• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    轉(zhuǎn)基因抗蟲棉抗性純度對產(chǎn)量的影響

    2013-06-07 05:56:47孫國清任茂智孟志剛陳全家曲延英郭三堆
    生物技術(shù)進展 2013年1期
    關(guān)鍵詞:抗蟲棉殺蟲純度

    孫國清, 張 銳, 王 遠, 任茂智, 孟志剛, 周 燾, 陳全家, 曲延英, 郭三堆*

    1.中國農(nóng)業(yè)科學院生物技術(shù)研究所,國家農(nóng)作物基因資源與遺傳改良重大科學工程,北京100081;

    2.新疆農(nóng)業(yè)大學農(nóng)學院,烏魯木齊830052

    轉(zhuǎn)基因抗蟲棉抗性純度對產(chǎn)量的影響

    孫國清1,2, 張 銳1, 王 遠1, 任茂智1, 孟志剛1, 周 燾1, 陳全家2, 曲延英2, 郭三堆1*

    1.中國農(nóng)業(yè)科學院生物技術(shù)研究所,國家農(nóng)作物基因資源與遺傳改良重大科學工程,北京100081;

    2.新疆農(nóng)業(yè)大學農(nóng)學院,烏魯木齊830052

    外源殺蟲基因能否在轉(zhuǎn)基因棉花中高效、穩(wěn)定表達是影響轉(zhuǎn)基因棉花應(yīng)用前景的關(guān)鍵。本文從轉(zhuǎn)基因棉花殺蟲蛋白表達水平出發(fā),通過在轉(zhuǎn)基因棉花品種的種子中混雜非轉(zhuǎn)基因棉花品種的種子,研究不同品種純度的轉(zhuǎn)基因棉花殺蟲蛋白表達水平對轉(zhuǎn)基因抗蟲棉的抗蟲性影響。本研究選用2個轉(zhuǎn)基因抗蟲棉品種GK12和SGK321,設(shè)置了8種混雜比例,通過分子檢測和室內(nèi)生測試驗表明,隨著抗蟲純度的下降,棉鈴蟲危害等級升高,幼蟲校正死亡率下降,品種抗蟲能力下降;從田間實驗結(jié)果來看,隨著抗蟲純度的下降,鈴數(shù)減少,空果枝數(shù)增多,最終致使產(chǎn)量大幅下降,從而出現(xiàn)所謂的“抗蟲棉不抗蟲”現(xiàn)象。結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)基因抗蟲棉品種抗性純度至少要達到97%,才可以保證產(chǎn)量不至于損失太大。

    抗蟲性;產(chǎn)量;種子純度;轉(zhuǎn)基因棉花

    我國轉(zhuǎn)基因抗蟲棉推廣歷時十七年,為我國的農(nóng)業(yè)發(fā)展做出了巨大貢獻[1]。但是,隨著品種的推廣應(yīng)用,生產(chǎn)上應(yīng)用品種的混雜問題也越來越突出。品種混雜會造成品種的種性降低,質(zhì)量下降。由于目前市場上,很多品種(系)性狀還未穩(wěn)定,利用雜種F2代進行種植,某些位點可能還處于分離期,或是由于天然異交原因使一些品種在推廣過程中產(chǎn)生混雜,致使品種內(nèi)可能不同程度混有非轉(zhuǎn)基因棉花種子,對其抗蟲性和產(chǎn)量產(chǎn)生影響。

    棉花屬于錦葵科棉屬,為常異花授粉作物,天然異交率達3%~20%,高的可達60%,以自花授粉為主,主要性狀上多處于同質(zhì)結(jié)合狀態(tài),但由于天然異交率較高,遺傳基礎(chǔ)比較復(fù)雜,群體則多處于異質(zhì)結(jié)合狀態(tài)[2]。生產(chǎn)上使用的品種多為群體品種或雜交種。因此,棉花種子在使用過程中,容易由于天然異交的原因,從而導(dǎo)致品種純度降低。同時,棉花種子生產(chǎn)環(huán)節(jié)多,也容易產(chǎn)生各種形式的機械混雜。另外,我國多數(shù)棉花生態(tài)區(qū)內(nèi)廣泛存在同一時期多種品種共存的現(xiàn)象,這樣就很可能造成品種間雜交,從而導(dǎo)致純度下降及品種退化現(xiàn)象。品種退化現(xiàn)象的突出表現(xiàn)是群體中異型株的增多[3]。隨著品種純度的下降,產(chǎn)量和經(jīng)濟性狀亦相應(yīng)下降。然而,品種混雜是否會對轉(zhuǎn)基因抗蟲棉的抗蟲性產(chǎn)生影響及其影響程度,這一問題前人尚未進行深入研究。本研究選用兩個轉(zhuǎn)基因抗蟲棉品種GK12[4~6]和SGK321[7]都是具有自主知識產(chǎn)權(quán),且在國內(nèi)應(yīng)用較廣的轉(zhuǎn)基因抗蟲棉品種中,設(shè)置8種混雜比例,對品種混雜是否會對轉(zhuǎn)基因抗蟲棉的抗蟲性產(chǎn)生影響進行了系統(tǒng)分析。

