• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    人參皂苷Re對(duì)大鼠心室肌細(xì)胞鈉、鉀離子通道的影響

    2013-06-05 14:35:26孟紅旭姚明江劉建勛
    世界中醫(yī)藥 2013年10期
    關(guān)鍵詞:肌細(xì)胞灌流皂苷

    孟紅旭 姚明江 劉建勛

    (中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所,中藥藥理北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京,100091)

    人參皂苷Re對(duì)大鼠心室肌細(xì)胞鈉、鉀離子通道的影響

    孟紅旭 姚明江 劉建勛

    (中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所,中藥藥理北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京,100091)

    目的:觀察人參皂苷Re對(duì)大鼠心室肌細(xì)胞電壓依賴性的鈉、鉀離子通道的影響,揭示其抗心律失常的作用機(jī)制。方法:采用酶分法獲得單個(gè)大鼠心室肌細(xì)胞,在全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)模式下,記錄電壓依賴性鈉通道、瞬時(shí)外向鉀通道和內(nèi)向整流鉀通道電流,并觀察不同濃度的人參皂苷Re對(duì)電流幅度的影響。結(jié)果:給予人參皂苷Re(10,100μmol·L-1)后鈉通道電流幅度呈現(xiàn)減小的趨勢(shì),對(duì)通道電流幅度的抑制率分別為(25.5±5.7)%(n=3)和(46.2±18)%(n=4)。給予人參皂苷Re(10,100μmol·L-1)對(duì)瞬時(shí)外向鉀電流幅度略有抑制,洗脫后電流恢復(fù),其中100μmol·L-1人參皂苷對(duì)電流的抑制率為(13±9)%(n=3)。給予人參皂苷Re(10,100μmol·L-1)后內(nèi)向整流鉀電流幅度呈現(xiàn)逐漸減小的趨勢(shì),藥物洗脫后電流完全恢復(fù),(10,100μmol·L-1)對(duì)通道電流幅度的抑制率分別為(16.3±8.7)%(n=5)和(35.4±11.2)%(n=5)。結(jié)論:人參皂苷Re能夠抑制心室肌細(xì)胞電壓依賴性的鈉通道、瞬時(shí)外向鉀通道和內(nèi)向整流鉀通道電流發(fā)揮抗心律失常的作用。

    人參皂苷Re;膜片鉗;鈉通道電流;鉀通道電流

    人參皂苷Re(Ginsenoside Re)是人參根中的主要人參皂苷類物質(zhì),屬三醇類人參皂苷。大量研究證明人參皂苷對(duì)離體心肌細(xì)胞和多種動(dòng)物心肌缺血、心肌梗死、再灌注損傷均具有保護(hù)作用[1],從人參化學(xué)成分與抗心律失常構(gòu)效關(guān)系來看,人參皂苷Re抗心律失?;钚宰顝?qiáng)[2]。最近研究表明人參皂苷Re能夠通過抑制心肌細(xì)胞L-型鈣電流和增強(qiáng)延遲整流鉀電流縮短動(dòng)作電位發(fā)揮抗心律失常的作用[3],但是人參皂苷Re對(duì)鈉電流及其他類型鉀電流的作用還不清楚。我們?cè)谕ㄟ^膜片鉗技術(shù)觀察了人參皂苷Re對(duì)大鼠心室肌細(xì)胞電壓依賴性鈉通道、瞬時(shí)外向鉀通道和內(nèi)向整流鉀通道電流的影響。

    1 材料和方法

    1.1 藥物和試劑

    1.1.1 藥物 人參皂苷Re由中國(guó)藥品生物制品檢定所購(gòu)置;配液所需藥品除指定外皆由英國(guó)Alfa Aesar公司購(gòu)置。

    1.1.2 試劑(mmol/L) 無鈣臺(tái)式液:NaCl 140,KCl 5.4,NaH2PO40.33,MgCl21,Glucose 10,Hepes 10(pH7.4 NaOH);KB液:KOH 70,KCl 40,KH2PO420,Glutamic acid 50,MgCl23,Taurine 20,EGTA 0.5,Hepes 10,Glucose 10(pH7.4 KOH);記錄鈉電流細(xì)胞外液:Choline chloride 130,NaCl 10,MgCl21,NaH2PO40.33,CsCl 5.4,CaCl20.1,CoCl20.1,Glucose 10,HEPES 10(pH 7.4 CsOH);記錄鈉電流電極內(nèi)液:NaCl 5,MgATP 5,CsCl 20,CsF110,MgCl21 EGTA 5,HEPES 5(pH 7.2 CsOH);記錄鉀電流細(xì)胞外液:Choline chloride 135,KCl 5.4,MgCl21.1,CaCl21.8,CdCl20.5,Glucose 10,HEPES 10(pH 7.4 KOH);記錄鉀電流電極內(nèi)液:KCl 140,Na2ATP 5,MgCl21,EGTA 5,HEPES 10,Glucose 10,(pH 7.2 KOH)

