惠州地區(qū)淋球菌對抗菌藥物的耐藥性分析

余寶珠，龔宇花，黃輝如（.廣東省惠州市皮膚病防治研究所 56；.廣東省惠州市中心人民醫(yī)院 56）

淋病是我國高發(fā)的性病之一，如果治療不當(dāng)，會引起嚴(yán)重的感染，如淋菌性前列腺炎以及淋菌性宮頸炎。近年來，由于各地抗菌藥物的不恰當(dāng)使用，導(dǎo)致淋球菌耐藥性不斷增加，如果不加以控制，未來有可能找不到可以治療淋球菌感染的抗菌藥物。為了解惠州地區(qū)淋球菌對抗菌藥物的耐藥性及產(chǎn)β－內(nèi)酰胺酶的淋球菌（PPNG）和質(zhì)粒介導(dǎo)的高度耐四環(huán)素的淋球菌（TRNG）的流行情況，本文對2012年度分離的137株淋球菌進(jìn)行了檢測，檢測其對6種抗菌藥物的最低抑菌濃度（MIC），報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株 來自2012年1～12月本院性病門診患者泌尿生殖道分泌物中分離得到的137株淋球菌。所有菌株經(jīng)革蘭染色、氧化酶試驗以及糖發(fā)酵試驗證實后，傳代1次洗于脫脂牛奶中，于－78℃低溫冰箱凍存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2 淋球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株 世界衛(wèi)生組織（WHO）A、B、C、D及E標(biāo)準(zhǔn)菌株由中國藥品生物制品檢定所提供。

1.1.3 抗菌藥物 阿奇霉素標(biāo)準(zhǔn)品購于中國藥品生物制品檢定所；壯觀霉素由國藥集團(tuán)國瑞藥業(yè)有限公司提供；頭孢曲松鈉由上海羅氏制藥有限公司提供；青霉素由哈藥集團(tuán)制藥總廠提供；四環(huán)素由哈藥集團(tuán)制藥四廠提供；環(huán)丙沙星由哈藥集團(tuán)制藥六廠提供。

1.1.4 培養(yǎng)基 GC基礎(chǔ)培養(yǎng)基（Oxoid公司生產(chǎn)）加入10%脫纖維新鮮羊血。

1.2 方法

1.2.1 抑菌濃度（MIC）測定 采用WHO西太平洋淋球菌耐藥監(jiān)測規(guī)劃建議的瓊脂稀釋法，先將阿奇霉素、壯觀霉素、青霉素、頭孢曲松鈉、四環(huán)素以及環(huán)丙沙星按照要求配成原液，再倍比稀釋成不同的濃度，然后將3.7%GC基礎(chǔ)瓊脂高壓滅菌，水浴冷卻到50℃，加入脫纖維新鮮羊血（最終10%濃度）。取0.1mL倍比稀釋好的6種抗菌藥物工作液，加入10mL GC血液基，培養(yǎng)基?；靹蚝髮⑵桨鍍A倒，從低濃度到高濃度配制各種濃度。實驗菌株和標(biāo)準(zhǔn)菌株制成混懸液，接種于各種濃度的平板上，于36℃、5%二氧化碳環(huán)境下培養(yǎng)，36h后觀察結(jié)果，記錄最低MIC。同時用 WHO的A、B、C、D及E標(biāo)準(zhǔn)菌株作為質(zhì)控。藥物敏感性判斷標(biāo)準(zhǔn)采用WHO西太平洋地區(qū)淋球菌耐藥監(jiān)測規(guī)劃標(biāo)準(zhǔn)推薦的標(biāo)準(zhǔn)，即青霉素A、B、C、D及E標(biāo)準(zhǔn)菌株環(huán)丙沙星及頭孢曲松鈉均當(dāng)MIC≤0.03mg/L時為敏感，當(dāng) MIC為0.06～0.50mg/L時為中度敏感，MIC≥1 mg/L時為耐藥；壯觀霉素當(dāng) MIC≤64mg/L時為敏感，≥128 mg/L時為耐藥；四環(huán)素 MIC≥16mg/L時為TRNG；阿奇霉素參考英國抗微生物化療學(xué)會推薦的臨界值（敏感：MIC≤于0.25mg/L，中 度 敏 感：MIC≤0.5mg/L，耐 藥：MIC≥1mg/L）[2]。

1.2.2 β－內(nèi)酰胺酶檢測 采用紙片碘量法檢測菌株的β－內(nèi)酰胺酶，取1個試管，加入2滴10 000U/mL的青霉素原液，2滴1%淀粉溶液，1滴碘試劑，形成藍(lán)色混合物，在一個濾紙條上滴上1滴試劑，將接種培養(yǎng)物涂在藍(lán)點上，放置1～2min，如果藍(lán)色變?yōu)闊o色意味著β－內(nèi)酰胺酶陽性，否則為陰性。每次試驗用WHO的E株作為陽性對照，A株作為陰性對照。