    1 材料與方法

    1.1 實驗品種和試劑

    選取本實驗室保存的轉(zhuǎn)Cry1Ab/Ac基因單價抗蟲棉花品種GK12及其受體泗棉3號;轉(zhuǎn)Cry1Ab/Ac、CpTI基因雙價抗蟲棉花品種SGK321及其受體石遠321。

    Envirologix蛋白檢測試劑盒購自美國一龍公司;尿素、NaOH、無水乙醇等其他試劑均使用國產(chǎn)分析純試劑。

    1.2 實驗方法

    分別于2008年、2009年在北京平谷試驗基地、河北廊坊試驗基地種植2個轉(zhuǎn)基因棉花品種,在轉(zhuǎn)基因品種中混雜非轉(zhuǎn)基因品種種子(其受體品種),共設(shè)置8種混雜比例,即100%、99%、97%,95%、90%、80%、50%和0%,每個比例設(shè)三個重復(fù),種植田間管理同大田。待出苗長至3片真葉時,進行卡那霉素涂抹鑒定,卡那霉素鑒定濃度為1 mg/mL,按照預(yù)定混雜比例撥除多余植株。

    1.3 抗性純度檢測

    采用金標試紙條(重慶金標公司)方法檢測抗蟲基因的表達產(chǎn)物。隨機抽取樣品種子30粒進行檢測,三次重復(fù)。

    1.4 外源基因的分子鑒定

    采用改良CTAB方法[8,9]提取棉花基因組,對外源基因在棉花基因組中的拷貝數(shù)進行鑒定。采用通用引物進行PCR反應(yīng),引物序列為:通用1:5′-CCTCTTCTAACTTGCCCTCCGC-3′;通用2:5′-CACCCACGATGTTACCGAGTG-3′。引物由寶生物工程(大連)有限公司合成。PCR反應(yīng)所需酶及反應(yīng)底物等均購自寶生物工程(大連)有限公司。PCR反應(yīng)擴增程序為:95℃5min;94℃1min,55℃1 min,72℃1.5 min,30個循環(huán);72℃10 min。

    1.5 殺蟲蛋白的測定

    使用Envirologix試劑盒定量蛋白質(zhì)表達量。在苗期、蕾期、花期、鈴期4個棉花生育期間,隨機采集從頂端數(shù)第一片完全初展開頂葉、蕾期的頂葉和小蕾(直徑約0.5~0.7 cm)、花期的頂葉、小蕾和花器官、鈴期的頂葉、小蕾、花器官和小鈴(直徑約1.2 cm)置于密封袋中,用液氮速凍后置于冰盒內(nèi),迅速帶回實驗室內(nèi)進行棉花抗蟲基因表達蛋白的檢測。在棉花生長的每個生育期,每個棉花品種隨機采樣量為10片(個),每10片(個)樣品混樣稱取0.1 g,各取三次,液氮冷凍后,按照Envirologix試劑盒提供的方法提取蛋白質(zhì),在450 nm處測定其吸光值,根據(jù)標準曲線得出檢測數(shù)據(jù)。

    1.6 室內(nèi)接蟲鑒定

    室內(nèi)接蟲鑒定檢測技術(shù)參照農(nóng)業(yè)部953號公告檢測標準[10]進行。

    1.7 數(shù)據(jù)分析

    數(shù)據(jù)采用SPSS17.0軟件處理分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 品種純度和真實性鑒定

    為了確保樣品的純度和轉(zhuǎn)基因品種的真實性,首先對樣品基因組進行Bt基因的分子鑒定。隨機抽取10份樣品,提取基因組進行檢測。Bt基因的PCR檢測結(jié)果見圖1,在1~10泳道都擴增出和陽性對照相同的大約600bp的條帶,證明樣品中含有Bt殺蟲基因;Southern雜交實驗分析轉(zhuǎn)基因品種中Bt基因在植物體內(nèi)的整合情況,結(jié)果見圖2,GK12中含有Bt基因,為7個拷貝;SGK321中也含有Bt基因,為2個拷貝。

    圖1 轉(zhuǎn)基因抗蟲棉的PCR檢測的部分結(jié)果Fig.1 PCR of transgenic insect-resistant cotton.

    圖2 轉(zhuǎn)基因抗蟲棉的Southern雜交結(jié)果Fig.2 Southern blot of transgenic insect-resistant cotton.

