基于不同檢測方法的乙型肝炎病毒感染血清標(biāo)志物模式分析

江雁瓊，遲 瓊，詹鈾超（廣州醫(yī)學(xué)院第五附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科 510700）

乙型肝炎病毒（HBV）/感染的血清學(xué)標(biāo)志物[HBV表面抗體（HBsAg）、HBV 表面抗體（抗－HBs）、HBV e抗原（HBeAg）、HBV e抗體（抗－HBe）、HBV核心抗體（抗－HBc）] 檢測是診斷HBV感染和判斷病毒復(fù)制的重要指標(biāo)之一[1]。目前酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）仍是乙型肝炎血清學(xué)標(biāo)志物檢測的主要方法，但是近年來有越來越多的臨床實(shí)驗(yàn)室將電化學(xué)發(fā)光法（ECLIA）用于這些標(biāo)志物檢測[2－3]。由于 ECLIA 與 ELISA 檢測原理和特性不同，因此ECLIA檢測乙型肝炎血清學(xué)標(biāo)志物會出現(xiàn)一些不同于ELISA檢測的模式。本實(shí)驗(yàn)室對ECLIA與ELISA檢測乙型肝炎血清學(xué)標(biāo)志物會出現(xiàn)的各種模式進(jìn)行了綜合分析，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 檢測對象 全部標(biāo)本均來自本院的患者，共20 709例，年齡1d至97歲，其中男11 292例，女9 417例。20 709例標(biāo)本中，有11 923例標(biāo)本來自2010年3～5月住院患者，另外8 786例標(biāo)本來自2011年3～5月住院患者。

1.2 方法 對2010年3～5月收集的11 923例患者標(biāo)本采用ELISA檢測5項(xiàng)（HBsAg、抗－HBs、HBeAg、抗－HBe、抗－HBc）血清學(xué)標(biāo)志物，試劑購自上?？迫A生物工程股份有限公司。對2011年3～5月收集的8 786例患者標(biāo)本采用ECLIA檢測相應(yīng)指標(biāo)，試劑購自雅培診斷公司。均嚴(yán)格按說明書進(jìn)行操作。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 組間率的比較采用χ2檢驗(yàn)，抗－HBs定量數(shù)據(jù)的組間比較采用Kruskal－Wallis H檢驗(yàn)。全部統(tǒng)計分析均使用SPSS17.0統(tǒng)計軟件完成。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 HBsAg陽性患者性別分布 ELISA檢測的11 923例患者中，男性HBsAg陽性率明顯高于女性，二者差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2＝6.298，P＜0.05），見表1。ECLIA檢測的8 786例患者中，也發(fā)現(xiàn)男性HBsAg陽性率明顯高于女性，二者差異也有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2＝15.196，P＜0.05），見表2。

表1 ELISA檢測11 923例患者的HBsAg陽性率

表2 ECLIA檢測8 786例患者的HBsAg陽性率

2.2 兩種不同方法檢測乙型肝炎血清學(xué)標(biāo)志物結(jié)果模式 見表3。由ELISA檢測的11 923例患者乙型肝炎血清學(xué)標(biāo)志物的結(jié)果匯總表現(xiàn)為20種不同模式，由ECLIA檢測的8 786例患者乙型肝炎血清學(xué)標(biāo)志物的結(jié)果匯總表現(xiàn)為19種不同模式。用ECLIA檢測乙型肝炎血清學(xué)標(biāo)志物后，出現(xiàn)4種新的模式，即3、4、5，1、2、3、5，1、3、4、5，1、2、3、4、5陽性模式，同時原先用ELISA檢測可見的5種模式未能重現(xiàn)，這5種模式包括3，1、2，1、3，1、4，1、2、5陽性模式。

2.3 2，2、5，2、4、5這3種陽性模式陽性率的比較 見表4。2010年3、4和5月用ELISA分別檢測4 357、3 768和3 798例住院患者的乙型肝炎血清標(biāo)志物，統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)模式2，2、5和2、4、5陽性率在3個月住院患者之間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。2011年3、4和5月用ECLIA分別檢測2 990、2 791和3 005例住院患者的乙型肝炎表面標(biāo)志物，統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)2，2、5，2、4、5模式陽性率在3個月住院患者之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。2010年3個月11 923例住院患者和2011年3個月8 786例住院患者之間模式2，2、5和2、4、5陽性率比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.4 抗－HBs定量結(jié)果比較 見圖1。對ECLIA測定抗－HBs濃度大參考區(qū)間上限的3組2，2、5，2、4、5 3種模式組抗－HBs定量結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析，發(fā)現(xiàn)3組之間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2＝86.24，P＜0.01）。

2.5 HBsAg和抗－HBs同時陽性的比例 見表5。2011年3～5月用ECLIA檢測8 786例住院患者乙型肝炎血清標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)HBsAg和抗－HBs同時陽性的患者77例，陽性率為0.88%。2010年同期用ELISA檢測11 923例住院患者中僅測出11例患者為HBsAg和抗－HBs同時陽性，陽性率為0.09%。用Fisher精確概率檢驗(yàn)證實(shí)兩組之間HBsAg和抗－HBs同時陽性的比例差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