    1.2 心室肌細(xì)胞的分離[4]取SD大鼠(180±10)g,♂,10%烏拉坦腹腔麻醉,迅速開胸取出心臟,在零度無鈣臺(tái)式液中剝離出主動(dòng)脈,懸掛于Langendorff心臟灌流裝置上,確保管口不超過主動(dòng)脈的心臟入口,棉線固定,行主動(dòng)脈逆行灌流,流量為7~8 mL/min。先用無鈣臺(tái)氏液灌流5 min,接著用含酶鈣臺(tái)氏液(0.4 mg/mL膠原酶Ⅱ(worthington)+0.03 mg/mL蛋白酶ⅩⅣ(sigma)+0.9 mg/mL牛血清白蛋白(sigma)+ CaCl20.05mmol/L)灌流19~24 min,最后用低鈣臺(tái)式液(CaCl20.4mmol/L)灌流5 min,剪取心室組織在KB液中剪碎,吹打,用100目篩網(wǎng)過濾,最后將細(xì)胞保存在KB液中,4℃低溫狀態(tài)下,細(xì)胞可存活36h。整個(gè)過程灌流液維持溫度在(37±1)℃,灌流液中充純氧氣。

    1.3 離子通道電流的記錄 通過電極拉制儀(PULL -100,美國(guó))拉制電極,使玻璃電極充電極內(nèi)液后阻抗達(dá)到2~4MΩ。吸取幾滴細(xì)胞懸液加入細(xì)胞池中,細(xì)胞貼壁后選擇桿狀、表面光滑、紋理清晰的心肌細(xì)胞,利用三維操縱器移動(dòng)電極貼近目標(biāo)細(xì)胞,并輕壓在細(xì)胞表面,稍加負(fù)壓即可形成1GΩ水平以上的高阻抗封接,再用較大負(fù)壓吸破細(xì)胞膜,形成全細(xì)胞記錄形式。實(shí)驗(yàn)過程由刺激采集軟件Pulse控制,經(jīng)膜片鉗放大器(EPC10,德國(guó)),通過模數(shù)轉(zhuǎn)換采集數(shù)據(jù),存放于計(jì)算機(jī)硬盤。

    記錄鈉電流:采用氯化膽堿替代細(xì)胞外大部分Na+,采用Co2+抑制電壓依賴性鈣通道,Cs+替換K+。給予細(xì)胞鉗制在-110 mV,給予-30mV,25ms的除極電壓,可以得到迅速活化,迅速緩慢失活的內(nèi)向電流,這種電流能夠被河豚毒素(TTX)0.001mmol·L-1阻斷。細(xì)胞鉗制在-120 mV,給予細(xì)胞一系列從-90 mV~40 mV,以10 mV步增,脈寬25 ms的測(cè)試電壓,可以記錄到隨不同刺激電壓產(chǎn)生的電流軌跡,測(cè)量各個(gè)電流軌跡的峰值電流制作給藥前后電流電壓曲線。記錄瞬時(shí)外向鉀通道電流:采用采用氯化膽堿替代細(xì)胞外Na+,采用Cd2+抑制電壓依賴性鈣通道。細(xì)胞鉗制在-70mV,給予細(xì)胞一系列從-40 mV~50 mV,以10 mV步增,脈寬250 ms的測(cè)試電壓,可以得到一組迅速活化,迅速失活的外內(nèi)向電流,這種電流能夠被4 -AP(0.5mmol·L-1)阻斷。記錄內(nèi)向整流鉀通道電流:將細(xì)胞鉗制在-40mV,給予細(xì)胞一系列從-120mV~30 mV,以10mV步增,脈寬500ms的測(cè)試電壓,可以得到一組幾乎不失活的穩(wěn)態(tài)電流,在超極化時(shí)為很大的內(nèi)向電流,去極化時(shí)變?yōu)檩^小的外向電流,這種電流可被TEA阻斷。

    2 結(jié)果

    2.1 人參皂苷Re對(duì)鈉通道電流的影響 給予人參皂苷Re(10,100μmol·L-1)后,單一去極化電壓刺激后,鈉通道電流幅度呈現(xiàn)逐漸減小的趨勢(shì)(圖1A),對(duì)通道電流幅度的抑制率分別為(25.5±5.7)%(n=3);(46.2±18)%(n=4)。給予不同的刺激電壓后,各電流峰值呈減小趨勢(shì)(圖1B)制作電流電壓曲線后發(fā)現(xiàn)給藥后電流電壓曲線上移,峰值電壓無明顯改變(圖1C)。

