回陽玉龍膏對乳腺增生大鼠的治療作用

彭成浩， 劉國文， 楊俊省

乳腺增生癥是最常見的乳腺疾病之一，常見不同程度的乳房疼痛以及腫塊，其發(fā)病率占育齡婦女的80% ～90%，占全部乳房疾病的75%，癌變率2% ～4%，其高發(fā)人群為30～45歲的女性［1］。目前乳腺增生癥的治療手段主要分三大類:西藥、中藥和物理治療。西藥多選用激素或受體阻斷劑，雖有療效，但往往使激素代謝更加紊亂［2］。物理治療多采用磁療，取得了較可靠的療效，但起效相對較慢，且理療的實施需患者在醫(yī)院才能進(jìn)行［3］，因此其推廣受到了一定限制。中藥治療乳腺增生癥有其獨(dú)到之處，且療效確切，為目前治療的主要手段［4-5］。本研究從明代陳實功所著的《外科正宗》中選取處方，將草烏、干姜、赤芍、白芷、南星、肉桂溫陽藥研制成回陽玉龍膏，考察其對乳腺增生大鼠的治療作用，為其臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 SD雌性大鼠19只，清潔級，體重(210±10)g，75～85日齡。購于南華大學(xué)實驗動物部(動物合格證號:SCXK湘2004-0010)。實驗鼠體重和周齡統(tǒng)計學(xué)上無差異，按標(biāo)準(zhǔn)飲食，分籠飼養(yǎng)于相同的環(huán)境中。

1.2 藥物及試劑 回陽玉龍膏藥物組成:草烏、干姜各30 g，赤芍、白芷、南星各10 g，肉桂5 g。雌二醇注射液以及雌二醇、孕酮、泌乳素放免試劑盒均購自天津金耀氨基酸制藥有限公司，黃體酮注射液購自浙江仙琚制藥股份有限公司。

1.3 實驗方法 (1)乳腺增生癥模型的建立:19只SD雌性大鼠后肢內(nèi)側(cè)肌肉注射苯甲酸雌二醇0.5 mg/kg，1次/天，連續(xù)25天;后肌肉注射黃體酮5 mg/kg，1次/天，連續(xù)5 天［6］。隨機(jī)處死 5 只大鼠，檢驗造模成功率。(2)治療方法:將剩余14只大鼠按干預(yù)方法不同采取盲法隨機(jī)分為對照組(A組)及中藥組(B組)。參考正常SD雌性大鼠胸圍、腹圍平均值，設(shè)計治療胸帶。胸帶呈長方形，自然長度16 cm，寬6 cm，拉緊后最短可達(dá)8 cm，由內(nèi)袋、外袋、扣帶處三部分組成。扣帶區(qū)位于兩端，由兩層棉布組成，內(nèi)縫有3條長約3 cm的貼片。A組:僅用空白胸帶包裹，未做其他處理。B組根據(jù)人體體表面積計算法及許文生公式計算得出實驗大鼠的中藥用量:草烏、干姜各 0.6 g;赤芍、白芷、南星各0.2 g，肉桂0.1 g，研細(xì)末混勻黃酒調(diào)勻放入治療胸帶內(nèi)側(cè)，包裹給藥，每天定時換藥，連續(xù)給藥30天。(3)指標(biāo)測定:于第31天測量兩組大鼠第2對乳頭的高度及直徑，隨后將動物經(jīng)3%水合氯醛300 mg/kg腹腔麻醉，后切取第2對完整的乳房待病理檢測用。隨即處死動物，從心臟中抽取5 mL血液作雌二醇(E2)、孕酮(P)、泌乳素(PRL)及肝腎功能檢查。切取大鼠心臟，將其與上述切除的第2對乳房分別用10%的福爾馬林液固定，石蠟包埋切片，HE染色，在光鏡下觀察，做病理切片分析。(4)乳房大體形態(tài)判定標(biāo)準(zhǔn)為:改變不明顯者為(－)，單純腫大者為(+)，紅腫大者為(++)。乳頭形態(tài)學(xué)判定標(biāo)準(zhǔn)為:無變化，光鏡下基本恢復(fù)到正常乳腺結(jié)構(gòu)為(－);乳頭大，光鏡下可見結(jié)締組織增生為(+);乳頭腫大，光鏡下可見結(jié)締組織及腺導(dǎo)管增生為(++);乳頭紅、腫、大，光鏡下可見結(jié)締組織成纖維細(xì)胞增生，腺導(dǎo)管增生可見數(shù)目增加，管腔擴(kuò)大，腺導(dǎo)管上皮增生為(+++)。乳腺增生病理程度分為4級:乳腺小葉不增生，腺體數(shù)量極少，腺泡不擴(kuò)張，處于靜止?fàn)顟B(tài)(－);乳腺小葉無明顯增生，個別腺泡有輕度增生，無擴(kuò)張(+);乳腺小葉大部分增生，部分腺泡明顯擴(kuò)張(++);乳腺小葉明顯增生，腺泡處于極度擴(kuò)張狀態(tài)，腺上皮細(xì)胞呈扁平狀，腺泡內(nèi)及導(dǎo)管內(nèi)有大量的分泌物(+++)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理。計量資料數(shù)據(jù)均以±s描述數(shù)據(jù)的集中和離散趨勢，組間比較采用t檢驗;計數(shù)資料采用χ2檢驗。檢驗水準(zhǔn):以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 造模結(jié)果 造模后隨機(jī)處死5只大鼠，病理檢測，確定造模均獲成功。觀察其余大鼠乳房大體及乳頭形態(tài)，確定本組造模成功率為100%。

