CD8的比較（±s，%）

表3 各組間CD3、CD4、CD8的比較（±s，%）

注：－表示無數(shù)據(jù)。

組別 n CD3 CD4 CD8敗血癥組30 46.2±12.4 32.0±10.1 11.8±3.9非感染組 50 61.1±12.5 45.4±13.4 13.5±6.5 t－ －5.179 －4.653 －1.835 P－ 0.000 0.0000.070

3 討 論

目前感染仍是我國新生兒常見疾病與引起新生兒死亡的重要原因之一[2]，其中重癥感染，如敗血癥在新生兒監(jiān)護室中仍有較高的發(fā)生率和病死率，在重癥監(jiān)護室的患者中，至少有1/3～1/2的患者最終被診斷為敗血癥[3]。血培養(yǎng)雖是診斷敗血癥的金標(biāo)準(zhǔn)，但陽性率低，且病原分離所需時間長，不能達到早期診斷的目的。因此，需要尋找敏感、可靠、能早期診斷敗血癥的理想指標(biāo)[4]，若能早期診斷新生兒敗血癥將有利于改善其預(yù)后。近年來，中性粒細胞CD64表達在早期診斷新生兒敗血癥的價值得到了重視。

CD64即FcrR I，是免疫球蛋白（IgG）的高親和力受體，正常生理情況下，CD64在中性粒細胞呈低水平表達，但當(dāng)機體處于感染狀態(tài)時，CD64的表達可增加5～10倍[5]。CD64可以作為早期診斷新生兒感染的有效指標(biāo)[6]。研究發(fā)現(xiàn)CD64在敗血癥發(fā)生后0～24h內(nèi)均保持明顯升高，這個時間窗有利于早期診斷新生兒敗血癥，并且有助于判定感染的程度。本研究發(fā)現(xiàn)敗血癥組的CD64表達水平明顯高于非感染組，說明CD64的表達與新生兒感染密切相關(guān)，并隨感染程度的加重而升高，與張金萍等[7]研究結(jié)果相符。本研究結(jié)果顯示，敗血癥組的CRP高于非感染組，CRP隨感染的加重而升高，可以作為判斷細菌感染的指標(biāo)；但CRP是由胎兒肝臟產(chǎn)生的急性時相蛋白，是非特異性指標(biāo)，對診斷新生兒敗血癥的臨床價值較低[8]。本研究通過ROC曲線得出CD64曲線下面積為0.903，高于CRP，CD64臨界值為3.45%時，CD64診斷新生兒敗血癥的靈敏度為87.0%，特異度為88.0%，陽性預(yù)測值83.9%，陰性預(yù)測值91.8%，說明CD64與CRP相比較而言，CD64是診斷新生兒敗血癥的更為敏感的特異性指標(biāo)，與Choo等[9]研究結(jié)果相符。研究顯示CD64與CRP相比而言，是早期診斷新生兒敗血癥更為可靠的單一指標(biāo)。另外本研究發(fā)現(xiàn)兩組間WBC的表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義，說明WBC不能作為診斷新生兒敗血癥的特異指標(biāo)。血培養(yǎng)雖然是診斷敗血癥的金標(biāo)準(zhǔn)，但是血培養(yǎng)陽性率低，本研究顯示30例敗血癥患兒中，CD64的檢測陽性率為86.7%，血培養(yǎng)的檢測陽性率僅為40.0%，CD64的檢測陽性率高于血培養(yǎng)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），說明CD64是能早期診斷敗血癥的敏感性指標(biāo)。

在抗感染中淋巴細胞可被激活，從而啟動免疫抵抗反應(yīng)，淋巴細胞主要包括T淋巴細胞、B淋巴細胞及自然殺傷細胞。其中T淋巴細胞是最主要的免疫細胞，CD3代表T淋巴細胞總數(shù)，CD4代表T輔助細胞，CD8代表T抑制細胞，CD4、CD8細胞是重要的病毒、細菌清除細胞，T淋巴細胞的相互調(diào)節(jié)維持機體免疫平衡，病原體與宿主免疫系統(tǒng)的相互作用貫穿感染過程始終，并決定感染的發(fā)生、發(fā)展及結(jié)局。但病毒感染和長期反復(fù)慢性炎癥可使體內(nèi)CD4、CD8細胞減少，導(dǎo)致免疫功能降低，有研究發(fā)現(xiàn)窒息、缺氧導(dǎo)致T淋巴細胞亞群紊亂，不同胎齡的新生兒細胞T淋巴細胞亞群的變化不同，可影響其免疫功能[10－11]。本研究結(jié)果顯示，新生兒敗血癥者外周血CD3、CD4較非感染組降低，說明T細胞功能不完善，不能有效輔助免疫細胞，導(dǎo)致重癥感染時患兒細胞免疫功能低下，與邱麗影等[12]研究結(jié)果一致，說明重癥感染患兒細胞免疫功能受到抑制，同時細胞免疫功能低下亦是新生兒發(fā)生重癥感染的重要原因之一。

綜上所述，通過聯(lián)合測定CD64及T細胞亞群可早期及時準(zhǔn)確地診斷新生兒敗血癥，并能評估患兒的細胞免疫狀態(tài)，予以有效、合理的抗生素治療及提高免疫力，將有助于患兒病情的緩解及改善預(yù)后。

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