    圖1 人參皂苷Re對(duì)鈉電流的抑制作用:A.人參皂苷Re(10.100μmol·L-1)對(duì)電流峰值的作用,洗脫后回復(fù)明顯。B.人參皂苷Re對(duì)一組刺激電壓誘導(dǎo)出的鈉電流軌跡影響。c.取電流峰值制作電流電壓曲線。

    2.2 人參皂苷Re對(duì)瞬時(shí)外向鉀通道電流(Ito)和內(nèi)向整流鉀通道電流(Ik1)的影響 在記錄兩種鉀電流時(shí)我們發(fā)現(xiàn)在受到組合電壓刺激后通道電流會(huì)出現(xiàn)隨時(shí)間經(jīng)過的自發(fā)衰減,對(duì)評(píng)價(jià)藥物作用發(fā)生影響,因此在觀察藥物的作用時(shí),采用雙刺激電壓。給予人參皂苷Re(10,100μmol·L-1)對(duì)后Ito幅度略有抑制(圖2A),,物洗脫后電流恢復(fù),其中100μmol·L-1人參皂苷對(duì)電流的抑制率為(13±9)%(n=3)。給予人參皂苷Re(10,100μmol·L-1)后Ik1幅度呈現(xiàn)逐漸減小的趨勢(shì),藥物洗脫后電流完全恢復(fù)(圖2B)。經(jīng)過統(tǒng)計(jì)(10,100μmol·L-1)人參皂苷Re對(duì)通道電流幅度的抑制率分別為(16.3±8.7)%(n=5)和(35.4± 11.2)%(n=5)。

    圖2 人參皂苷Re對(duì)鉀電流的抑制作用:A.人參皂苷Re(10,100μmol·L-1)對(duì)雙刺激電壓誘導(dǎo)出的Ito軌跡影響;B.人參皂苷Re(10,100μmol·L-1)對(duì)雙刺激電壓誘導(dǎo)出的Ik1軌跡影響。

    3 討論

    鈉通道一般是I類抗心律失常藥物的靶點(diǎn)。近些年心肌細(xì)胞的電生理研究表明:缺血后細(xì)胞內(nèi)的無氧代謝導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)pH值的降低及由此引發(fā)的細(xì)胞內(nèi)Na+超載,過多的Na+進(jìn)入導(dǎo)致Na+-Ca2+交換作用的反轉(zhuǎn),即細(xì)胞外的Ca2+流入細(xì)胞內(nèi),排出細(xì)胞內(nèi)過多的Na+,細(xì)胞內(nèi)的游離Ca2+增加,此時(shí),由于缺氧使心肌細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體等細(xì)胞器攝取Ca2+能力下降,從而導(dǎo)致了Ca2+超載的發(fā)生。細(xì)胞內(nèi)的Ca2+超載會(huì)引起磷脂酶、蛋白水解酶等的激活,導(dǎo)致肌原纖維攣縮斷裂,生物膜機(jī)械損傷,細(xì)胞骨架破壞,心肌細(xì)胞發(fā)生不可逆損傷[5-6]。因此,通過抑制鈉通道來抑制Na+超載,從而阻斷Ca2+超載的發(fā)生對(duì)心肌細(xì)胞的缺氧保護(hù)作用具有重要意義。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),人參皂苷Re能夠濃度依賴性的抑制心肌細(xì)胞鈉電流,表明人參皂苷Re抗心律失常的作用,可能與此有關(guān)。

    傳統(tǒng)Ⅲ類抗心律失常藥通過阻滯心肌的鉀通道發(fā)揮作用,心肌細(xì)胞膜上的鉀通道亞型多,性質(zhì)復(fù)雜。Ik1主要作用在于維持心肌細(xì)胞的靜息膜電位,在膜超極化狀態(tài)下,鉀離子具有內(nèi)流趨勢(shì),使膜恢復(fù)靜息期電位;在去極化狀態(tài)下,鉀離子具有外流趨勢(shì),恢復(fù)膜原有的極化狀態(tài)[7]。人參皂苷Re抑制Ik1的內(nèi)向成分,可能在靜息期使膜電位向超極化方向變化,膜興奮性降低,對(duì)于閾下刺激或“額外”刺激反應(yīng)性降低,發(fā)揮其抗心律失常的作用。