表3 11 923例/8 786例患者20種模式乙型肝炎血清學(xué)標(biāo)志物檢測結(jié)果（ELISA/ECLIA）

表4 表面抗體陽性3種模式的陽性結(jié)果[n（%）]

圖1 3種抗－HBs陽性模式組抗－HBs定量結(jié)果比較

表5 乙肝表面抗原和表面抗體同時陽性的比例

3 討 論

HBsAg是HBV S基因編碼的包膜蛋白，是機(jī)體感染HBV后最早出現(xiàn)的血清學(xué)標(biāo)志物之一[4]?？梗璈Bs是HBsAg刺激機(jī)體產(chǎn)生的保護(hù)性中和抗體，有清除HBV防止再感染的作用。但抗－HBs滴度較低時，不能阻止或全部阻止 HBV DNA在體內(nèi)復(fù)制。HBeAg和HBsAg都是HBV C基因前C區(qū)和C區(qū)翻譯產(chǎn)物，它們的大部分氨基酸序列相同，但是前者是一種分泌型蛋白，由感染后的肝細(xì)胞分泌[4－5]。HBeAg和HBcAg分別有其特異的抗原表位，可分別誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗－HBe和抗－HBc。抗－HBe一般存在于無癥狀HBV攜帶者及非活動期慢性肝炎患者中，一般在HBeAg消失后出現(xiàn)，表示HBV在體內(nèi)復(fù)制減少或終止，傳染性減弱或消失，病情開始恢復(fù)[4]?？梗璈Bc是人感染HBV后第一種出現(xiàn)的抗體。

HBV血清學(xué)5項(xiàng)標(biāo)志物同時檢測可以出現(xiàn)不同的結(jié)果模式[4，6]。本文資料證實(shí)，ELISA檢測的11 923例患者乙型肝炎血清學(xué)標(biāo)志物的結(jié)果匯總表現(xiàn)為20種不同模式，ECLIA檢測的8 786例患者乙型肝炎血清學(xué)標(biāo)志物的結(jié)果匯總表現(xiàn)為19種不同的模式。由此提示ELISA和ECLIA檢測住院患者乙型肝炎血清學(xué)標(biāo)志物都可出現(xiàn)多種不同的結(jié)果模式。兩種方法檢測乙型肝炎血清學(xué)標(biāo)志物都可出現(xiàn)的結(jié)果模式有15種。這15種包括全陰性及1，2，4，5，1、5，2、4，2、5，3、5，4、5，2、3、5，2、4、5，1、3、5，1、4、5，1、2、4、5陽性模式。應(yīng)用 ECLIA 檢測乙型肝炎血清學(xué)標(biāo)志物后，出現(xiàn)4種新的模式，即3、4、5，1、2、3、5，1、3、4、5，1、2、3、4、5陽性模式，同時原先用ELISA檢測可見的5種模式未能重現(xiàn)，這5種模式包括3，1、2，1、3，1、4，1、2、5陽性模式。

