靈芝優(yōu)良菌株的品比試驗*

李 忠 凌宏通 王志達 曾振基

（廣東省梅州市微生物研究所，廣東 梅州 514071）

靈芝優(yōu)良菌株的品比試驗*

李 忠 凌宏通 王志達 曾振基

（廣東省梅州市微生物研究所，廣東 梅州 514071）

通過對4個靈芝菌株在拮抗反應(yīng)、菌絲生長狀況、生育期、子實體農(nóng)藝性狀及產(chǎn)量等方面進行對比試驗，篩選出適合梅州生產(chǎn)推廣的優(yōu)良菌株：大別山G8菌株與其他菌株均有拮抗反應(yīng)；該菌株母種和原種菌絲生長速度較快，菌絲潔白濃密，邊緣整齊；在栽培過程中生長良好，孢子粉產(chǎn)量高，生物學效率高。

靈芝；菌株；拮抗試驗；性狀比較；篩選

靈芝（Ganoderma lucidum）屬于擔子菌綱多孔菌目多孔菌科靈芝屬，是中國傳統(tǒng)的藥用真菌，被稱為神草，在我國已有2 000多年的藥用歷史［1］。靈芝中含有靈芝多糖、三萜類化合物、核苷、氨基酸、甾醇、生物堿等多種成分[2～4]。大量藥理研究表明，靈芝具有調(diào)節(jié)免疫、抗腫瘤、抗衰老、護肝和降血糖血脂等方面的功效[2～7]；臨床上還應(yīng)用于美容、改善記憶和改善睡眠[2，8]。靈芝市場需求量大，開發(fā)前景廣闊。通過對4個引進的靈芝菌株的品比試驗，篩選出適宜廣東梅州及周邊地區(qū)栽培的靈芝菌株。

1 材料與方法

1.1 供試菌株 供試菌株雜交靈芝、廣1號靈芝引自廣東省農(nóng)科院蔬菜研究所，大別山G8靈芝引自廣州寶興生物科技有限公司梅州靈芝實驗基地，三明京大靈芝引自福建省三明真菌研究所。

1.2 培養(yǎng)基配方 母種培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，磷酸二氫鉀1 g，硫酸鎂0.5 g，瓊脂20 g，水1 000 mL。原種培養(yǎng)基：玉米粒99％，石膏1％。栽培料配方：木屑78％，麥麩12％，玉米粉8％，石膏1％，蔗糖1％。

1.3 母種制作 取200 g馬鈴薯，洗凈去皮切碎，加水1 000 mL煮沸20 min，紗布過濾，再加20 g葡萄糖和20 g瓊脂及其他藥品，充分溶解后補足水至1 000 mL，分裝于21×200（mm）試管中，每試管約10 mL。試管121 ℃滅菌30 min后取出擺斜面至冷卻。在超凈工作臺內(nèi)定量接入平板尖端菌絲，每個菌株接10支試管，25 ℃下恒溫培養(yǎng)。

1.4 原種制作 玉米粒除雜、除壞后，在水中浸泡12～13 h，經(jīng)沸水煮至用手按開玉米粒里面不糊為宜，晾干至表面無水，加入石膏拌勻，混合裝袋，每袋折合干料80 g，121℃滅菌1.5 h。冷卻后在超凈工作臺內(nèi)定量接入平板尖端菌絲，每個菌株接20瓶，25 ℃恒溫培養(yǎng)。

1.5 栽培方法 木屑78％，麥麩12％，玉米粉8％，石膏1％，蔗糖1％混勻，按料水比1∶1.5加水拌勻，拌好后分裝到33×17×0.005（cm）的聚丙烯塑料袋中，每袋裝折合干料350 g，121 ℃滅菌2 h。自然冷卻后在超凈工作臺內(nèi)定量接入原種，每個菌株接50袋，重復(fù)3次，室溫培養(yǎng)。菌絲滿袋后開袋，待菌蓋白色生長圈基本消失呈紅褐色時移入收粉架，保證濕度、定期通風，約40天后采收孢子粉和子實體[9，10]。