    2.2 殺蟲蛋白的時空表達

    在確保獲得純度相對較高的樣品材料后,采用Envirologix試劑盒檢測Bt基因在GK12和SGK321中的時空表達水平,結(jié)果見圖3。從圖中可以看出,兩個品種的抗蟲蛋白表達均具有時空特異性。從時間上來看,兩個品種殺蟲蛋白的表達量基本呈現(xiàn)出前期表達量高,后期表達量低的趨勢,但葉和蕾在8月11日時有一個較高的峰值,隨后又表現(xiàn)出下降的趨勢。從空間上來看,兩個品種葉片中殺蟲蛋白的表達量最高,其次為蕾和花,鈴中殺蟲蛋白的表達量相對較低。比較BT

    殺蟲蛋白在GK12和SGK321的表達量,發(fā)現(xiàn)無論是在葉、蕾、花,還是鈴中,SGK321中Bt殺蟲蛋白的表達量都高于GK12中Bt殺蟲蛋白的表達量。

    圖3 GK12和SGK321中BT殺蟲蛋白的時空表達Fig.3 The spatial and temporal expression of BT insecticidal protein in GK12 and SGK321.

    2.3 混雜比例與抗蟲性間的關(guān)系

    混雜不同比例非轉(zhuǎn)基因種子的GK12和SGK321兩個品種的植株葉片危害等級與校正死亡率間表1。結(jié)果表明,隨著GK12和SGK321的種子純度逐漸降低——即混雜的非轉(zhuǎn)基因種子比例的升高,棉鈴蟲的危害等級逐漸升高,棉鈴蟲的死亡率逐漸降低。其中,GK12的危害等級由0.2上升到4.6,危害等級與種子純度間的相關(guān)系數(shù)為0.93,達到極顯著相關(guān)(P<0.01);棉鈴蟲校正死亡率也從97.67%下降到0,棉鈴蟲校正死亡率與種子純度間的相關(guān)系數(shù)為0.96,達到極顯著相關(guān)(P<0.01)。SGK321的危害等級由0.3上升到4.8,危害等級與種子純度間的相關(guān)系數(shù)為0.94,達到極顯著相關(guān)(P<0.01);棉鈴蟲校正死亡率也從97.5%下降到0,棉鈴蟲校正死亡率與種子純度間的相關(guān)系數(shù)為0.99,達到極顯著水平(P<0.01)。棉鈴蟲食喂轉(zhuǎn)基因抗蟲棉葉片時,雙價抗蟲棉SGK321比單價抗蟲棉GK12校正死亡率要高。由此可見,純度的下降對棉花的抗蟲性存在極顯著影響。

    表1 GK12和SGK321不同混雜比例對葉片危害等級及校正死亡率的影響Table 1 The effect of seedsmixed proportion on bollworm damage level and corrected mortality of H.armigera larvae in GK12 and SGK321.

    2.4 混雜比例與產(chǎn)量間的關(guān)系

    轉(zhuǎn)基因品種的不同混雜比例對棉花產(chǎn)量有影響。結(jié)果表明,無論是GK12還是SGK321,產(chǎn)量均與種子純度呈顯著正相關(guān)關(guān)系(圖4,表2)。其中,GK12的產(chǎn)量與種子純度間達到極顯著相關(guān)水平;SGK321的產(chǎn)量與種子純度間達到顯著相關(guān)水平。隨著轉(zhuǎn)基因品種種子純度的降低,混雜的非轉(zhuǎn)基因種子的比例升高,該品種的產(chǎn)量顯著降低。

    解析產(chǎn)量降低的因素,發(fā)現(xiàn)主要是由于品種的混雜致使整個群體的株高下降,子葉始節(jié)升高,始果枝節(jié)位下降,果枝數(shù)減少,空果枝數(shù)增多,鈴數(shù)減少,單鈴重降低,品質(zhì)變劣,以至于最終產(chǎn)量大幅降低?;祀s對于品種群體的特征特性影響隨著混雜程度的加深而越來越大,整個群體更易遭受棉鈴蟲的危害,導(dǎo)致棉結(jié)鈴率降低,空果枝數(shù)增高,單鈴重減小,最終產(chǎn)量大幅下降。從混雜比例來看,GK12中純度達97%時,與100%GK12在產(chǎn)量上的差異即達到顯著水平;SGK321中純度達95%時,與100%sGK321在產(chǎn)量中差異達到顯著水平,也就是說,轉(zhuǎn)基因抗蟲棉品種抗性純度至少要達到97%,才可以保證產(chǎn)量不至于損失太大。

    圖4 GK12和SGK321不同混雜比例對產(chǎn)量的影響Fig.4 The effect of seedsmixed proportion on cotton yields of GK12 and SGK321.