在ELISA檢測出現(xiàn)的20種結(jié)果模式中，陽性率大于1.00%的模式包括全陰性及2，2、4，2、5，4、5，2、4、5，1、3、5，1、4、5陽性模式；在ECLIA檢測出現(xiàn)的19種結(jié)果模式中，陽性率大于1.00%的模式包括全陰性及2，5，2、5，4、5，2、4、5，1、3、5，1、4、5陽性模式。因此全陰性模式及2，2、5，4、5，2、4、5，1、3、5，1、4、5陽性模式是HBV血清學(xué)5項(xiàng)標(biāo)志物檢測相對較常見到的結(jié)果模式。其臨床意義總結(jié)如下：全陰性模式表明患者未受HBV感染或感染后未產(chǎn)生有效免疫應(yīng)答；2陽性模式表明機(jī)體已經(jīng)產(chǎn)生保護(hù)性中和抗體，但抗體滴度低于保護(hù)性水平時，需要及時追加乙肝疫苗免疫接種；2、5陽性模式表明機(jī)體既往感染HBV，處在恢復(fù)期；4、5陽性模式提示機(jī)體既往感染HBV，體內(nèi)雖產(chǎn)生抗－HBe和抗－HBc，但是這兩種抗體無任何保護(hù)作用，對患者病情的判斷需要結(jié)合肝功能檢測及病毒核酸檢測結(jié)果；2、4、5陽性模式提示機(jī)體既往感染HBV，體內(nèi)已經(jīng)產(chǎn)生保護(hù)性抗－HBs，但是抗－HBe和抗－HBc仍然存在，對患者病情的判斷除了評價3種抗體相對水平外，還需要結(jié)合肝功能檢測及病毒核酸檢測結(jié)果；1、3、5陽性模式是通常所說的“大三陽”，出現(xiàn)這種結(jié)果模式的患者一般處在HBV感染的急性期或慢性活動期，病毒在體內(nèi)大量復(fù)制，傳染性強(qiáng)；1、4、5陽性模式是通常所說的“小三陽”，這種結(jié)果模式見于急性感染后病情趨于好轉(zhuǎn)或者見于HBV攜帶者。對于ECLIA檢測HBV血清學(xué)標(biāo)志物出現(xiàn)4種新的模式（3、4、5，1、2、3、5，1、3、4、5，1、2、3、4、5陽性模式），可能的解釋如下：3、4、5陽性模式若能排除HBsAg的帶現(xiàn)象，則提示患者感染HBV后處于HBeAg轉(zhuǎn)換期，體內(nèi)HBeAg和抗－HBe處于轉(zhuǎn)換過程中的動態(tài)平衡狀態(tài)[7]；1、2、3、5陽性模式提示患者體內(nèi)有抗－HBs，但不足以完全中和HBsAg，可能因?yàn)椴煌琀BV亞型感染或HBV S區(qū)基因突變導(dǎo)致 HBsAg和抗－HBs共同存在；1、3、4、5陽性模式提示患者感染HBV后處于“大三陽”和“小三陽”轉(zhuǎn)換期，體內(nèi)HBeAg和抗－HBe處于轉(zhuǎn)換過程中的動態(tài)平衡狀態(tài)，或者由于HBV的C區(qū)發(fā)生變異；1、2、3、4、5陽性模式是一種罕見模式，可能是患者處于多種抗病毒藥物治療過程中，病毒的S區(qū)或C區(qū)基因發(fā)生變異[8]。ECLIA檢測發(fā)現(xiàn)的HBsAg和抗－HBs共同陽性模式的總陽性率要高于傳統(tǒng)的ELISA，除了患者因素以外，檢測方法學(xué)可能是造成此種差異的重要原因之一。

對2010年和2011年3、4和5月住院患者2，2、5，2、4、5 3種模式陽性率分別進(jìn)行比較分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，ECLIA檢測出的2，2、5，2、4、5 3種模式陽性率在2011年3個月住院患者之間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，而ELISA檢測出的2，2、5，2、4、5 3種模式陽性率在3個月住院患者之間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。2010年3個月11 923例住院患者和2011年3個月8 786例住院患者之間模式2，2、5和2、4、5陽性率比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。這些發(fā)現(xiàn)提示對于全部用ECLIA檢測乙型肝炎血清學(xué)標(biāo)志物或既開展ECLIA又保留ELISA的實(shí)驗(yàn)室而言，在審核和解釋乙型肝炎血清學(xué)標(biāo)志物結(jié)果時需要注意這些差異性。

如前文所述，抗－HBs是HBsAg刺激機(jī)體產(chǎn)生的保護(hù)性中和抗體，有清除HBV防止再感染的作用。本文研究對2，2、5，2、4、5 3種抗－HBs陽性模式進(jìn)行分組，對3組間抗－HBs濃度水平進(jìn)行比較分析發(fā)現(xiàn)其差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，2、4、5陽性模式組抗體濃度水平要高于其他兩組，提示機(jī)體抗－HBs濃度水平可能與抗－HBe和（或）抗－HBc是否存在有一定關(guān)系。

[1] 中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會、感染病學(xué)分會.慢性乙型肝炎防治指南[J].中華肝臟病雜志，2005，13（12）：881－891.

[2] Hadziyannis E，Manesis E，Vassilopoulos D，et al.Performance characteristics of microparticle enzyme and chemiluminescence immunoassays for measurement of anti－HBc immunoglobulin M in sera of patients with HBeAg－negative chronic hepatitis B virus infection[J].Clin Vaccine Immunol，2008，15（2）：385－387.

[3] Huzly D，Schenk T，Jilg W，et al.Comparison of nine commercially available assays for quantification of antibody response to hepatitis B virus surface antigen[J].J Clin Microbiol，2008，46（4）：1298－1306.

[4] 何衛(wèi)平，趙軍.乙型肝炎病毒血清學(xué)標(biāo)志物臨床意義解讀[J].中華全科醫(yī)師雜志，2010，9（8）：516－518.

[5] 黃文林.分子病毒學(xué)[M].2版.北京：人民衛(wèi)生出版社.2006：519－521.

[6] 劉媛媛，辛武，韓忠學(xué).乙型肝炎血清學(xué)標(biāo)志物特殊模式的分析[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2011，32（4）：516－517.

[7] 邱振華，黃金波，曾在祥.乙肝血清學(xué)標(biāo)志物HBeAg與抗HBe共存模式分析[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2010，9（12）：895－896.

[8] 徐兆珍，關(guān)偉，張淑靜，等.乙型肝炎表面抗原抗體同時存在的血清學(xué)模式與病毒血癥的關(guān)系[J].臨床輸血與檢驗(yàn)，2010，12（3）：216－218.