    心肌細(xì)胞的鈉通道密度大且通道電流動(dòng)力過程相當(dāng)快,所以由串聯(lián)電阻的電壓引起鉗制水平的漂移和對(duì)膜電容充放電速度的影響對(duì)所測(cè)INa干擾非常嚴(yán)重,因此對(duì)串聯(lián)電阻和膜電容補(bǔ)償要求很高。為減少上述干擾,本實(shí)驗(yàn)在測(cè)定INa時(shí),用氯化膽堿代替部分氯化鈉,使細(xì)胞內(nèi)外鈉離子濃度差降至30mmol/L,并在室溫下(20~22℃),而不采取通常的37℃進(jìn)行實(shí)驗(yàn),這樣可明顯減少INa幅度,保證了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

    我們的研究首次發(fā)現(xiàn)人參皂苷Re能夠抑制心肌細(xì)胞鈉電流和內(nèi)向整流的鉀電流,這個(gè)結(jié)果表明人參皂苷Re不僅通過抑制L-型鈣電流和增強(qiáng)延遲整流鉀電流,而且通過抑制鈉電流和內(nèi)向整流的鉀電流發(fā)揮抗心律失常的作用。

    [1]趙立波,佟力,趙洪序,等.人參總皂甙對(duì)心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用實(shí)驗(yàn)研究[J].中華胸心血管外科雜志,1994,10(4):353-354.

    [2]陳英杰,王紅燕,徐綏緒,等.人參化學(xué)成分及其抗癌抗心律失常構(gòu)效關(guān)系的研究[J].中國(guó)科學(xué)基金,1995,46:46.

    [3]BaiCX,SunamiA,Namiki T,etal.Electrophysiologicaleffects ofginseng and ginsenoside Re in guinea pig ventricularmyocytes[J].Eur JPharmacol,2003,476(1-2):35-44.

    [4]孟紅旭,王寶,劉建勛.丹酚酸B和延胡索乙素對(duì)大鼠心室肌細(xì)胞L -型鈣通道的影響[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志,2011,31(11):1514-1517.

    [5]Laustein MP,LedererW.Sodium/calcium exchange:its physiological implications[J].Physiol Rev,1999,79(5):763-854.

    [6]Baetz D,Bernard M,Pinet C.Different pathways for sodium entry in cardiac cells during ischemia and early reperfusion[J].Mol Cell Biochem,2003,242(1-2):115-120.

    [7]Miake J,Marban E,Nuss HB.Functional role of inward rectifier current in heart p robed by Kir22 overexpression and dominant negative suppression[J].JClin Invest,2003,111(10):1529-1536.

    (2013-09-12收稿)

    Effects of Ginsenoside Re on Sodium and Potassium Current in Rat Ventricular Myocytes

    Meng Hongxu Yao Mingjiang,Liu Jianxun
    (Institute of Basic Medical Sciences of Xiyuan Hospital,China Academy of Chinese Medical Sciences,Beijing key Laboratory of pharmacology of Chinesemateriamedica,Beijing 100091,China)

    Objective:To investigate the effectsof Ginsenoside Re on voltage-dependent sodium current and potassium current in rat ventricularmyocytes,and to investigate themechanism of antiarrhythmia.Methods:The effectofGinsenoside Re on sodium current(INa),transient outward potassium current(Ito)and inwardly rectifie-d potassium current(Ik1)were assessed by applying whole-cell patch clamp technique in single cardiac myocytes.Results:Ginsenoside Re(10,100μmol·L-1))was shown to inhibit the altitude of INaand the inhibition ratio was25.5±5.7%(n=3)and 46.2±18%(n=4).Itwas shown a little inhibition by Ginsenoside Re(100μmol ·L-1))and its effectswere reversible completely afterwashout.The inhibition ratio of Ito was 13±9%(n=3)in 100μmol·L-1). Ginsenoside Re(10,100μmol·L-1))inhibited the altitude of Ik1and the inhibition ratiowas16.3±8.7%(n=5)and 35.4±11.2%(n=5).Conclusion:Ginsenoside Re can inhibit sodium current and potassium currents to produce antiarrhythmic effect.

    Ginsenoside Re;Pathch clamp technique;Sodium current;Potassium current

    10.3969/j.issn.1673-7202.2013.10.005

    中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院自助選題項(xiàng)目(編號(hào):zz070821),科技部十二五重大新藥創(chuàng)制課題(編號(hào):2012ZX09301002-004)

    孟紅旭,男,博士,助理研究員,研究方向中藥藥理學(xué),E-mail:am fd003@163.com

    劉建勛,男,研究員,博士生導(dǎo)師,主要從事心腦血管藥理學(xué)研究,Tel:010-62835601,E-mail:liujx0324@sina.com