    表2 GK12和SGK321不同混雜比例對產(chǎn)量影響的差異顯著性分析Table 2 Significance analysis of the effect f o seedsmixed proportion on cotton yields of GK12 and SGK321.

    3 討論

    品種的混雜嚴重影響著品種的農(nóng)藝性狀、品質(zhì)性狀和產(chǎn)量,直接影響了品種的生命力,加速了品種的退化。而造成品種混雜的原因很多,如機械混雜、人為混雜,自然混雜等,因此,應(yīng)當盡量避免品種混雜現(xiàn)象的發(fā)生。本文首次利用室內(nèi)生測,殺蟲蛋白檢測技術(shù)和農(nóng)藝性狀等方法相結(jié)合綜合分析了品種抗性純度對轉(zhuǎn)基因棉花產(chǎn)量的影響,科學的論斷出轉(zhuǎn)Bt基因棉花品種抗性的下降對于產(chǎn)量的影響是非常顯著的,單價抗蟲棉要比雙價抗蟲棉品種抗性純度要更為嚴格些,在今后的育種過程中,有意識的利用雙價抗蟲棉品種作為親本是很有必要的,不僅延緩了棉鈴蟲對Bt殺蟲蛋白的抗性,而且提高了產(chǎn)量。在品種推廣過程中,盡量保證品種的純度至少要達到97%以上,在蟲害發(fā)生時期才可能保證產(chǎn)量不受較大的損失。

    [1] 張銳,王遠,孟志剛,等.國產(chǎn)轉(zhuǎn)基因抗蟲棉研究回顧與展望[J].中國農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報,2007,9(4):32-42.

    [2] 石躍進,袁鈞,潘轉(zhuǎn)霞,等.棉花的自花授粉與天然異交[J].中國棉花,2001,28(1):7-8.

    [3] 王瑛,張新建.淺談棉花品種退化的原因及對策[J].種子世界,2005,8:32-33.

    [4] 郭三堆,崔洪志.中國抗蟲棉GFM Cry1A殺蟲基因的合成及表達載體的構(gòu)建[J].中國農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報,2000,2(2):21 -26.

    [5] 楊玉強,劉軍,楊瑞憲,等.轉(zhuǎn)基因抗蟲棉GK12的進一步純合和選育[J].農(nóng)業(yè)科技通訊,2006,7:36.

    [6] 眭書祥,趙國忠,李愛國,等.轉(zhuǎn)基因抗蟲棉種質(zhì)資源GK12性狀與利用情況分析[J].河北農(nóng)業(yè)科學,2011,15(5):61-64.

    [7] 眭書祥,趙國忠,李愛國,等.轉(zhuǎn)Bt+CpTI基因抗蟲棉種質(zhì)資源SGK321性狀與利用分析[J].科技導(dǎo)報,2008,26(9):42-45.

    [8] 宋國立,崔榮霞,王坤波,等.改良CTAB法快速提取棉花DNA[J].棉花學報,1998,10(5):273-275.

    [9] Huang J,Ge X,Sun M.Modified CTAB protocol using a silicamatrix for isolation ofplantgenomic DNA[J].Biotechnique,2000,28(3):432-434.

    [10] 中華人民共和國國家標準.轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品環(huán)境安全檢測抗蟲棉花第1部分:對靶標害蟲的抗蟲性[S].農(nóng)業(yè)部953號公告-12.1-2007,2007-12-18.

    Influence of Seed Purity on Insect Resistance and Yield in Transgenic Cotton

    SUN Guo-qing1,2,ZHANG Rui1,WANG Yuan1,REN Mao-zhi1,MENG Zhi-gang1,ZHOU Tao1,CHEN Quan-jia2,QU Yan-ying2,GUO San-dui1*
    1.Biotechnology Research Institute,National Key Facility of Crop Gene Resources and Genetic Improvement,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Beijing 100081,China;
    2.College of Agronomy,Xinjiang Agricultural University,Urumqi830052,China

    The efficient and stable expression of exogenous insecticidal genes in transgenic cotton is the key of transgenic cotton application.In order to compare the insect-resistant effect of transgenic cotton under different seeds purity,two transgenic varieties GK12 and SGK321 were mixed with non-genetically modified cotton seeds in eight different proportion for evaluating insecticidal protein expression level,themolecular detection and indoor hygiene tests showed thatwith the decline in the purity of insect resistance,cotton bollworm damage level gradually increased,corrected mortality of H.armigera larvae decreased,varieties of insect-resistant capacity declined.The field experiments indicated thatwith the decline of the insect resistant purity,boll number reduced,the number of empty fruit branches increased,which ultimately led to a sharp decline in production,and thus gave rise to the so-called“Bt cotton is not insect resistant”.In conclusion,the decline of seed purity had significant effection on insect resistance and cotton yield.In order to ensure high yield,the purity of transgenic insect-resistant cotton should be higher than 97%.