2 結(jié) 果

2.1 PPNG及TRNG結(jié)果 137株淋球菌株中β－內(nèi)酰胺酶陽性為51株，即PPNG，占37.2%；82株四環(huán)素 MIC＝16mg/L，即TRNG，占59.9%。

2.2 137株淋球菌MIC測定結(jié)果 見表1。青霉素MIC范圍0.062 5～16mg/L，MIC 0.06～0.50mg/L的中介株為10株，占7.3%，≥1mg/L的耐藥株為127株，耐藥率92.7%（127/137）；環(huán)丙沙星 MIC范圍4～32mg/L，耐藥率100.0%（137/137）；頭 孢曲松鈉 MIC 范圍 0.007 8～0.50mg/L，MIC≤0.03mg/L的敏感株為98株，MIC 0.06～0.5mg/L的中介株為39株，其敏感度為71.5%（98/137）；阿奇霉素 MIC范圍0.031 2～8mg/L，MIC≤0.25mg/L的敏感株為84株，MIC≤0.5mg/L的中介株為12株，≥1mg/L的耐藥株為41株，耐藥率29.9%（41/137）；壯觀霉素 MIC范圍2～64mg/L，MIC≤64mg/L的敏感株為137株，其敏感度為100.0%（137/137）。

表1 137株淋球菌對6種抗菌藥物的耐藥情況[n（%）]

3 討 論

淋病作為最常見的性病之一，在我國一直有較高的發(fā)病率。由于目前患者對性病有一種恐懼忌醫(yī)心理，許多淋病患者沒有得到規(guī)范的治療，導(dǎo)致許多耐藥淋球菌株產(chǎn)生。淋球菌的耐藥情況在不同時間和不同地點會有不同的表現(xiàn)，因此，定期規(guī)范檢測淋球菌的耐藥情況就十分必要。

淋球菌的耐藥機(jī)制主要由質(zhì)粒介導(dǎo)和染色體介導(dǎo)引起，質(zhì)粒介導(dǎo)引起的耐藥一般是高度耐藥，染色體介導(dǎo)引起的耐藥一般是低度耐藥[1]。近年來，各地報道了多種淋球菌耐藥菌株，其中多數(shù)地區(qū)淋球菌對青霉素以及四環(huán)素都已產(chǎn)生嚴(yán)重耐藥性[2－3]。淋球菌對青霉素及四環(huán)素的耐藥性由耐藥質(zhì)粒介導(dǎo)，耐藥質(zhì)?？稍诓煌鷮匍g進(jìn)行交換，導(dǎo)致耐藥性在不同菌株及不同種屬間傳遞，引起耐藥性流行[4－5]。本研究結(jié)果顯示，惠州地區(qū)淋球菌對青霉素的耐藥率為92.7%，PPNG為37.2%，TRNG檢出率為59.9%。青霉素與四環(huán)素已經(jīng)不能作為淋病治療的一線藥物，但是PPNG與TRNG的檢測作為淋球菌耐藥性流行病學(xué)的重要檢測指標(biāo)仍具有一定的意義。

對于其他類抗菌藥物的耐藥性，各地報道不同。環(huán)丙沙星作為一種廣譜抗菌的喹諾酮類藥物，通過抑制細(xì)菌的DNA合成而發(fā)揮作用，對淋球菌有一定的療效。本研究結(jié)果顯示，惠州地區(qū)淋球菌對于環(huán)丙沙星的耐藥率達(dá)到100.0%。余克花等[6]的研究顯示，南昌地區(qū)淋球菌對環(huán)丙沙星的耐藥率為49.6%，而曹文苓等[7]發(fā)現(xiàn)廣州地區(qū)淋球菌對環(huán)丙沙星的耐藥率高達(dá)98.9%，牛玉峰[8]報道江蘇淮安淋球菌對環(huán)丙沙星的耐藥率也達(dá)到95.8%。這些研究結(jié)果提示環(huán)丙沙星也不能作為治療淋病的一線藥物。

阿奇霉素對于包括淋球菌、支原體以及衣原體在內(nèi)的多種病原微生物均有一定效果，臨床上應(yīng)用廣泛[9－10]，一些研究結(jié)果提示一些耐阿奇霉素的淋球菌菌株出現(xiàn)。本研究結(jié)果表明，惠州地區(qū)阿奇霉素耐藥率高達(dá)29.9%，由此提示醫(yī)務(wù)工作者今后加強(qiáng)對此藥物治療淋病的耐藥性監(jiān)測。大多研究未發(fā)現(xiàn)耐頭孢曲松鈉的淋球菌菌株，本文的結(jié)果也一樣，但是作者發(fā)現(xiàn)對于頭孢曲松鈉的中介株比例達(dá)到了28.5%，因此，同樣應(yīng)加強(qiáng)對于頭孢曲松鈉的監(jiān)測。壯觀霉素的研究結(jié)果令人振奮，敏感株比例達(dá)到100.0%，與絕大多數(shù)報道一致。

綜上所述，壯觀霉素和頭孢曲松鈉可以作為治療惠州地區(qū)淋病的首選藥物，但應(yīng)定期監(jiān)測其耐藥情況。

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