1.6 拮杭試驗 拮抗試驗是鑒定菌株間遺傳差異的傳統(tǒng)方法，通過拮抗試驗將供試菌株進行鑒定、歸類，防止重復(fù)[11]。菌絲間的拮抗反應(yīng)是菌株間不同遺傳特性的重要表現(xiàn)，表明不同菌株分別屬于不同的親和群。試驗將0.5 cm2的菌塊接種到PDA平板上，25 ℃下恒溫培養(yǎng)5～8天得到活化菌種。在活化后的菌落邊緣取直徑5 mm的菌塊，將3個菌株以“品”字形同時接種在一個PDA平板上，25 ℃恒溫培養(yǎng)，每天定時觀察菌株間是否有拮抗線，以及拮抗線是否明顯。每個組合重復(fù)3次。

1.7 觀測結(jié)果 母種萌發(fā)后每天劃線，測量并記錄菌絲生長速度，記錄菌絲長滿試管的時間以及菌絲的濃密程度、顏色、氣生菌絲量等。原種待菌絲長到瓶肩部時開始沿菌絲生長邊緣劃線，測量并記錄菌絲生長速度、滿瓶時間以及菌絲的濃密程度等。栽培中觀察記錄原基形成時間、采收時間，以及子實體的生物學性狀，包括菌蓋顏色、菌蓋面積、菌柄長度及出芝產(chǎn)量，計算污染率、生物學效率等，并對產(chǎn)量進行差異顯著性測定。靈芝孢子粉作為靈芝的精華，集中了靈芝的最有效成分［12］。有鑒于此，梅州赤靈芝栽培以采收孢子粉為主、子實體為輔。試驗中只測第一潮靈芝產(chǎn)量。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌株拮抗性 拮抗試驗表明，供試菌株接種在同一平板上培養(yǎng)6天后開始有拮抗線出現(xiàn)，但反應(yīng)強烈程度不一。以雜交靈芝與其他菌株的拮抗反應(yīng)最為強烈，說明親緣關(guān)系最遠；其他菌株間也都存在不同程度的拮抗反應(yīng)，從中推測4個靈芝菌株親緣關(guān)系較遠，分屬于不同親和群，是不相同的靈芝菌株，不存在異名同種的問題。

2.2 母種、原種生長情況 由表1可以看出，4個靈芝菌株在母種及原種培養(yǎng)基上的生長速度各不相同，其中雜交靈芝長速較快，滿管和滿瓶天數(shù)較短，其次是廣1號；供試菌株三明和G8生長速度相差不大，滿管和滿瓶天數(shù)基本保持同步。從菌絲密度色澤、菌絲邊緣整齊度來看，4個菌株在母種和原種培養(yǎng)基的差別都不大，表現(xiàn)為菌絲濃密，顏色雪白，邊緣較整齊。此外，各菌株在原種培養(yǎng)基中的菌絲萌發(fā)和定植能力均較強。總體來看，以雜交靈芝菌株在母種和原種培養(yǎng)基中的生長狀況最好。

2.3 試驗結(jié)果

（1）栽培袋菌絲培養(yǎng)情況。根據(jù)廣東梅州當?shù)卮笠?guī)模栽培赤靈芝的實際情況看（試驗在自然氣溫下進行），因正值冬季，氣溫較低，生長相對較慢。4個菌株菌絲滿袋所需天數(shù)依次為雜交＜廣1號＜G8＜三明（表2）。與母種培養(yǎng)基菌絲滿管天數(shù)次序相同，只是三明菌株長速較慢。污染率方面看，雜交菌株較低，僅1.65％，其他菌株的污染率也都在正常范圍5％內(nèi)。

（2）子實體生物學性狀。由表2可知，雜交靈芝菌株的子實體農(nóng)藝性狀相對較差：顏色較淡，分支數(shù)多、菌柄長且直徑小，菌蓋呈近圓形且不規(guī)則，畸形率高達46.15％，產(chǎn)孢子粉量少。而其他3個菌株間子實體特性多差異不大，均呈紅褐色，分支數(shù)1～2個，叢生，腎形，菌柄短，菌蓋邊緣規(guī)整；但在子實體大小、厚度、畸形率、產(chǎn)孢量方面有不同。

