星形膠質(zhì)細(xì)胞上調(diào)基因-1在乳腺癌中的表達(dá)及臨床意義

王 偉， 曹蘇生， 鹿存濤， 瞿國峰

乳腺癌是當(dāng)今女性最常見的惡性腫瘤之一，與其他惡性腫瘤一樣，乳腺癌的發(fā)生發(fā)展是一個復(fù)雜的多步驟過程，特征性表現(xiàn)為遺傳學(xué)和表觀遺傳學(xué)改變的漸進(jìn)性累積，并最終導(dǎo)致細(xì)胞生長失控和腫瘤形成。星形膠質(zhì)細(xì)胞上調(diào)基因-1(AEG-1)是一種新近發(fā)現(xiàn)的癌基因，研究發(fā)現(xiàn)其在多種惡性腫瘤中高表達(dá)，且與惡性腫瘤的進(jìn)展、轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)。本研究應(yīng)用免疫組化Envsion法研究乳腺癌組織中AEG-1的表達(dá)水平，并探討其與乳腺癌臨床病理指標(biāo)以及ER、PR和HER-2之間的關(guān)系。

1 資料和方法

1.1 臨床資料 128例乳腺癌均來自我院病理科2008至2012年間手術(shù)切除的存檔蠟塊，均為女性，年齡34～63歲，平均47.4歲。所有病例均為浸潤性導(dǎo)管癌，病理分級采用聯(lián)合分級，其中Ⅰ級36例，Ⅱ級64例，Ⅲ級28例。臨床分期參照AJCC/UICC(2011版)分為Ⅰ期42例，Ⅱ期60例，Ⅲ期26例;有腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者74例，無腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者54例。所有病例術(shù)前均未行任何化療和放療，術(shù)后標(biāo)本均用4%甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，4 μm厚切片。

1.2 主要試劑 鼠抗人AEG-1單克隆抗體為美國SantaCruz產(chǎn)品，鼠抗人ER、PR和HER-2抗體均為美國Dako公司產(chǎn)品，分別購于福州邁新生物技術(shù)公司和北京中杉生物公司。

1.3 方法 免疫組化采用Envision法。切片梯度酒精脫水后，3%H2O2滅活內(nèi)源性生物酶，高壓鍋高溫抗原修復(fù)，抗原修復(fù)液為EDTA，滴加一抗后4℃過夜，蘇木精復(fù)染，中性樹膠封固，鏡下觀察。以已知陽性切片作陽性對照，PBS代替一抗作陰性對照。

1.4 結(jié)果判斷 隨機觀察切片中10個高倍視野，當(dāng)≥25%陽性細(xì)胞表達(dá)AEG-1時判定為AEG-1陽性，ER和PR陽性腫瘤細(xì)胞占所有腫瘤細(xì)胞＞10%時判斷為陽性。HER-2≥30%為過表達(dá)。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)均采用SPSS18.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。AEG-1陽性表達(dá)率與各臨床參數(shù)之間的關(guān)系采用χ2檢驗或精確概率法，AEG-1與ER、PR和 HER-2表達(dá)的相關(guān)性分析采用Spearman等級相關(guān)分析，以P＜0.05被認(rèn)為有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 乳腺癌中AEG-1表達(dá)與臨床病理指標(biāo)之間的關(guān)系(表1) AEG-1表達(dá)于乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)，見圖1。ER和PR定位于細(xì)胞核，HER-2表達(dá)于細(xì)胞膜，見圖2～4。128例乳腺癌中，116例AEG-1表達(dá)陽性，陽性率為90.6%。由表1可知，乳腺癌中AEG-1的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，且隨著臨床分期增高，AEG-1的陽性表達(dá)率也增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均P＜0.05)。乳腺癌中AEG-1的表達(dá)與患者年齡和病理分級無關(guān)(均P＞0.05)。

表1 乳腺癌中AEG-1表達(dá)與臨床病理指標(biāo)之間的關(guān)系

圖1 AEG-1陽性表達(dá)(ELPS，×400)

圖2 ER陽性表達(dá)(ELPS，×400)

圖3 PR陽性表達(dá)(ELPS，×400)

圖4 Her-2陽性表達(dá)(ELPS，×400)

2.2 乳腺癌中AEG-1表達(dá)與ER、PR和HER-2之間的關(guān)系(表2) 116例乳腺癌中，ER陽性者47例，陽性率為40.5%，PR陽性64例，陽性率為55.2%，HER-2過表達(dá)者39例，過表達(dá)率為33.6%。由表2可知，乳腺癌中AEG-1表達(dá)與ER、PR和HER-2過表達(dá)均無相關(guān)性(均P＞0.05)。