2.2 乳房形態(tài)對比 肉眼觀察A組大鼠乳頭突出皮毛，脫毛后，可見乳頭增大、充血豎起，顏色暗紅，觸之較硬;B組可見大鼠乳頭較前縮小，成米粒狀，稍隆起，顏色稍紅潤，觸之較軟。兩組大鼠第2對乳頭的直徑和高度見表1，結(jié)果顯示A組的乳頭直徑和高度明顯大于B組，兩者相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均P＜0.05)。乳房大體形態(tài)比較:A組(－)6只，(+)1只，(++)0只;B組(－)0只，(+)2只，(++)5只;兩組相比B組乳房大體形態(tài)可見明顯好轉(zhuǎn)。乳頭形態(tài)學(xué)比較:A組(－)0只，(+)0只，(++)2只，(+++)5只;B組(－)3只，(+)4只，(++)0只，(+++)0只。與B組比較，A組大鼠乳腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞增生明顯，管腔明顯擴(kuò)張有分泌物，小葉明顯增多，腺泡增生明顯;B、C、D、E組大鼠小葉增大不明顯，腺泡腔和腺導(dǎo)管腔少數(shù)擴(kuò)張，分泌物減少。形態(tài)學(xué)上B組可見明顯好轉(zhuǎn)。

表1 各組大鼠乳頭高度以及直徑比較 ± s，n=7)

表1 各組大鼠乳頭高度以及直徑比較 ± s，n=7)

組別 乳頭高度(mm) 乳頭直徑(mm)A組2.35 ±0.18 1.86 ±0.05 B 組 2.08 ±0.11 1.52 ±0.06 t值 2.44 3.67 P值0.03 0.02

2.3 乳腺增生病理對比 病理切片示，A組大鼠乳腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞增生明顯，管腔明顯擴(kuò)張，有分泌物，小葉明顯增多，腺泡增生明顯(圖1);B組大鼠小葉增大不明顯，腺泡腔和腺導(dǎo)管腔少數(shù)擴(kuò)張，分泌物減少(圖2)。兩組的小葉數(shù)、腺泡數(shù)、腺泡擴(kuò)張程度及上皮增生情況相比，均有好轉(zhuǎn)，具體見表2。

2.4 兩組生殖激素對比 結(jié)果見表3。B組與A組比較，血中E2、PRL水平下降，P水平升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均P＜0.05)。

2.5 兩組肝腎及心肌毒性對比 肝腎毒性比較結(jié)果見表4。結(jié)果表明，兩組的血清肌酐(BUN)、尿素氮(Cr)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)及總膽紅素(TBIL)水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(均 P＞0.05)。心肌細(xì)胞病理切片(圖3、4)顯示，兩組心肌纖維均排列整齊，無心肌纖維破壞，細(xì)胞質(zhì)豐富均勻，細(xì)胞間隙正常，未見水腫。

表2 兩組乳腺病理組織學(xué)比較

表3 兩組生殖激素的比較±s，n=7)

表3 兩組生殖激素的比較±s，n=7)

組別 E2(pg/mL) P(ng/mL) PRL(ng/mL)A 組 19.97 ±1.22 16.65 ±0.77 6.59 ±0.99 B 組 13.69 ±0.79 27.80 ±1.02 5.44 ±0.93 t值 5.38 7.75 2.13 P 值 0.00 0.00 0.03

表4 肝、腎毒性的比較±s，n=7)

表4 肝、腎毒性的比較±s，n=7)

組別 BUN(mmol/L)TBIL(μmol/L)A 組 5.38 ±0.48 34.6 ±3.1 46.00 ±11.63 162.55 ±25.05 3.969 ±1.33 B 組 5.29 ±0.53 34.8 ±3.9 47.54 ±10.17 161.84 ±23.85 3.859 ±1.66 t值 1.29 1.08 1.22 1.05 1.16 P 值 0.73 0.91 0.79 0.96 0.89 Cr(μmol/L)ALT(U/L)ALT(U/L)