    insect resistance;yield;seed purity;transgenic cotton

    10.3969/j.issn.2095-2341.2013.01.06

    2012-12-05;接受日期:2012-12-25

    國家轉(zhuǎn)基因生物新品種培育重大專項“轉(zhuǎn)基因耐旱耐鹽堿棉花新品種培育”(2011ZX08005-004)資助。

    孫國清,助理研究員,博士,研究方向為植物基因工程。*通訊作者:郭三堆,研究員,從事棉花基因工程研究。E-mail:guosandui@caas.cn

    猜你喜歡
    抗蟲棉殺蟲純度
    基因工程方法讓天敵昆蟲保護有了依據(jù)
    抗蟲棉的故事
    退火工藝對WTi10靶材組織及純度的影響
    以“肥”殺蟲 藥肥兩用 一舉多得
    色彩的純度
    童話世界(2017年29期)2017-12-16 07:59:32
    常用殺蟲中藥殺蟲效果比較及其配伍的初步研究
    間接滴定法測定氯化銅晶體的純度
    冬青油對蠕形螨體外殺蟲的作用研究
    對氯水楊酸的純度測定
    家用衛(wèi)生殺蟲產(chǎn)品質(zhì)量安全知識
    欧美日韩av久久| av国产精品久久久久影院| 国产高清国产精品国产三级| 丝袜美足系列| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 中文亚洲av片在线观看爽| 亚洲 国产 在线| 精品电影一区二区在线| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 日本精品一区二区三区蜜桃| 18禁美女被吸乳视频| 欧美日韩视频精品一区| 夫妻午夜视频| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 国产亚洲av高清不卡| 久久久久久免费高清国产稀缺| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 亚洲熟妇熟女久久| 中国美女看黄片| 国产单亲对白刺激| 一级毛片女人18水好多| 一级黄色大片毛片| 99国产极品粉嫩在线观看| 亚洲精品一二三| 欧美成人性av电影在线观看| 午夜老司机福利片| 桃红色精品国产亚洲av| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 精品午夜福利视频在线观看一区| 精品国产乱子伦一区二区三区| a级毛片黄视频| 婷婷精品国产亚洲av在线| 天堂动漫精品| 亚洲五月天丁香| 成年女人毛片免费观看观看9| 国产1区2区3区精品| 久久香蕉精品热| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 黄色视频,在线免费观看| 国产精品久久视频播放| 久久性视频一级片| 视频区图区小说| 成人影院久久| 99国产精品一区二区三区| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 搡老岳熟女国产| www.999成人在线观看| 99国产精品一区二区蜜桃av| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 国产精品电影一区二区三区| 中文亚洲av片在线观看爽| 国产高清激情床上av| 91av网站免费观看| 亚洲欧美激情综合另类| 男女高潮啪啪啪动态图| 亚洲欧美一区二区三区久久| 国产高清视频在线播放一区| 午夜免费观看网址| 亚洲九九香蕉| x7x7x7水蜜桃| 精品国内亚洲2022精品成人| 亚洲欧美激情在线| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 亚洲精品av麻豆狂野| 757午夜福利合集在线观看| 久久久久亚洲av毛片大全| 99在线人妻在线中文字幕| 超色免费av| 国产亚洲欧美98| 国产激情欧美一区二区| 一二三四在线观看免费中文在| 色在线成人网| 嫩草影院精品99| 后天国语完整版免费观看| 色尼玛亚洲综合影院| 美女国产高潮福利片在线看| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 精品国产超薄肉色丝袜足j| 丁香欧美五月| 露出奶头的视频| 欧美日韩视频精品一区| 最近最新中文字幕大全电影3 | 一边摸一边抽搐一进一小说| 成人手机av| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 欧美国产精品va在线观看不卡| 老熟妇仑乱视频hdxx| 亚洲av美国av| 人成视频在线观看免费观看| 亚洲免费av在线视频| 脱女人内裤的视频| av免费在线观看网站| 亚洲国产毛片av蜜桃av| av在线天堂中文字幕 | av电影中文网址| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 18禁国产床啪视频网站| 亚洲精华国产精华精| 日韩欧美在线二视频| 成年版毛片免费区| 国产主播在线观看一区二区| 日本a在线网址| 首页视频小说图片口味搜索| 在线观看舔阴道视频| 自线自在国产av| 午夜福利免费观看在线| 欧美精品一区二区免费开放| 男女高潮啪啪啪动态图| 亚洲一区二区三区不卡视频| 亚洲三区欧美一区| av视频免费观看在线观看| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 操美女的视频在线观看| 亚洲 欧美一区二区三区| 日本黄色视频三级网站网址| 在线观看一区二区三区| 天天添夜夜摸| 操出白浆在线播放| 国产成人av激情在线播放| 激情视频va一区二区三区| 在线观看一区二区三区激情| av有码第一页| 波多野结衣一区麻豆| 亚洲成国产人片在线观看| 中文字幕高清在线视频| 亚洲伊人色综图| 国产免费现黄频在线看| 午夜精品久久久久久毛片777| 亚洲在线自拍视频| 一级黄色大片毛片| av在线播放免费不卡| 51午夜福利影视在线观看| 