    猜你喜歡
    肌細(xì)胞灌流皂苷
    血液灌流聯(lián)合血液透析治療銀屑病療效觀察
    HPLC-MS/MS法同時(shí)測(cè)定三七花總皂苷中2種成分
    中成藥(2018年9期)2018-10-09 07:19:04
    HPLC法測(cè)定大鼠皮膚中三七皂苷R1和人參皂苷Rb1
    中成藥(2017年9期)2017-12-19 13:34:40
    HPLC法同時(shí)測(cè)定熟三七散中13種皂苷
    中成藥(2017年6期)2017-06-13 07:30:34
    加熱法在無肝素血液灌流護(hù)理中的應(yīng)用
    血液灌流治療戊巴比妥鈉中毒1例
    西藏科技(2015年9期)2015-09-26 12:15:31
    Caspase12在糖尿病大鼠逼尿肌細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激中的表達(dá)
    血液透析聯(lián)合血液灌流對(duì)尿毒癥自主神經(jīng)病變的影響
    高效液相色譜梯度洗脫法同時(shí)測(cè)定三七總皂苷中人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1和三七皂苷R1含量
    豚鼠乳鼠心房肌細(xì)胞體外培養(yǎng)的探討*
    五月天丁香电影| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 亚洲伊人色综图| 国产成人精品久久二区二区免费| 超碰成人久久| www日本在线高清视频| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 欧美精品一区二区大全| 精品一品国产午夜福利视频| www日本在线高清视频| av一本久久久久| 亚洲av国产av综合av卡| 欧美变态另类bdsm刘玥| 国产精品一区二区精品视频观看| 男女高潮啪啪啪动态图| 亚洲五月婷婷丁香| 欧美激情极品国产一区二区三区| 亚洲图色成人| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 国产成人啪精品午夜网站| 久久九九热精品免费| 美女高潮到喷水免费观看| 亚洲伊人色综图| 国产精品久久久久久精品电影小说| 免费av中文字幕在线| 国产精品成人在线| 国产精品.久久久| 波多野结衣av一区二区av| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 久久ye,这里只有精品| av网站免费在线观看视频| 国产在线一区二区三区精| 91麻豆av在线| 老鸭窝网址在线观看| 人妻一区二区av| 91字幕亚洲| 日本欧美国产在线视频| 久久久久精品国产欧美久久久 | 人妻 亚洲 视频| 黄色 视频免费看| 91九色精品人成在线观看| 成年女人毛片免费观看观看9 | 免费在线观看完整版高清| 999久久久国产精品视频| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 午夜久久久在线观看| 午夜福利影视在线免费观看| 亚洲成国产人片在线观看| 免费看十八禁软件| 美女高潮到喷水免费观看| 欧美97在线视频| 国产成人系列免费观看| 亚洲中文字幕日韩| 亚洲成人手机| 国产激情久久老熟女| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 黑丝袜美女国产一区| 两个人免费观看高清视频| 飞空精品影院首页| 欧美人与性动交α欧美软件| 国产精品一区二区在线不卡| bbb黄色大片| av网站免费在线观看视频| 国产一区二区激情短视频 | 涩涩av久久男人的天堂| 手机成人av网站| 啦啦啦在线免费观看视频4| 婷婷丁香在线五月| 成年人黄色毛片网站| 亚洲欧美精品自产自拍| 亚洲av美国av| tube8黄色片| 一二三四在线观看免费中文在| 男男h啪啪无遮挡| 亚洲欧洲日产国产| 亚洲国产中文字幕在线视频| 欧美大码av| 日本wwww免费看| 日韩av在线免费看完整版不卡| 99国产精品免费福利视频| 欧美av亚洲av综合av国产av| 久久久精品区二区三区| 日韩免费高清中文字幕av| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 国产成人免费观看mmmm| 亚洲五月婷婷丁香| 国产成人精品久久久久久| 精品少妇黑人巨大在线播放| 免费少妇av软件| 婷婷色av中文字幕| 女性被躁到高潮视频| 高清不卡的av网站| √禁漫天堂资源中文www| 精品国产一区二区久久| 1024视频免费在线观看| 成人亚洲欧美一区二区av| 欧美激情 高清一区二区三区| 久久久国产欧美日韩av| 啦啦啦啦在线视频资源| 欧美精品啪啪一区二区三区 | 久久九九热精品免费| cao死你这个sao货| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 国产欧美日韩一区二区三 | 日韩视频在线欧美| 香蕉丝袜av| 狂野欧美激情性xxxx| 99久久综合免费| 亚洲精品中文字幕在线视频| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 成人亚洲精品一区在线观看| 国产黄色免费在线视频| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| a级毛片黄视频| 日本91视频免费播放| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 男女之事视频高清在线观看 | 国产成人av激情在线播放| 色婷婷久久久亚洲欧美| 波多野结衣av一区二区av| 男女床上黄色一级片免费看| 一区二区日韩欧美中文字幕| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 老司机靠b影院| 一级毛片我不卡| 久久 成人 亚洲| 天堂8中文在线网| 日日摸夜夜添夜夜爱| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 国产男人的电影天堂91| 