3 討論

乳腺增生是乳房常見良性增生性疾病，以乳房疼痛和腫塊為主要表現(xiàn)，且隨月經(jīng)周期或情緒波動呈現(xiàn)周期性變化。疼痛一般以脹痛為主，亦有刺痛、牽拉痛或隱痛，可累及一側(cè)或雙側(cè)乳房。疼痛常呈周期性，即月經(jīng)前加重，月經(jīng)后減輕或消失。腫塊邊界不甚清楚，質(zhì)地中等或韌硬不堅，且常有觸痛。乳腺增生癥屬于中醫(yī)“乳癖”的范疇，中醫(yī)藥治療以活血化瘀、化痰散結(jié)為本。然而單純口服中藥復(fù)方湯劑療效緩慢，服藥量大，一般患者難以堅持?；仃栍颀埜喑鲎悦鞔悓嵐λ饪茖Ｖ锻饪普凇罚袦仃柦饽?、活血化痰之功;主治陽虛寒凝之局部腫硬。將其制備成膏劑，局部給藥可避免服用中藥的缺點(diǎn)，因此，本研究構(gòu)建大鼠乳腺增生的模型，考察模型大鼠局部應(yīng)用回陽玉龍膏的療效。

乳腺組織是性腺激素的靶器官，乳腺的生理、病理改變與激素的調(diào)節(jié)關(guān)系十分密切。從發(fā)生發(fā)育，增殖與復(fù)舊的交替，到最終腺體退化，這一系列復(fù)雜的變化，都是在下丘腦－垂體－卵巢軸及其他內(nèi)分泌激素的綜合作用下發(fā)生的。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，乳腺增生病與機(jī)體雌激素水平過高而黃體酮拮抗不足有著密切的關(guān)系。雌激素的過度刺激可使乳腺上皮細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞增生，使結(jié)締組織水、鈉儲留增加，進(jìn)而導(dǎo)致小葉間水腫，雌孕激素平衡失調(diào)，使雌激素長期刺激乳腺組織，而無孕激素的節(jié)制和保護(hù)作用是導(dǎo)致乳腺增生的重要原因［2，6］。

本研究模擬人類乳腺增生癥的發(fā)病機(jī)制，使用苯甲酸雌二醇和黃體酮干預(yù)，成功構(gòu)建了大鼠乳腺增生模型。模型大鼠的乳頭高度、乳房直徑及乳腺組織形態(tài)均發(fā)生變化。經(jīng)過回陽玉龍膏干預(yù)后結(jié)果顯示，與對照組比較，干預(yù)組大鼠乳頭高度以及直徑明顯縮小，且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，此結(jié)果可證明，回陽玉龍膏可以使大鼠乳腺增生程度好轉(zhuǎn)，對乳腺增生癥具有較好的治療作用。此外，通過對兩組大鼠的雌激素水平檢測發(fā)現(xiàn):與對照組比較，回陽玉龍膏能夠使雌二醇 (E2)，泌乳素(PRL)均明顯降低，而孕酮(P)明顯升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，這說明回陽玉龍膏可以影響乳腺增生大鼠的雌激素水平，此可能是回陽玉龍膏治療乳腺增生的機(jī)制之一。與此同時，本研究又對大鼠的肝、腎功能和心肌細(xì)胞進(jìn)行了生化及病理檢測，結(jié)果顯示使用回陽玉龍膏后，模型大鼠的肝、腎功能無明顯變化，無心肌纖維的破壞，細(xì)胞間隙正常，未見水腫。由此可見，回陽玉龍膏對于乳腺增生的大鼠不僅具治療作用，且較為安全，但能否用于臨床治療乳腺增生，尚需進(jìn)一步的臨床研究。

［1］Harvey HA，Kimura M，Hajba A.Toremifene:an evaluation of its safety profile［J］.Breast，2006，15(2):142-157.

［2］黃敏，金維捷，楊曉冬，等.中醫(yī)周期性療法治療乳腺增生癥的研究進(jìn)展［J］.云南中醫(yī)中藥雜志，2013，34(1):78-79.

［3］褚紅梅.中西醫(yī)結(jié)合治療乳腺增生癥2 000例［J］.中國性科學(xué)，2010，19(2):39-40.

［4］高邈.近年來針灸治療乳腺增生癥概況［J］.針灸臨床雜志，2009，25(12):48-51.

［5］Liu XY，F(xiàn)ang H，Yang ZG.Matrine inhibits invasiveness and metastasis of human malignant melanoma cell line A375 in vitro［J］.Int J Der matol，2008，47(5):448-456.

［6］許能.沖任失調(diào)而致乳癖與周期性激素分泌失調(diào)的關(guān)系［J］.上海中醫(yī)藥雜志，1996，7(1):16-17.