（3）產(chǎn)量及生物學效率。根據(jù)梅州栽培赤靈芝的第一潮子實體和孢子粉所作統(tǒng)計結(jié)果，并經(jīng)多重比較Duncan測驗法進行差異分析，三明和廣1號兩者之間的總鮮重無顯著差異，但與G8、雜交菌株間存在極其顯著差異（表3）。同時，無論是子實體還是孢子粉，G8產(chǎn)量均明顯高于其他菌株，其生物學效率高達13.94％；生物學效率最低的是雜交靈芝，僅6.50％。據(jù)此得出，G8是適宜梅州氣候條件下栽培的高產(chǎn)菌株。

表1 4個靈芝菌株在母種及原種培養(yǎng)基上的生長情況

表2 4個靈芝菌株栽培袋培養(yǎng)菌絲的生長情況及子實體農(nóng)藝性狀

表3 4個靈芝菌株的產(chǎn)量及生物學效率

3 討論與小結(jié)

通過試驗可以看出，雜交靈芝菌株進行母種、原種和栽培袋培養(yǎng)時菌絲生長速度均較快，菌絲活力和適應(yīng)性較強，栽培袋污染率低；但其子實體菌蓋的增大和加厚不充分，畸形率高，生物學效率低。這可能與菌株本身是雜交而成的有關(guān)系。而雜交菌株生長周期短，污染率低，菌蓋不規(guī)則這一特性則適合于做盆景。

菌株廣1號較G8菌絲生長快、污染率低，但生物學效率偏低，子實體雖然大但厚度不夠，孢子粉產(chǎn)量也偏低；三明菌株雖然子實體菌蓋最大，產(chǎn)孢量也較多，但菌絲長速較慢，生物學效率較低，說明菌株廣1號和三明都不是高產(chǎn)優(yōu)良菌株。

菌株G8母種和原種菌絲長速比三明快，菌絲白而密，氣生菌絲量多，子實體原基形成快，菌蓋雖略小但厚實，出芝較整齊，子實體形狀和色澤好，產(chǎn)孢量多，生物學效率高，具有較高的商品價值。

綜上所述，供試的4個靈芝菌株中，G8是較適宜梅州地區(qū)生產(chǎn)推廣的優(yōu)良菌株。

［1］林志彬．靈芝的現(xiàn)代研究［M］．北京醫(yī)科大學出版社，2001：3-19．

［2］鄧海林，吳佩穎，王建新．靈芝的研究進展［J］．時珍國醫(yī)國藥，2005，16（2）：141-143．

［3］張曉云，楊春清．靈芝的化學成分和藥理作用［J］．國外醫(yī)藥·植物藥分冊， 2006，21（4）：152-155．

［4］呂文輝，張源．靈芝的藥用價值［J］．中華綜合臨床醫(yī)學雜志， 2008，10（4）：71．

［5］ Lindequist U， Niedermeyer T， Julich W． The pharmacological potential of mushrooms［J］．Evidence-based Complementary and Alternative Meicine，2005，2（3）：285．

［6］劉虹，周甄鴻，劉志宏．靈芝孢子粉藥理作用研究進展［J］．天津中醫(yī)學院學報，2002，21（4）：50-51．

［7］肖春，吳清平，蔡玟，等．靈芝粗多糖對糖尿病小鼠的降血糖作用［J］．中國食用菌，2011，30（5）：37-39

［8］王宏勛，張雯，顏克亮，等．復(fù)合枸杞靈芝菌絲體多糖體外抗氧化作用初步研究［J］．中國食用菌，2007，26（3）：38-40．

［9］曾振基，古培總，陳東標，等．雜木屑栽培赤靈芝技術(shù)［J］．中國食用菌，2004，23（3）：41-42．

［10］曾振基，古培總，陳東標，等．赤靈芝高產(chǎn)栽培技術(shù)［J］．廣東農(nóng)業(yè)科學，2004（2）：44-45．

［11］郭曉帆，陳艷秋．樺褐孔菌不同菌株的生物學特性研究［J］．食用菌，2007，29（1）：14-16．

［12］趙東旭，徐建蘭．靈芝孢子研究進展［J］．中草藥，1996，30（4）：306．

?項目來源：廣東省科技廳產(chǎn)學研引導(dǎo)項目（2010B090300040）；廣東省促進科技服務(wù)業(yè)發(fā)展項目（2011B040100013）。

李忠（1983- ），男，廣東五華人，碩士，農(nóng)藝師，主要從事農(nóng)業(yè)微生物等方面的研究。