久久久久精品国产欧美久久久 | 久久人妻福利社区极品人妻图片 | 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 美女扒开内裤让男人捅视频| 国产精品二区激情视频| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 国产在线观看jvid| 男女无遮挡免费网站观看| 精品人妻一区二区三区麻豆| 欧美 日韩 精品 国产| 欧美成人精品欧美一级黄| 又紧又爽又黄一区二区| 老司机影院成人| 色婷婷久久久亚洲欧美| 无限看片的www在线观看| 久久精品国产综合久久久| 亚洲 欧美一区二区三区| 国产精品一区二区在线不卡| 欧美少妇被猛烈插入视频| 亚洲综合色网址| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 日韩伦理黄色片| 久久精品亚洲av国产电影网| 久久九九热精品免费| 18在线观看网站| 亚洲人成电影观看| 日韩大片免费观看网站| 亚洲欧洲国产日韩| 国产国语露脸激情在线看| 七月丁香在线播放| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 丰满迷人的少妇在线观看| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 高清av免费在线| 色综合欧美亚洲国产小说| 在线观看国产h片| 精品久久久精品久久久| 亚洲中文日韩欧美视频| 免费在线观看日本一区| 在线观看免费高清a一片| 在线观看免费高清a一片| 91精品国产国语对白视频| 热re99久久国产66热| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 9191精品国产免费久久| 精品少妇内射三级| 欧美日韩av久久| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 亚洲欧美一区二区三区国产| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 亚洲三区欧美一区| 欧美成人午夜精品| 一边摸一边做爽爽视频免费| 一级黄色大片毛片| 久久久久国产精品人妻一区二区| 九色亚洲精品在线播放| 一级黄色大片毛片| 麻豆乱淫一区二区| 国产日韩欧美视频二区| 亚洲av在线观看美女高潮| 99久久人妻综合| 涩涩av久久男人的天堂| 精品视频人人做人人爽| 国产主播在线观看一区二区 | 在线av久久热| 91老司机精品| 校园人妻丝袜中文字幕| 久久国产精品人妻蜜桃| 久久精品久久精品一区二区三区| 精品少妇内射三级| 91九色精品人成在线观看| 国产精品熟女久久久久浪| 国产精品一二三区在线看| 天堂俺去俺来也www色官网| 欧美日韩黄片免| 波多野结衣av一区二区av| 青春草视频在线免费观看| 国产精品久久久人人做人人爽| 两个人免费观看高清视频| 久久久久精品人妻al黑| 成人亚洲精品一区在线观看| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 日本av免费视频播放| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 国产精品亚洲av一区麻豆| 美女扒开内裤让男人捅视频| 在线观看国产h片| 亚洲欧美清纯卡通| www日本在线高清视频| 亚洲精品第二区| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 涩涩av久久男人的天堂| 男人添女人高潮全过程视频| 1024香蕉在线观看| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 免费观看av网站的网址| 亚洲精品自拍成人| 国产精品一国产av| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 久久久国产一区二区| 国产人伦9x9x在线观看| 91精品伊人久久大香线蕉| 日本欧美国产在线视频| 超色免费av| 国产麻豆69| 国产精品人妻久久久影院| 国产片内射在线| 99国产精品99久久久久| 国产精品免费视频内射| 999精品在线视频| 精品亚洲成a人片在线观看| 国产av一区二区精品久久| 看免费成人av毛片| 成年美女黄网站色视频大全免费| 一级片免费观看大全| 日韩大片免费观看网站| 激情五月婷婷亚洲| 日日夜夜操网爽| 热99国产精品久久久久久7| 亚洲精品成人av观看孕妇| 纯流量卡能插随身wifi吗| 国产日韩欧美在线精品| 亚洲中文av在线| 51午夜福利影视在线观看| 一区二区三区精品91| 性少妇av在线| 欧美久久黑人一区二区| 精品高清国产在线一区| 欧美精品亚洲一区二区| 免费在线观看影片大全网站 | 国产av精品麻豆| 日韩av不卡免费在线播放| 国产成人免费观看mmmm| 中文字幕最新亚洲高清| 久久 成人 亚洲| 黄色视频在线播放观看不卡| 搡老岳熟女国产| 深夜精品福利| 性色av乱码一区二区三区2| 91国产中文字幕| 国产亚洲欧美精品永久| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 999久久久国产精品视频| 青春草视频在线免费观看| 国产欧美亚洲国产| 成人手机av| 大码成人一级视频| 天堂8中文在线网| 免费日韩欧美在线观看| av在线app专区| 国产伦理片在线播放av一区| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 亚洲美女黄色视频免费看| svipshipincom国产片| 精品少妇内射三级| 欧美成人午夜精品| 一个人免费看片子| 99国产精品一区二区蜜桃av | 国产成人一区二区三区免费视频网站 | 90打野战视频偷拍视频| 这个男人来自地球电影免费观看| 七月丁香在线播放| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 不卡av一区二区三区| 久久久久久久大尺度免费视频| 欧美在线黄色| 国产欧美亚洲国产| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 