久久久国产一区二区| 91九色精品人成在线观看| 国产深夜福利视频在线观看| 国产亚洲欧美在线一区二区| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 在线观看免费高清a一片| ponron亚洲| 五月开心婷婷网| 99在线视频只有这里精品首页| 黑人欧美特级aaaaaa片| 身体一侧抽搐| 天堂√8在线中文| 两性夫妻黄色片| 夫妻午夜视频| 一级黄色大片毛片| 国产成年人精品一区二区 | 动漫黄色视频在线观看| 亚洲精品一二三| 中文欧美无线码| 色尼玛亚洲综合影院| 美女国产高潮福利片在线看| 99re在线观看精品视频| 午夜亚洲福利在线播放| 操美女的视频在线观看| 丝袜美足系列| 久久国产乱子伦精品免费另类| 极品教师在线免费播放| 亚洲成国产人片在线观看| 成人精品一区二区免费| 久久欧美精品欧美久久欧美| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 国产麻豆69| 午夜91福利影院| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 亚洲黑人精品在线| 欧美大码av| 欧美国产精品va在线观看不卡| 国产一区在线观看成人免费| av网站免费在线观看视频| 国产精品永久免费网站| 亚洲av片天天在线观看| 国产在线观看jvid| 免费搜索国产男女视频| 国产av一区在线观看免费| 亚洲av五月六月丁香网| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 欧美日韩乱码在线| cao死你这个sao货| 老司机午夜福利在线观看视频| 无限看片的www在线观看| 日本五十路高清| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 久久九九热精品免费| 看免费av毛片| 99久久人妻综合| 午夜福利在线免费观看网站| 性少妇av在线| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 国产男靠女视频免费网站| 中文字幕人妻丝袜制服| 嫁个100分男人电影在线观看| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 日韩欧美一区视频在线观看| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 国产精品 欧美亚洲| 国产乱人伦免费视频| 两个人免费观看高清视频| 一边摸一边抽搐一进一小说| 天堂影院成人在线观看| 亚洲精品成人av观看孕妇| 99精品欧美一区二区三区四区| 69精品国产乱码久久久| 精品卡一卡二卡四卡免费| 97碰自拍视频| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 日韩视频一区二区在线观看| 久久久久九九精品影院| 人人澡人人妻人| 午夜视频精品福利| 久久久水蜜桃国产精品网| 免费在线观看亚洲国产| 黑人欧美特级aaaaaa片| 精品电影一区二区在线| 黄频高清免费视频| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 久久久久久免费高清国产稀缺| 99在线人妻在线中文字幕| 久久这里只有精品19| 亚洲国产精品合色在线| 一区福利在线观看| 亚洲国产欧美一区二区综合| 黑人欧美特级aaaaaa片| 18禁观看日本| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 国产精品久久电影中文字幕| 不卡av一区二区三区| 精品人妻在线不人妻| 黄频高清免费视频| 国产av一区在线观看免费| 丝袜在线中文字幕| 老汉色av国产亚洲站长工具| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 超碰成人久久| 精品人妻在线不人妻| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 一区二区三区国产精品乱码| av中文乱码字幕在线| 精品福利永久在线观看| 91大片在线观看| 12—13女人毛片做爰片一| 90打野战视频偷拍视频| www.www免费av| 中文字幕高清在线视频| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 亚洲一区二区三区欧美精品| 成人亚洲精品av一区二区 | 久久精品成人免费网站| 怎么达到女性高潮| 国产av在哪里看| 日日干狠狠操夜夜爽| 天堂影院成人在线观看| 成人国产一区最新在线观看| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 亚洲专区字幕在线| 搡老岳熟女国产| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 亚洲少妇的诱惑av| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 国产片内射在线| 动漫黄色视频在线观看| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 免费不卡黄色视频| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 午夜福利在线免费观看网站| 国产亚洲欧美精品永久| 中文亚洲av片在线观看爽| av在线天堂中文字幕 | 欧美日韩黄片免| 免费高清在线观看日韩| 国产成人精品久久二区二区91| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 久热爱精品视频在线9| 国产精品九九99| 色综合欧美亚洲国产小说| 一区二区三区激情视频| 成人免费观看视频高清| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 亚洲精品成人av观看孕妇| 岛国视频午夜一区免费看| 欧美日韩福利视频一区二区| 无限看片的www在线观看| 亚洲,欧美精品.