3 討論

AEG-1又稱為MTDH、LYRIC和3D3，位于人類染色體8q22上，是近年來發(fā)現(xiàn)的一種新的癌基因［1］。AEG-1 是2002 年Su 等［2］通過快速消減雜交法，在HIV-1感染或用HIVgp120或TNF-α處理的人原始胚胎星形膠質(zhì)細(xì)胞(PHFA)中被發(fā)現(xiàn)的一種新的反應(yīng)基因。研究發(fā)現(xiàn)Ha-ras能通過PI3K/Akt信號通路誘導(dǎo)AEG-1的表達(dá)，TNF-α處理可導(dǎo)致AEG-1和NF-κB移入到細(xì)胞核并在核內(nèi)相互作用，通過活化NF-κB通路，AEG-1能增加HeLa細(xì)胞的錨定非依賴性生長和浸潤能力［3-4］。研究發(fā)現(xiàn)敲除AEG-1可抑制前列腺癌細(xì)胞侵襲性，而AEG-1表達(dá)上調(diào)可增加乳腺癌細(xì)胞的肺轉(zhuǎn)移和膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力［5-6］。肝細(xì)胞癌中，AEG-1可通過活化wnt/β-catenin信號通路介導(dǎo)肝細(xì)胞癌的侵襲［7］。這些研究結(jié)果表明AEG-1通過多種通路參與了多種腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。

表2 乳腺癌中AEG-1表達(dá)與ER、PR和HER-2之間的關(guān)系

AEG-1在乳腺癌中的研究目前國外已有一些文獻(xiàn)報道。Li等［8］研究發(fā)現(xiàn)AEG-1 mRNA和蛋白表達(dá)水平在乳腺癌細(xì)胞系中均高于正常乳腺組織，同時作者還應(yīng)用免疫組化方法研究了乳腺癌組織中AEG-1的表達(dá)，結(jié)果也顯示93.3%乳腺癌組織中AEG-1呈中等到強的胞質(zhì)陽性，而正常組織中未見明顯的AEG-1的表達(dá)，進(jìn)一步分析AEG-1與乳腺癌臨床病理指標(biāo)的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，AEG-1的表達(dá)與乳腺癌的T、N和M分期有關(guān)，而與年齡、ER、PR和HER-2表達(dá)均無關(guān)，AEG-1高表達(dá)的患者總生存時間短，反之則生存時間延長。隨后的研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌中AEG-1的表達(dá)與Ki-67增殖指數(shù)明顯呈正相關(guān)，乳腺癌細(xì)胞系MCF-7和MDA-MB-435中AEG-1異常表達(dá)明顯增強細(xì)胞的增殖能力和錨定非依賴性生長能力，而沉默AEG-1的表達(dá)則抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖和腫瘤細(xì)胞在瓊脂糖上的集落形成能力，其可能機制是AEG-1通過PI3K/Akt信號通路誘導(dǎo)FOXO1磷酸化而下調(diào)其表達(dá)［9］。我們的實驗結(jié)果顯示乳腺癌中AEG-1的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期有關(guān)，淋巴結(jié)陽性乳腺癌組織中AEG-1的表達(dá)明顯高于淋巴結(jié)陰性者，隨著臨床分期增高，AEG-1的表達(dá)明顯增高，這些研究結(jié)果提示乳腺癌中AEG-1的表達(dá)可能是乳腺癌侵襲性強的一個標(biāo)記物，臨床標(biāo)本中檢測AEG-1的表達(dá)水平，可有助于評估乳腺癌的生物學(xué)行為，為臨床選擇治療提供理論依據(jù)。同時，本實驗結(jié)果顯示AEG-1的表達(dá)與乳腺癌患者年齡和病理分級無關(guān)。

Su等［10］研究了正常乳腺組織與乳腺不同增生性病變(普通性導(dǎo)管增生、非典型導(dǎo)管增生、導(dǎo)管原位癌和浸潤性導(dǎo)管癌)中AEG-1的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)正常乳腺組織中AEG-1表達(dá)低或無表達(dá)，而隨著導(dǎo)管內(nèi)增生性病變的進(jìn)展，AEG-1的表達(dá)水平和表達(dá)密度逐漸增強，提示AEG-1可能是乳腺病變預(yù)后的一個新的標(biāo)記物，且可能在乳腺病變的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。作者研究還發(fā)現(xiàn)導(dǎo)管原位癌中AEG-1的表達(dá)高于浸潤性導(dǎo)管癌，進(jìn)一步提示AEG-1表達(dá)可能是在導(dǎo)管癌的啟動中發(fā)揮作用。有研究發(fā)現(xiàn)，在膠質(zhì)瘤中，AEG-1表達(dá)定位于細(xì)胞核，然而，我們的研究結(jié)果顯示，AEG-1的表達(dá)主要定位于細(xì)胞質(zhì)，這與非小細(xì)胞肺癌、肝細(xì)胞癌和食管癌中的研究相似，提示在不同部位的腫瘤中，AEG-1可能通過不同途徑參與了惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展。

最近Zhang等［11］應(yīng)用乳腺癌細(xì)胞系MCF-7進(jìn)行AEG-1的研究，結(jié)果顯示AEG-1過表達(dá)不僅可促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的增殖和侵襲能力，而且還可上調(diào)HER-2的表達(dá)，作者認(rèn)為AEG-1可能是通過上調(diào)HER-2表達(dá)而促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的增殖和侵襲。然而，我們的實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)乳腺癌中AEG-1的表達(dá)與HER-2無關(guān)。這可能是體內(nèi)外實驗的不一致性所致，具體機制尚有待于進(jìn)一步研究。

總之，我們的實驗結(jié)果提示乳腺癌中AEG-1的表達(dá)是乳腺癌具有高侵襲性的一個標(biāo)志物，臨床標(biāo)本中檢測AEG-1的表達(dá)可有助于評估乳腺癌患者的預(yù)后，指導(dǎo)臨床選用合適的治療方法。

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