少妇的丰满在线观看| 我的亚洲天堂| 亚洲欧美一区二区三区国产| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 国产在线免费精品| 亚洲国产欧美一区二区综合| 午夜老司机福利片| 久久久久久久久免费视频了| 妹子高潮喷水视频| 日韩精品免费视频一区二区三区| 成人亚洲精品一区在线观看| 亚洲五月婷婷丁香| 精品少妇久久久久久888优播| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 亚洲 国产 在线| 午夜福利,免费看| 亚洲美女黄色视频免费看| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 亚洲国产最新在线播放| 美女视频免费永久观看网站| 国产三级黄色录像| 免费高清在线观看视频在线观看| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 9191精品国产免费久久| 日本五十路高清| 国产一区二区三区综合在线观看| a级毛片在线看网站| 99热网站在线观看| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 91字幕亚洲| 国产在线视频一区二区| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 一区二区三区乱码不卡18| 久久久久久久大尺度免费视频| 18禁国产床啪视频网站| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o | 精品人妻1区二区| 国产一区二区激情短视频 | 青草久久国产| 男女国产视频网站| a 毛片基地| 男人添女人高潮全过程视频| 大型av网站在线播放| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 脱女人内裤的视频| 久久久久久免费高清国产稀缺| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 母亲3免费完整高清在线观看| 国产成人精品久久二区二区91| 99热网站在线观看| 老司机影院成人| 在线观看人妻少妇| 午夜福利在线免费观看网站| av福利片在线| 99久久综合免费| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 99re6热这里在线精品视频| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 久久久精品94久久精品| 美女国产高潮福利片在线看| 欧美精品高潮呻吟av久久| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 亚洲伊人久久精品综合| 久久精品国产综合久久久| 嫩草影视91久久| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 这个男人来自地球电影免费观看| 黄色毛片三级朝国网站| 欧美 日韩 精品 国产| 日本黄色日本黄色录像| 国产一区二区三区av在线| 黄色怎么调成土黄色| 亚洲欧美激情在线| 亚洲精品一二三| 精品福利永久在线观看| 国产男女内射视频| 欧美精品亚洲一区二区| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 99国产精品一区二区蜜桃av | 高清av免费在线| 亚洲国产精品成人久久小说| 搡老岳熟女国产| 日本a在线网址| 一本色道久久久久久精品综合| 亚洲欧美一区二区三区久久| 韩国精品一区二区三区| 国产男女超爽视频在线观看| 久久这里只有精品19| 9191精品国产免费久久| 国产亚洲精品第一综合不卡| 国产精品 国内视频| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 男人舔女人的私密视频| 深夜精品福利| 最黄视频免费看| 亚洲成人手机| 日本91视频免费播放| 国产熟女欧美一区二区| 日本vs欧美在线观看视频| 一区二区三区乱码不卡18| 国产在线观看jvid| 国产成人影院久久av| 精品一区二区三区av网在线观看 | 免费高清在线观看日韩| 色婷婷av一区二区三区视频| 亚洲精品国产av成人精品| 日本91视频免费播放| 高清黄色对白视频在线免费看| 国产精品欧美亚洲77777| 手机成人av网站| 国产不卡av网站在线观看| 亚洲美女黄色视频免费看| 国产免费一区二区三区四区乱码| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 一级毛片 在线播放| 成年人午夜在线观看视频| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 大香蕉久久成人网| 精品少妇久久久久久888优播| 纯流量卡能插随身wifi吗| 久久人妻福利社区极品人妻图片 | av在线app专区| 高清黄色对白视频在线免费看| 欧美另类一区| 成人国产一区最新在线观看 | 国产成人a∨麻豆精品| 无遮挡黄片免费观看| 亚洲一码二码三码区别大吗| 黄色a级毛片大全视频| 18禁观看日本| 男女之事视频高清在线观看 | 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 啦啦啦 在线观看视频| 亚洲国产av新网站| 在线 av 中文字幕| 国产伦理片在线播放av一区| 欧美日韩福利视频一区二区| 丰满少妇做爰视频| 国产淫语在线视频| 久久九九热精品免费| 国产免费一区二区三区四区乱码| 十八禁网站网址无遮挡| 大型av网站在线播放| 黑人欧美特级aaaaaa片| 欧美+亚洲+日韩+国产| 免费观看av网站的网址| 国产高清videossex| www.