| 欧美日韩福利视频一区二区| 老司机亚洲免费影院| 欧美老熟妇乱子伦牲交| e午夜精品久久久久久久| 欧美成人午夜精品| 91成年电影在线观看| 校园春色视频在线观看| 成年版毛片免费区| 免费高清视频大片| 午夜老司机福利片| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 两个人免费观看高清视频| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 宅男免费午夜| 中文欧美无线码| av国产精品久久久久影院| 国产又爽黄色视频| 在线观看免费午夜福利视频| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 精品一品国产午夜福利视频| 成人黄色视频免费在线看| 9191精品国产免费久久| 国产主播在线观看一区二区| 欧美日韩福利视频一区二区| 一本大道久久a久久精品| 亚洲第一青青草原| 婷婷丁香在线五月| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 国产伦人伦偷精品视频| 亚洲九九香蕉| 91麻豆av在线| 亚洲人成伊人成综合网2020| 国产av精品麻豆| 午夜91福利影院| 午夜免费鲁丝| 激情在线观看视频在线高清| 咕卡用的链子| 成人18禁在线播放| 欧美中文日本在线观看视频| 99久久精品国产亚洲精品| 无人区码免费观看不卡| 成人国语在线视频| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 中文字幕av电影在线播放| 脱女人内裤的视频| 国产成人精品久久二区二区免费| 黄片播放在线免费| 亚洲精品久久午夜乱码| 亚洲国产欧美网| 99精品在免费线老司机午夜| 老司机福利观看| 久久草成人影院| av片东京热男人的天堂| 色尼玛亚洲综合影院| 三级毛片av免费| 亚洲人成伊人成综合网2020| 天堂影院成人在线观看| netflix在线观看网站| 国产成+人综合+亚洲专区| 9热在线视频观看99| 久久国产精品影院| 成年版毛片免费区| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 国产成人系列免费观看| 亚洲视频免费观看视频| 俄罗斯特黄特色一大片| 两性夫妻黄色片| 性少妇av在线| 狂野欧美激情性xxxx| 久久久久精品国产欧美久久久| 午夜免费鲁丝| 曰老女人黄片| 亚洲少妇的诱惑av| 丰满的人妻完整版| 久久精品人人爽人人爽视色| 桃红色精品国产亚洲av| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 97人妻天天添夜夜摸| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 国产有黄有色有爽视频| 亚洲人成伊人成综合网2020| 不卡av一区二区三区| 成人三级黄色视频| 在线视频色国产色| 成人亚洲精品一区在线观看| 热99re8久久精品国产| 国产亚洲精品一区二区www| 乱人伦中国视频| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 欧美丝袜亚洲另类 | 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 中文字幕av电影在线播放| 久久婷婷成人综合色麻豆| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 久久久久久久精品吃奶| 母亲3免费完整高清在线观看| 久久草成人影院| 一本综合久久免费| 黄色女人牲交| 午夜精品在线福利| 精品国内亚洲2022精品成人| 乱人伦中国视频| 天堂中文最新版在线下载| av片东京热男人的天堂| 欧美日韩av久久| 欧美黑人精品巨大| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 国产精品野战在线观看 | 国产黄色免费在线视频| 怎么达到女性高潮| 老司机亚洲免费影院| 男女高潮啪啪啪动态图| 国产av一区在线观看免费| 精品一区二区三区av网在线观看| 亚洲专区中文字幕在线| 国产有黄有色有爽视频| www.精华液| 精品国产超薄肉色丝袜足j| av有码第一页| 国产亚洲欧美98| 欧美激情久久久久久爽电影 | 午夜影院日韩av| 久久中文字幕一级| 国产精品亚洲av一区麻豆| 搡老熟女国产l中国老女人| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 久久精品人人爽人人爽视色| 精品久久蜜臀av无| 超碰成人久久| 亚洲视频免费观看视频| 在线观看日韩欧美| 国产熟女xx| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 久久亚洲真实| 男女高潮啪啪啪动态图| 日韩中文字幕欧美一区二区| 亚洲av成人av| 精品午夜福利视频在线观看一区| 欧美成人午夜精品| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 国产av又大| 可以在线观看毛片的网站| 久久欧美精品欧美久久欧美| 久久久久久久久久久久大奶| 欧美久久黑人一区二区| 三上悠亚av全集在线观看| 国产成人精品无人区| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 长腿黑丝高跟| 一进一出抽搐动态| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 一区福利在线观看| 欧美色视频一区免费| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 最新在线观看一区二区三区| 麻豆成人av在线观看| 午夜福利在线免费观看网站| 免费av中文字幕在线| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 