自偷自拍.com| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 国产视频首页在线观看| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 国产精品一区二区在线观看99| 国产人伦9x9x在线观看| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 香蕉丝袜av| 欧美少妇被猛烈插入视频| 欧美成人精品欧美一级黄| 母亲3免费完整高清在线观看| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 午夜免费成人在线视频| 满18在线观看网站| 色视频在线一区二区三区| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 国产精品一区二区精品视频观看| 久久av网站| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 日本欧美视频一区| 最黄视频免费看| 欧美国产精品va在线观看不卡| 久久亚洲国产成人精品v| 老司机午夜十八禁免费视频| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 99国产综合亚洲精品| 国产片内射在线| av线在线观看网站| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 男男h啪啪无遮挡| 两个人免费观看高清视频| 观看av在线不卡| 一本大道久久a久久精品| 宅男免费午夜| 久久久亚洲精品成人影院| 在线观看国产h片| 新久久久久国产一级毛片| 成人免费观看视频高清| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 美女视频免费永久观看网站| 国产免费福利视频在线观看| 午夜福利视频精品| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 亚洲五月色婷婷综合| 国产成人精品在线电影| 成人影院久久| 无遮挡黄片免费观看| 久久九九热精品免费| 2021少妇久久久久久久久久久| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 成年女人毛片免费观看观看9 | 免费一级毛片在线播放高清视频 | 女性生殖器流出的白浆| 伦理电影免费视频| 精品人妻一区二区三区麻豆| 黄色片一级片一级黄色片| 9热在线视频观看99| 51午夜福利影视在线观看| 黄色怎么调成土黄色| 在线观看免费视频网站a站| 久久这里只有精品19| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 国产1区2区3区精品| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 80岁老熟妇乱子伦牲交| 免费不卡黄色视频| 国产一级毛片在线| 51午夜福利影视在线观看| 美国免费a级毛片| 高清视频免费观看一区二区| 高清av免费在线| 亚洲少妇的诱惑av| 一区在线观看完整版| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 波野结衣二区三区在线| 久久国产精品人妻蜜桃| 国产xxxxx性猛交| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 久久精品久久久久久久性| 18在线观看网站| 欧美国产精品va在线观看不卡| 国产亚洲欧美在线一区二区| 制服人妻中文乱码| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 国产一区二区在线观看av| 亚洲国产精品国产精品| 制服诱惑二区| 秋霞在线观看毛片| 久久99一区二区三区| 好男人视频免费观看在线| 久久av网站| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 国产在线观看jvid| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 蜜桃国产av成人99| 免费看十八禁软件| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 国产免费福利视频在线观看| 精品高清国产在线一区| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 伦理电影免费视频| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 国产成人91sexporn| 国产在线观看jvid| 极品人妻少妇av视频| 午夜精品国产一区二区电影| 成人手机av| 欧美成人午夜精品| 久久免费观看电影| 国产精品久久久久久精品电影小说| 纵有疾风起免费观看全集完整版| av国产久精品久网站免费入址| 老汉色av国产亚洲站长工具| 制服人妻中文乱码| 国产精品国产av在线观看| 亚洲精品国产一区二区精华液| 91成人精品电影| 少妇人妻久久综合中文| 自线自在国产av| 精品熟女少妇八av免费久了| 热re99久久精品国产66热6| 十八禁人妻一区二区| 婷婷色av中文字幕| 久久性视频一级片| 午夜两性在线视频| 日韩av在线免费看完整版不卡| 亚洲国产精品成人久久小说| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 丰满少妇做爰视频| 最近中文字幕2019免费版| 中文字幕高清在线视频| 美女高潮到喷水免费观看| 亚洲色图综合在线观看| 久久久久精品人妻al黑| 色视频在线一区二区三区| 久久鲁丝午夜福利片| 高潮久久久久久久久久久不卡| 久久av网站| 久久久久久久久免费视频了| 黄片小视频在线播放| 黑人欧美特级aaaaaa片| 亚洲,欧美精品.| 欧美大码av| 国产伦理片在线播放av一区| 欧美大码av| 亚洲男人天堂网一区| 久久久久久久久免费视频了| 深夜精品福利| 国产1区2区3区精品| 亚洲成色77777| 久久精品国产综合久久久| 99精国产麻豆久久婷婷| 一本综合久久免费| 免费观看av网站的网址| 2021少妇久久久久久久久久久| 伊人亚洲综合成人网| 一级a爱视频在线免费观看| 日韩人妻精品一区2区三区| 久久久久国产精品人妻一区二区| 1024视频免费在线观看| 国产日韩欧美视频二区| 国产一区二区三区av在线| 嫩草影视91久久|