最近最新中文字幕大全免费视频| 91大片在线观看| 午夜影院日韩av| 久久久久国内视频| 9191精品国产免费久久| 午夜a级毛片| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 超碰成人久久| 亚洲视频免费观看视频| 日韩有码中文字幕| 香蕉久久夜色| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 国产97色在线日韩免费| 亚洲一区二区三区色噜噜 | 国产一区在线观看成人免费| 精品高清国产在线一区| 日本黄色视频三级网站网址| 黑丝袜美女国产一区| 精品第一国产精品| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 一进一出抽搐动态| 亚洲五月色婷婷综合| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 久久青草综合色| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 精品久久久久久电影网| 欧美日韩黄片免| 色精品久久人妻99蜜桃| av电影中文网址| 亚洲熟妇熟女久久| 日本三级黄在线观看| 国产精品影院久久| 成年人黄色毛片网站| 99国产精品一区二区三区| 天堂√8在线中文| 美女扒开内裤让男人捅视频| 国产野战对白在线观看| 成年人黄色毛片网站| 国产精品98久久久久久宅男小说| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 18禁观看日本| 丝袜人妻中文字幕| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 久久久久久久午夜电影 | 国产av一区二区精品久久| 亚洲欧美激情综合另类| 久久婷婷成人综合色麻豆| 午夜福利在线观看吧| 欧美激情久久久久久爽电影 | 久久久久久久午夜电影 | av视频免费观看在线观看| 亚洲一区高清亚洲精品| 韩国精品一区二区三区| av网站免费在线观看视频| 无限看片的www在线观看| 国产欧美日韩精品亚洲av| 黄色丝袜av网址大全| 国产xxxxx性猛交| 日本vs欧美在线观看视频| 欧美日韩黄片免| 十八禁人妻一区二区| 久热爱精品视频在线9| 亚洲七黄色美女视频| av电影中文网址| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 宅男免费午夜| 欧美另类亚洲清纯唯美| 国产亚洲精品第一综合不卡| 视频区图区小说| 日本黄色视频三级网站网址| 这个男人来自地球电影免费观看| 97人妻天天添夜夜摸| 国产亚洲精品久久久久5区| 一区二区三区国产精品乱码| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 91大片在线观看| 亚洲激情在线av| 亚洲精品国产一区二区精华液| 国产三级在线视频| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 高清毛片免费观看视频网站 | 国产又爽黄色视频| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 午夜精品久久久久久毛片777| 动漫黄色视频在线观看| 亚洲精华国产精华精| 9热在线视频观看99| 亚洲五月天丁香| 一本大道久久a久久精品| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 国产精品电影一区二区三区| 国产成年人精品一区二区 | 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 狂野欧美激情性xxxx| 国产男靠女视频免费网站| av片东京热男人的天堂| 嫩草影视91久久| 国产欧美日韩综合在线一区二区| ponron亚洲| 久久久国产成人免费| 久久婷婷成人综合色麻豆| 最近最新中文字幕大全免费视频| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 99国产综合亚洲精品| 午夜日韩欧美国产| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 一区二区三区国产精品乱码| 露出奶头的视频| 精品国产国语对白av| 国产黄a三级三级三级人| 久久国产亚洲av麻豆专区| 淫秽高清视频在线观看| 亚洲国产欧美网| 老汉色av国产亚洲站长工具| 久久热在线av| 精品乱码久久久久久99久播| 久久伊人香网站| 国产高清激情床上av| 午夜成年电影在线免费观看| 国产成人系列免费观看| www国产在线视频色| 久久人人精品亚洲av| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 午夜老司机福利片| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 热99re8久久精品国产| 新久久久久国产一级毛片| 99久久精品国产亚洲精品| 亚洲成人免费av在线播放| 亚洲一区高清亚洲精品| 国产在线观看jvid| 久久草成人影院| 在线观看免费视频网站a站| 一级片'在线观看视频| 日韩欧美一区视频在线观看| 国产精品久久电影中文字幕| 久久亚洲精品不卡| 久久久国产一区二区| 久热这里只有精品99| www.精华液| 1024香蕉在线观看| 91老司机精品| 天堂√8在线中文| 亚洲av片天天在线观看| 久久久国产精品麻豆| 精品国产国语对白av| 91av网站免费观看| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 狠狠狠狠99中文字幕| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 日本a在线网址| 超碰成人久久| 一级片免费观看大全| 曰老女人黄片| www.www免费av| 亚洲精品国产区一区二| 99在线视频只有这里精品首页| 黄色 视频免费看| 中文欧美无线码|